基于PGGB途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究.pdf

西北植物学报,2 0 2 3,4 3(9):1 4 8 8-1 4 9 8A c t a B o t.B o r e a l.-O c c i d e n t.S i n.d o i:1 0.7 6 0 6/j.i s s n.1 0 0 0-4 0 2 5.2 0 2 3.0 9.1 4 8 8 h t t p:/x b z w x b.a l l j o u r n a l.n e t收稿日期:2 0 2 3-0 4-0 3;修改稿收到日期:2 0 2 3-0 5-2 9基金项目:贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑2 0 1 72 8 1 1号,黔林科合2 0 2 22 7号)作者简介:杨 姣(1 9 9 7-),女,在读硕士研究生,主要从事植物生态学研究。E-m a i l:1 9 2 0 9 8 9 7 3 1q q.c o m*通信作者:杨卫诚,副教授,硕士导师,主要从事动物与生态研究。E-m a i l:y a n g w e i c h e n g 0 9 0 8s i n a.c o m基于P G G B途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究杨 姣,杨卫诚*,吴高殷,车冰洁,梁红飞,周壁波(贵州师范大学 生命科学学院,贵州师范大学喀斯特洞穴研究中心,贵阳 5 5 0 0 2 5)摘 要:为优化桫椤(A l s o p h i l a s p i n u l o s a)快繁体系,提高其繁殖效率,以桫椤孢子为外植体,通过研究不同生长调节剂对孢子诱导配子体、原叶体绿色球状体(p r o t h a l l u s g r e e n g l o b u l a r b o d y,P G G B)诱导、P G G B分化、孢子体生根4个过程的影响,进一步探讨不同基质对桫椤组培苗移栽的成活效果。结果表明,(1)孢子诱导配子体,1/8 M S+0.5 m g/L 6-B A+0.1 m g/L NAA+蔗糖2 0 g/L+琼脂1 0 g/L诱导效果最佳,诱导率6 4.6 2%,诱导天数2 3 d。(2)P G G B诱导,1/2 M S+0.3 m g/L 6-B A+0.4 m g/L NAA+蔗糖3 0 g/L+琼脂6 g/L诱导率达1 0 0%,P G G B鲜重1.1 3 g,增殖倍数1 1.0 4,直径2.0 1 c m。(3)P G G B分化,在1/2 M S+0.3 m g/L K T+0.4 m g/L I B A+蔗糖3 0 g/L+琼脂6 g/L的分化效果最佳,分化率9 2.1 2%,P G G B平均分化芽数4 1.6 7个。(4)孢子体生根,孢子体在1/2 M S+1.0 m g/L I B A+蔗糖3 0 g/L+琼脂6 g/L中的生根率1 0 0%。(5)炼苗,组培苗移栽在基质(红壤腐殖土泥炭土=211)中的成活率为9 6.3%。桫椤P G G B诱导及其再生体系的建立受植物生长调节剂影响,且基质对桫椤组培苗的成活率差异显著。研究成功构建了1个高效的桫椤繁殖再生体系,为进一步探究桫椤体外培养发育机制、新品种、规模生产及应用提供技术支持。关键词:桫椤;原叶体绿色球状体;孢子;配子体;孢子体中图分类号:Q 8 1 3.1文献标志码:AO p t i m i z a t i o n o f T i s s u e C u l t u r e a n d P r o p a g a t i o n S y s t e m o f A l s o p h i l a s p i n u l o s a B a s e d o n P G G B P a t h w a yYANG J i a o,YANG W e i c h e n g*,WU G a o y i n,CHE B i n g j i e,L I ANG H o n g f e i,Z HOU B i b o(I n s t i t u t e o f K a r s t C a v e s,S c h o o l o f L i f e S c i e n c e s,G u i z h o u N o r m a l U n i v e r s i t y,G u i y a n g 5 5 0 0 2 5,C h i n a)A b s t r a c t:T o o p t i m i z e t i s s u e c u l t u r e t e c h n i q u e s o f A l s o p h i l a s p i n u l o s a t o i m p r o v e t h e s u c c e s s r a t e a n d p r o d u c t i v i t y o f t i s s u e c u l t u r e,w e u s e d A.s p i n u l o s a s p o r e s a s e x p l a n t s t o s t u d y t h e e f f e c t s o n t h e f o u r p r o c e s s e s:S p o r e-i n d u c e d g a m e t o p h y t e s b y d i f f e r e n t g r o w t h r e g u l a t o r s,p r o t h a l l u s g r e e n g l o b u l a r b o d y(P G G B)i n d u c t i o n,P G G B d i f f e r e n t i a t i o n a n d s p o r o p h y t e r o o t i n g.I t w a s s t u d i e d t o f u r t h e r e x p l o r e t h e s u r v i v a l e f f e c t s o f d i f f e r e n t s u b s t r a t e s o n t h e t r a n s p l a n t a t i o n o f A.s p i n u l o s a t i s s u e c u l t u r e s e e d l i n g s.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t,(1)s p o r e-i n d u c e d g a m e t o p h y t e s,t h e b e s t i n d u c t i o n m e d i u m w a s 1/8 M S+0.5 m g/L 6-B A+0.1 m g/L NAA+s u c r o s e 2 0 g/L+a g a r 1 0 g/L,w i t h a n i n d u c t i o n r a t e o f 6 4.6 2%a n d i n d u c t i o n d a y s o f 2 3 d.(2)P G G B i n d u c t i o n,t h e i n d u c t i o n r a t e o f 1/2 M S+0.3 m g/L 6-B A+0.4 m g/L NAA+s u-c r o s e 3 0 g/L+a g a r 6 g/L r e a c h e d 1 0 0%,t h e f r e s h w e i g h t o f P G G B w a s 1.1 3 g,t h e m u l t i p l i c a t i o n r a t i o w a s 1 1.0 4 a n d t h e d i a m e t e r w a s 2.0 1 c m.(3)P G G B d i f f e r e n t i a t i o n,t h e b e s t d i f f e r e n t i a t i o n r e s u l t w a s o b t a i n e d a t 1/2 M S+0.3 m g/L K T+0.4 m g/L I B A+s u c r o s e 3 0 g/L+a g a r 6 g/L,w i t h a d i f f e r e n t i a t i o n r a t e o f 9 2.1 2%a n d a P G G B a v e r a g e o f 4 1.6 7 d i f f e r e n t i a t e d b u d s.(4)S p o r o p h y t e r o o t i n g,t h e r o o t i n g r a t e o f s p o r e s i n 1/2 M S+1.0 m g/L I B A+s u c r o s e 3 0 g/L+a g a r 6 g/L w a s 1 0 0%.(5)A c c l i m a t i z a t i o n,t h e s u r v i v a l r a t e o f t i s s u e c u l t u r e s e e d l i n g s t r a n s p l a n t e d i n t h e s u b s t r a t e(r e d s o i l H u m u s s o i l P e a t s o i l=2 11)w a s 9 6.3%.T h e e s t a b l i s h m e n t o f A.s p i n u l o s a P G G B i n d u c t i o n a n d r e g e n e r a t i o n s y s t e m w a s a f f e c t e d b y p l a n t g r o w t h r e g u l a t o r s,a n d t h e s u r v i v a l r a t e o f t i s s u e c u l t u r e s e e d l i n g s w a s s i g n i f i c a n t l y d i f-f e r e n t.T h i s s t u d y s u c c e s s f u l l y c o n s t r u c t e d a n e f f i c i e n t r e p r o d u c t i o n a n d r e g e n e r a t i o n s y s t e m o f A.s p i n u-l o s a,p r o v i d i n g t e c h n i c a l s u p p o r t f o r f u r t h e r e x p l o r i n g t h e d e v e l o p m e n t m e c h a n i s m o f A.s p i n u l o s a i n v i t r o c u l t u r e,n e w s p e c i e s,l a r g e-s c a l e p r o d u c t i o n,a n d a p p l i c a t i o n o f A.s p i n u l o s a i n s o i l m a t r i x.K e y w o r d s:A l s o p h i l a s p i n u l o s a;p r o t h a l l u s g r e e n g l o b u l a r b o d y;s p o r e s;g a m e t o p h y t e;s p o r o p h y t e 桫 椤(A l s o p h i l a s p i n u l o s a)属 桫 椤 科(C y a-t h e a c e a e)桫椤属(A l s o p h i l a),国家二级保护植物,现存唯一的木本蕨类植物,主要生长于温暖潮湿的热带及亚热带地区,中国主要分布于贵州、重庆、四川等地1。外形上,桫椤树形高雅飘逸、青翠碧绿,特别是排列整齐的孢子囊群是自然界的奇特景观。桫椤茎、叶含有丰富的黄酮、多酚、多糖、有机酸等活性物质,具有较高的观赏价值和药用价值,运用及开发潜力大2-5。然而,桫椤营养叶易被桫椤叶蜂(R h o p t r o c e r-o s c y a t h e a e)和绿带妒尺蛾(P h t h o n o l b a v i r i d i f a s c i a t a)幼虫取食和破坏,且其孢子繁殖周期长,生长缓慢。野外调查发现地质表层桫椤幼苗极少,自然更新困难,极大地限制了桫椤种群的发展6。植物组织培养技术作为一种高效的无性繁殖方法,具有繁殖周期短、繁殖效率高和不受季节限制等特点。原叶体绿色球状体(p r o t h a l l u s g r e e n g l o b u l a r b o d y,P G-G B)是由原叶体不断增殖形成似球状的特殊结构。蕨类植物组织培养中可通过P G G B途径建立高效的繁殖体系,通过相应的生长调节剂及浓度来实现该途径。张港隆等通过芒萁(D i c r a n o p t e r i s p e d a t a)孢子诱导萌发的原叶体在6-B A与K T的组合下成功诱导出P G G B,实现P G G B高效增殖,建立了稳定、高效的芒萁繁殖体系7。朗月婷等8以阴生桫椤(A l-s o p h i l a l a t e b r o s a)、大叶黑桫椤(A l s o p h i l a g i g a n t-e a)和侯梦丹等9以桫椤孢子为外植体,通过不同生长调节剂及比例初步建立其繁殖体系。但孢子萌发率、分化率和生根率均较低,其技术尚未成熟,未能得以推广应用。本文在前人研究基础上进一步优化桫椤孢子萌发条件、配子体增殖、分化以及组培苗移栽等过程,以期构建1个高效的桫椤再生繁殖体系,为进一步探究桫椤体外培养发育机制、新品种培育、规模生产及应用提供技术支持。1 材料和方法1.1 桫椤孢子采集与保存2 0 2 1年9月在贵州赤水桫椤国家级自然保护区(1 0 9 4 5 1 0 6 0 3 E,2 8 2 3 2 8 2 7 N,海 拔4 9 7.0 1 m)采集单株成熟桫椤孢子,将采集的孢子标记采集时间、地点后密封放入4 冰箱保存备用。1.2 桫椤孢子预处理与无菌孢子获取试验前对孢子浸泡1 2 h后消毒,无菌孢子获取参照郎月婷等8的方法,制成无菌孢子悬浮液。1.3 桫椤孢子诱导配子体将无菌孢子悬浮液接种至1/8 M S(大量元素浓度为M S的1/8,铁盐、微量元素、有机物浓度与M S等量)基本培养基中,培养基中添加蔗糖2 0 g/L,琼脂1 0 g/L,6-B A(0.5,1.0,1.5 m g/L),NAA(0.0 5,0.1 0,0.2 0,0.3 0 m g/L),以不添加植物生长调节剂作为空白,每皿接种无菌悬浮液4 0 0 L,每个处理接种3皿,重复3次。培养条件:温度(2 52),光照强度为3 0 0 0 l x,1 2 h/d,每周观察1次(下同),3 0 d后记录诱导率。在O L YMP U S S Z体式显微镜(奥林巴斯(深圳)工业有限公司)下任取1 0个视野观察、记录桫椤孢子诱导配子体情况。1.4 桫椤配子体诱导P G G B把处于蝶形原叶体时期的配子体切割成4 mm4 mm方块,鲜重约0.1 0 2 g接种至1/2 M S培养基中,添加6-B A(0.2,0.3,0.5 m g/L),NAA(0.2,0.4,0.6 m g/L),两两对应组合,蔗糖3 0 g/L,琼脂6 g/L,以不添加植物生长调节剂作为空白,p H 5.8。每组处理接种1 0瓶,每瓶接种4个配子体,重复3次。培养2个月后,统计P G G B的诱导率、鲜重、直径以及球状体的颜色与长势情况。1.5 桫椤P G G B分化将诱导成功的P G G B分割成直径约为1.2 c m的小球接种于1/2 M S培养基,加入K T(0.3,0.5,0.7 m g/L)、I B A(0.1,0.2,0.3,0.4 m g/L)、蔗糖3 0 g/L、琼脂6 g/L,以不添加植物生长调节剂作为空白,p H 5.8。每隔1 5 d用消毒后的喷壶在P G G B表面喷施无菌水0.3 m L。每组接种1 0瓶,每瓶接种3个,重复3次。培养1个月后统计P G G B分化98419期 杨 姣,等:基于P G G B途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究率、分化的茎芽数,孢子体长势与颜色。1.6 桫椤孢子体生根将孢子体接种在1/2 M S培养基中,添加蔗糖3 0 g/L、琼脂6 g/L、I AA(0.3,0.5,0.7,1.0 m g/L)和I B A(0.3,0.5,0.7,1.0 m g/L),以不添加植物生长调节剂作为空白,p H 5.8。每组接种3 0瓶,每瓶接种1个,重复3次,培养1个月后统计生根情况。1.7 桫椤组培苗练苗、移栽培养将高为5 c m以上的桫椤再生植株在人工气候室进行驯化,练苗1周后移栽至不同灭菌后基质(表1)中,并用保鲜膜覆盖。每组移栽3 0株,重复3次。每周观察桫椤组培苗的生长情况,培养3 0 d,统计组培苗成活率。炼苗培养条件:温度(2 42),湿度(8 92)%,光质为白光,光照周期为1 6 h/d。1.8 数据收集与统计分析用E x c e l 2 0 2 1和S P S S统计分析数据,O r i g i n作图。数据以平均值标准误差表示,采用单因素检验进行方差分析,显著性水平P0.0 5。配子体诱导率=视野里诱导形成的配子体数/视野里总的孢子数1 0 0%;P G G B诱导率=诱导形成的P G G B数/接种总数1 0 0%;P G G B分化率=分化的P G G B数/接种总数1 0 0%;生根率=生根的孢子体数/接种的孢子体总数1 0 0%;成活率=成活的桫椤试管苗/移栽的桫椤试管苗1 0 0%;增殖倍数=P G G B的鲜重/0.1 0 2,0.1 0 2是配子体诱导P G G B前的初始鲜重(g)。表1 不同的土壤基质及体积比例T a b l e 1 D i f f e r e n t s o i l s u b s t r a t e s a n d v o l u m e p r o p o r t i o n s处理号N o.基质组合M a t r i x c o m b i n a t i o n体积比例V o l u m e p r o p o r t i o nC K红壤(原生境土)R e d s o i l(P r i m a r y e n v i r o n m e n t a l s o i l)1C 1黄壤(菜园土)Y e l l o w s o i l(V e g e t a b l e g a r d e n s o i l)1C 2泥炭土 P e a t s o i l1C 3红壤腐殖土R e d s o i l H u m u s s o i l11C 4黄壤腐殖土Y e l l o w s o i l H u m u s s o i l11C 5红壤泥炭土R e d s o i l P e a t s o i l11C 6黄壤泥炭土Y e l l o w s o i l P e a t s o i l11C 7泥炭土腐殖土P e a t s o i l H u m u s s o i l11C 8红壤腐殖土泥炭土R e d s o i l H u m u s s o i l P e a t s o i l211C 9黄壤腐殖土泥炭土Y e l l o w s o i l H u m u s s o i l P e a t s o i l2112 结果与分析2.1 桫椤孢子组织培养过程的形态特征桫椤孢子(图1,A)接种于培养基上2 0 d后变绿,诱导形成配子体。首先是绿色细胞增殖发育成丝状体(图1,B),丝状体不断生长发育形成片状体(图1,C)、蝶形原叶体(图1,D)、成熟配子体(图1,E)。配子体后期诱导成P G G B团(图1,F),随P G-G B增殖,其配子体腹面上的精子器(图1,G)与生长点上的颈卵器(图1,H)不断发育成熟,经喷施无菌水后,促进受精过程,而生长出无拳卷的叶、叶脉呈二叉状分枝形成孢子体(图1,I),在生根培养基上诱导孢子体生根,并将桫椤再生植株移栽在基质中(图1,J、图1,K和图1,L)。2.2 桫椤孢子诱导配子体不同植物生长调节剂对配子体诱导率、诱导时间差异显著(P0.0 5)(表2)。同一NAA浓度下,配子体诱导率随6-B A浓度升高逐渐下降,诱导时间延长。同一6-B A浓度下,配子体诱导率随NAA浓度升高整体上呈先升高后降低的趋势,在高浓度6-B A中诱导时间延长,然而,在L 2中诱导率最高(6 4.6 2%),诱导时间最少(2 3 d),均与C K差异显著(P0.0 5)。表2 不同生长调节剂浓度组合对桫椤孢子诱导配子体的影响T a b l e 2 E f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n c o m b i n a t i o n s o f g r o w t h r e g u l a t o r s o n t h e i n d u c t i o n o f g a m e t o p h y t e s b y s p o r e s o f A.s p i n u l o s a处理号N o.激素组合H o r m o n e c o m b i n a t i o n/(m g/L)6-B ANAA诱导率I n d u c t i o n r a t e/%诱导时间I n d u c t i o n t i m e/dL 10.50.0 55 3.0 50.0 6 7 b c2 7.0 01.0 0 0 bL 20.50.1 06 4.6 20.0 3 6 a2 3.0 00.0 0 0 aL 30.50.2 05 9.5 00.0 7 4 a b2 5.3 31.0 4 1 bL 40.50.3 04 8.3 10.0 2 1 b c d2 6.0 00.0 0 0 bL 51.00.0 55 1.9 90.0 1 3 b c d3 2.8 31.2 5 8 c dL 61.00.1 05 2.8 20.0 6 8 b c3 3.0 00.8 6 6 c dL 71.00.2 05 0.0 70.0 3 3 b c d3 4.8 31.7 5 6 dL 81.00.3 04 7.3 80.0 4 0 c d e3 4.5 01.5 0 0 c dL 91.50.0 53 6.7 30.0 3 8 e f3 5.0 00.5 0 0 dL 1 01.50.1 04 0.7 00.0 7 1 d e f3 8.3 30.7 6 4 eL 1 11.50.2 03 3.9 10.1 4 5 f4 2.0 00.8 6 6 fL 1 21.50.3 03 6.6 20.0 3 2 e f4 2.5 01.0 0 0 fC K004 8.2 20.0 0 8 b c d3 2.3 33.3 2 9 c注:同列不同小写字母表示差异显著(P0.0 5)。下同。N o t e:D i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s i n t h e s a m e c o l u m n i n d i c a t e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P0.0 5),均显著高于C K(P0.0 5),其增殖倍数、鲜重差异显著(P0.0 5)。同一6-B A浓度下,随着NAA浓度上升,P G G B鲜重、P G-G B直径、P G G B增殖倍数均整体下降;同一NAA浓度下,6-B A的浓度上升,P G G B鲜重、P G G B直径、P G G B增殖倍数整体呈现上升趋势。其中,Z 5组P G G B鲜重、P G G B直径、P G G B增殖倍数最高,并且与C K有显著差异(P0.0 5,见表3)。因此,选取1/2 M S+0.3 m g/L 6-B A+0.4 m g/L NAA作为配子体诱导P G G B适宜培养基。图2 Z 1Z 9对应不同培养基下诱导成功的P G G BF i g.2 Z 1-Z 9 P G G B s u c c e s s f u l l y i n d u c e d i n d i f f e r e n t m e d i a19419期 杨 姣,等:基于P G G B途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究2.4 植物生长调节剂对P G G B分化的影响将P G G B转接至H 1H 1 2分化培养基中,其分化率、总茎芽数、株高、茎叶长以及宽均具显著差异(P0.0 5)(图3、表4)。随着K T浓度增加,分化率、分化茎芽数、株高、茎叶的长及宽总体上呈现先增加后减少。当K T浓度小于0.5 m g/L时,P G-G B分化率、分化茎芽数随着I B A浓度升高而增加;相反,当K T浓度大于0.5 m g/L时,其随I B A浓度升高而降低。综上所述,P G G B在H 4组(1/2 M S+0.3 m g/L K T+0.4 m g/L I B A)培养基中的分化率、总茎芽数、株高、茎叶的长及宽是最好的,并且与C K均有显著性差异(P0.0 5)。表3 不同生长调节剂浓度组合对P G G B诱导增殖的影响T a b l e 3 E f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n c o m b i n a t i o n s o f g r o w t h r e g u l a t o r s o n P G G B i n d u c e d p r o l i f e r a t i o n处理号N o.激素组合H o r m o n e c o m b i n a t i o n/(m g/L)6-B ANAAP G G B诱导率P G G B i n d u c t i o n r a t e/%P G G B增殖倍数P G G B m u l t i p l i c a t i o n f a c t o rP G G B直径P G G B d i a m e t e r/c mP G G B鲜重P G G B f r e s h w e i g h t/gZ 10.20.21 0 0.0 00.0 0 0 a9.1 21.8 6 5 a b c d1.9 60.2 3 1 a0.9 30.1 9 0 a b c dZ 20.20.41 0 0.0 00.0 0 0 a8.5 51.6 6 6 b c d1.9 40.1 1 1 a b0.8 70.1 7 0 b c dZ 30.20.61 0 0.0 00.0 0 0 a7.4 61.0 1 2 d1.7 00.2 3 1 b0.7 60.1 0 3 dZ 40.30.21 0 0.0 00.0 0 0 a8.8 80.7 3 8 b c d1.9 80.0 9 2 a0.9 10.0 7 5 b c dZ 5 0.30.41 0 0.0 00.0 0 0 a1 1.0 41.4 4 5 a2.0 10.0 3 1 a1.1 30.1 4 7 aZ 60.30.61 0 0.0 00.0 0 0 a8.9 40.8 3 4 b c d1.9 30.0 9 5 a b0.9 10.0 8 5 b c dZ 70.50.21 0 0.0 00.0 0 0 a1 0.0 50.3 6 4 a b1.9 60.0 4 0 a1.0 20.0 3 7 a bZ 80.50.41 0 0.0 00.0 0 0 a9.6 00.8 8 0 a b c1.9 10.0 6 4 a b0.9 80.0 9 0 a b cZ 90.50.61 0 0.0 00.0 0 0 a9.5 80.1 0 8 a b c1.9 10.0 7 6 a b0.9 80.0 1 1 a b cC K004 7.0 00.0 4 5 8 b7.5 60.7 2 9 c d1.7 00.1 1 1 b0.7 70.0 7 4 c d图3 H 1H 1 2对应不同的培养基的P G G B分化F i g.3 P G G B d i f f e r e n t i a t i o n o f H 1-H 1 2 c o r r e s p o n d i n g t o d i f f e r e n t d i f f e r e n t i a t i o n m e d i a2941西 北 植 物 学 报 4 3卷表4 不同生长调节剂浓度组合对P G G B分化率、总茎芽、株高、茎长及茎宽的影响T a b l e 4 E f f e c t s o f d i f f e r e n t g r o w t h r e g u l a t o r c o n c e n t r a t i o n c o m b i n a t i o n s o n P G G B d i f f e r e n t i a t i o n r a t e,d i f f e r e n t i a t e d t o t a l s h o o t s,p l a n t h e i g h t,s t e m l e g t h a n d s t e m w i d t h处理号N o.激素组合H o r m o n e c o m b i n a t i o n/(m g/L)KTI B A分化率D i f f e r e n t i a t i o n r a t e/%总茎芽数T o t a l n u m b e r o f s t e m s a n d b u d s 株高H e i g h t/c m茎芽长S t e m b u d l e n g t h/c m茎芽宽S t e m b u d w i d t h/c mH 10.30.15 7.7 40.1 7 5 b c1 7.6 75.5 0 8 c d 1.8 30.1 3 6 a b1.3 70.2 1 6 a b0.9 30.1 6 3 a b cH 20.30.27 4.7 40.0 3 2 a b c3 8.6 77.2 3 4 a b1.9 30.0 9 9 a b1.3 20.0 7 2 a b1.0 10.0 8 1 a bH 30.30.38 5.9 30.0 7 1 a b3 7.0 07.0 0 0 a b2.1 00.0 4 0 a1.6 00.2 6 0 a0.9 70.0 6 4 a bH 40.30.49 2.1 20.0 6 9 a4 1.6 78.1 4 5 a2.1 30.2 3 7 a1.6 20.2 9 5 a1.1 20.1 0 6 aH 50.50.17 7.0 40.2 3 3 a b c3 8.6 76.0 2 8 a b1.8 30.0 6 4 a b1.0 90.2 0 5 a b0.8 30.2 0 0 a b cH 60.50.27 3.3 30.2 3 1 a b c3 3.3 32 0.4 2 9 a b c1.8 80.2 5 1 a b1.1 80.1 9 1 a b0.9 00.1 0 6 a b cH 70.50.36 3.5 40.0 7 9 a b c2 8.0 01 9.6 7 2 a b c1.9 10.1 6 0 a b0.9 90.1 1 7 b0.8 10.1 6 0 a b cH 80.50.46 0.0 00.1 7 9 b c3 7.0 08.7 1 8 a b1.8 30.0 4 2 a b0.9 70.1 4 5 b0.7 90.0 3 1 a b cH 90.70.16 3.8 90.1 5 1 a b c3 3.0 03.0 0 0 a b c1.8 40.2 2 3 a b0.8 60.2 1 6 b0.6 90.2 0 4 b cH 1 00.70.25 9.8 40.1 4 8 b c3 1.3 32.0 8 2 a b c1.7 90.0 4 2 b0.8 50.1 2 1 b0.6 90.0 9 2 b cH 1 10.70.35 7.1 80.0 6 3 b c3 0.0 04.0 0 0 a b c1.7 50.1 5 0 b0.8 60.1 0 6 b0.5 90.1 0 3 cH 1 20.70.44 8.8 90.2 5 2 c9.0 04.5 8 3 d1.7 10.2 7 7 b0.8 50.2 3 4 b0.7 20.0 8 7 b cC K005 3.8 80.0 6 7 c2 2.6 72.5 1 7 b c d0.9 50.0 6 4 c1.0 90.3 6 5 a b0.9 10.0 5 0 a b cF 3、F 4孢子体诱导根有分支、有根毛。图4 F 1F 8对应不同的生根培养基的桫椤孢子体生根情况F 3 a n d F 4 s p o r o z o i t e s i n d u c e b r a n c h e d,r o o t h a i r s.F i g.4 F 1-F 8 S p o r o p h y t i c r o o t i n g o f A.s p i n u l o s a c o r r e s p o n d i n g t o d i f f e r e n t r o o t i n g m e d i a2.5 生长调节剂对桫椤孢子体生根及生长发育的影响 将分化的的桫椤孢子体接种于F 1F 8生根诱导培养基中,其生根率均为1 0 0%(表5),显著高于C K(3 3.3%)(P0.0 5)(表6)。由此可知,H 4组(1/2 M S+1.0 m g/L I B A)是桫椤孢子体最适合的生根诱导及生长发育培养基(图4)。39419期 杨 姣,等:基于P G G B途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究表5 不同生长调节剂浓度组合对桫椤孢子体生根的影响T a b l e 5 E f f e c t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n c o m b i n a t i o n s o f g r o w t h r e g u l a t o r s o n t h e r o o t i n g o f A.s p i n u l o s a s p o r o p h y t e处理号N o.激素组合H o r m o n e c o m b i n a t i o n/(m g/L)I B AI AA生根率R o o t i n g r a t e/%根数N u m b e r o f r o o t s根长R o o t l e n g t h/c mF 10.301 0 0.0 00.0 0 0 a3.6 31.4 0 1 a b2.5 11.2 4 8 aF 20.501 0 0.0 00.0 0 0 a4.4 31.1 5 0 a b2.5 60.4 2 9 aF 30.701 0 0.0 00.0 0 0 a5.1 01.5 7 2 a b2.5 80.4 2 5 aF 4101 0 0.0 00.0 0 0 a5