SN∕T 5443-2022 出口植物源食品中氟吡禾灵、氟吡禾灵酯(含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法.pdf

I C S6 7. 0 5 0C C SX 0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 4 4 32 0 2 2 出口植物源食品中氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的测定 液相色谱-质谱 / 质谱法D e t e r m i n a t i o n o f h a l o x y f o p, h a l o x y f o p - e s t e r s(i n c l u d i n g h a l o x y f o p - p - m e t h y l) a n d c o n j u g a t e s r e s i d u e i n p l a n t - o r i g i n a t e d f o o d s t u f f s f o r e x p o r tL C - M S/M S m e t h o d2 0 2 2 - 0 3 - 1 4发布2 0 2 2 - 1 0 - 0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言本文件按照G B/T 1. 12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分: 标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位: 中华人民共和国贵阳海关、 中华人民共和国南京海关、 贵州省产品质量检验检测院、 贵州轻工职业技术学院、 贵州省食品药品检验所。 本文件主要起草人: 王兴宁、 李洁、 戴唯、 黄家岭、 李志、 朱明、 王涛、 赵增运、 曹桂红、 蔡秋、 唐亚峰、梁艺馨、 王缅、 李巧、 耿平兰、 桑小东、 冉茂乾。S N/T5 4 4 32 0 2 2出口植物源食品中氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的测定 液相色谱-质谱/ 质谱法1 范围本文件规定了出口植物源食品中氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于出口大米、 小麦、 葵花籽、 茶叶、 柠檬、 柑橘、 马铃薯、 结球甘蓝、 豌豆、 洋葱、 甜菜、 咖啡豆和菜籽油中氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中, 注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。 G B/T 6 0 12 0 1 6 化学试剂标准滴定溶液的制备 G B 2 7 6 32 0 2 1 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法3 术语与定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法原理 试样中残留的氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物用乙腈萃取, 再加入碱性溶液使氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物水解为氟吡禾灵, 经分散固相萃取净化, 液相色谱-串联质谱仪检测, 内标法定量测定氟吡禾灵, 结果以氟吡禾灵或氟吡甲禾灵计。5 试剂和材料 注: 除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T 6 6 8 2规定的一级水。5. 1 乙腈(CH3C N) : 色谱纯。5. 2 甲酸(CH2O2) : 色谱纯。5. 3 氢氧化钠 (N a OH) 。5. 4 硫酸 (H2S O4) :9 8%。5. 5 无水硫酸镁 (M g S O4) : 经 6 5 0 灼烧4 h, 保存在干燥器中。5. 6 乙酸钠 (C2H3N a O2) 。1S N/T5 4 4 32 0 2 25. 7 十八烷基硅烷(C1 8) 吸附剂:4 0 m1 0 0 m。5. 8 石墨化碳黑(G C B) 吸附剂:4 0 m1 0 0 m。5. 9 0. 1%甲酸溶液: 量取1 m L甲酸溶解于水中, 并定容至1 0 0 0 m L。5. 1 0 5 m o l/L氢氧化钠溶液: 称取2 0 0 g氢氧化钠(5. 3) , 用水溶解并定容至1 0 0 0 m L。5. 1 1 2. 5 m o l/L 硫酸溶液: 量取1 3 5. 9 m L硫酸(5. 4) 缓缓注入含有5 0 0 m L水的烧杯中并不断搅拌混匀, 冷却后转移至1 0 0 0 m L容量瓶中, 用水稀释定容至刻度。5. 1 2 标准物质: 氟吡禾灵(H a l o x y f o p) 标准品:C A S号6 9 8 0 6 - 3 4 - 4, 纯度 大于9 8%; 氟吡甲 禾灵(H a l o x y f o p - p - m e t h y l) 标准品:C A S号6 9 8 0 6 - 4 0 - 2, 纯度大于9 8%; 氟吡禾灵同位素标记内标(H a l o x y -f o p - d 4) 标准品:C A S号1 2 7 8 9 3 - 3 4 - 9, 纯度大于9 8%。5. 1 3 标准溶液5. 1 3. 1 氟吡禾灵标准储备溶液: 准确称取适量氟吡禾灵标准品, 精确至0. 1 m g, 经乙腈溶解、 稀释并定容至1 0 m L, 配制成浓度为 1 m g/m L 的标准储备溶液, 此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存 6个月。5. 1 3. 2 氟吡甲禾灵标准储备溶液: 准确称取适量氟吡甲禾灵标准品, 精确至0. 1 m g, 经乙腈溶解、 稀释并定容至1 0 m L, 配制成浓度为1 m g/m L 的标准储备溶液, 此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存 6个月。5. 1 3. 3 氟吡禾灵同位素标记内标储备溶液: 准确称取适量氟吡禾灵同位素标记内标标准品, 精确至0. 1 m g, 经乙腈溶解、 稀释并定容至1 0 m L, 配制成浓度为1 m g/m L 的内标储备溶液。此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存 6个月。5. 1 3. 4 氟吡禾灵标准中间溶液: 根据需要逐级稀释标准储备溶液, 配制成1 0 m g/L浓度的标准中间溶液, 此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存1个月。5. 1 3. 5 氟吡甲禾灵标准中间溶液: 根据需要逐级稀释标准储备溶液, 配制成1 0 m g/L浓度的标准中间溶液, 此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存1个月。5. 1 3. 6 氟吡禾灵同位素标记内标中间溶液: 根据需要逐级稀释标准储备溶液, 配制成1 0 m g/L浓度的标准中间溶液, 此溶液在-1 8 以下避光条件下可储存1个月。5. 1 4 微孔滤膜:0. 2 2 m, 有机系。6 仪器和设备6. 1 液相色谱-质谱/质谱联用仪: 配电喷雾离子源(E S I源) 。6. 2 涡旋混合器。6. 3 电子天平( 感量为0. 1 m g和0. 0 1 g) 。6. 4 组织捣碎机。6. 5 粉碎机: 最高转速5 0 0 0 r/m i n。6. 6 离心机。6. 7 螺旋盖聚丙烯离心管:5 0 m L和2 m L。6. 8 恒温超声波水浴振荡器。2S N/T5 4 4 32 0 2 27 试样制备与保存7. 1 试样制备7. 1. 1 低含水量样品 大米、 葵花籽、 茶叶、 咖啡豆等样品, 取有代表性样品约5 0 0 g, 用粉碎机粉碎, 混匀, 装入洁净容器,密封并标明标记。7. 1. 2 高含水量样品 柠檬、 柑橘、 马铃薯、 结球甘蓝、 豌豆、 洋葱、 甜菜等样品, 取有代表性样品约5 0 0 g( 不可用水洗涤) ,将其按照G B 2 7 6 32 0 2 1中表A. 1食品类别及测定部位切碎后, 用组织捣碎机将样品加工成浆状, 装入洁净容器, 密封并标明标记。7. 1. 3 油脂类样品 菜籽油样品取约2 0 0 m L样品混匀后, 装入洁净容器, 密封并标明标记。7. 2 试样保存 大米、 葵花籽、 茶叶、 咖啡豆、 菜籽油等试样于阴凉、 干燥的室温条件下保存; 柠檬、 柑橘、 马铃薯、 结球甘蓝、 豌豆、 洋葱、 甜菜等试样于-1 8 避光保存。8 测定步骤8. 1 提取8. 1. 1 低含水量样品 大米、 小麦、 葵花籽、 茶叶、 咖啡豆等样品, 准确称取5 g( 精确至0. 0 1 g) 试样于5 0 m L螺旋盖聚丙烯离心管中( 茶叶称取2 g) , 加入5 0 L内标中间液(5. 1 3. 6) 。加入1 0 m L水, 涡旋混合器上混合1 m i n, 静置3 0 m i n。加入1 0 m L乙腈和2 m L 5 m o l/L氢氧化钠溶液(5. 1 0) 涡旋混匀, 置于4 0 水浴中超声3 0 m i n。加入2 m L 2. 5 m o l/L硫酸溶液(5. 1 1) 涡旋混匀, 加入6 g无水硫酸镁(5. 5) 和1. 5 g 乙酸钠(5. 6) , 剧烈震荡2 m i n后,5 0 0 0 r/m i n离心5 m i n使之分层。将上层乙腈转移至3 0 m L氮吹管中, 再加入1 0 m L乙腈重复提取一次, 收集所有提取液于4 0 氮吹至少于1 0 m L, 用乙腈定容于1 0 m L容量瓶中, 待净化。8. 1. 2 高含水量样品 柠檬、 柑橘、 马铃薯、 结球甘蓝、 豌豆、 洋葱、 甜菜等样品, 准确称取5 g( 精确至0. 0 1 g) 试样于5 0 m L螺旋盖聚丙烯离心管中, 加入5 0 L内标中间液(5. 1 3. 6) 。加入1 0 m L乙腈和2 m L 5 m o l/L氢氧化钠溶液(5. 1 0) 涡旋混匀, 置于4 0 水浴中超声3 0 m i n。后续步骤同8. 1. 1。8. 1. 3 油脂类样品 菜籽油样品, 准确称取5 g( 精确至0. 0 1 g) 试样于5 0 m L螺旋盖聚丙烯离心管中, 加入5 0 L内标中间液(5. 1 3. 6) 。加入1 0 m L乙腈和2 m L 5 m o l/L氢氧化钠溶液(5. 1 0) 涡旋混匀, 置于4 0 水浴中超声3 0 m i n。后续步骤同8. 1. 1。3S N/T5 4 4 32 0 2 28. 2 净化 将8. 1待净化的样品提取液1. 5 m L转移到事先装有1 5 0 m g 无水硫酸镁(5. 5) 、5 0 m g C 1 8(5. 7)吸附剂和5 0 m g G C B(5. 8) 吸附剂的2 m L微型螺旋盖聚丙烯离心管中, 在涡旋混合器上混合1 m i n, 6 0 0 0 r/m i n离心5 m i n, 上清液过0. 2 2 m 滤膜(5. 1 4) , 供液相色谱-质谱/质谱测定。8. 3 标准曲线的制备 取5支1 0 m L容量瓶, 分别加入氟吡禾灵标准中间液(5. 1 3. 4) 和氟吡甲禾灵标准中间液(5. 1 3. 5)5. 0 L、1 0 L、5 0 L、1 0 0 L、5 0 0 L, 再各加入5 0 L氟吡禾灵同位素标记内标中间溶液(5. 1 3. 6) , 用乙腈(5. 1) 稀释至刻度, 即得5. 0 n g/m L、1 0 n g/m L、5 0 n g/m L、1 0 0 n g/m L、5 0 0 n g/m L( 含内标5 0 n g/m L) 混合系列标准溶液。8. 4 测定8. 4. 1 液相色谱-质谱/质谱条件液相色谱-质谱/质谱条件如下:a) 色谱柱:C1 8柱,2. 1 mm5 0 mm, 1. 7 m或相当者;b) 流动相: 乙腈+0. 1%甲酸水溶液, 梯度洗脱程序见表1;c) 流速:0. 2 m L/m i n;d) 进样量:1 0 L;e) 柱温:4 0 ;f) 电离方式:E S I+;g) 扫描方式: 多反应监测模式(MRM) ;h) 其他参考质谱条件参见附录 A。表1 液相色谱梯度洗脱程序时间/m i n流速/ (m L/m i n)乙腈/%0. 1%甲酸水溶液/%0. 0 00. 2 0 01 0. 09 0. 03. 0 00. 2 0 05 0. 05 0. 07. 0 00. 2 0 07 5. 02 5. 07. 1 00. 2 0 01 0. 09 0. 01 0. 00. 2 0 01 0. 09 0. 08. 4. 2 液相色谱-质谱/质谱检测和确证8. 4. 2. 1 定性测定 在相同实验条件下, 样品中待测物质的保留时间与标准溶液的保留时间在2. 5%之内; 待测化合物定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3(S/N3) ; 每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子, 且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度相近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较, 相对丰度偏差不超过表2规定的范围, 则可判定为样品中存在对应的待测化合物。4S N/T5 4 4 32 0 2 2表2 使用定性液相色谱-质谱/质谱时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度/%5 02 05 01 02 01 0允许的相对偏差/%2 02 53 05 08. 4. 2. 2 定量测定 内标法定量: 将标准溶液和试样溶液等体积进行测定, 以标准溶液中氟吡禾灵和氟吡甲禾灵的浓度为横坐标, 以定量离子质量色谱峰面积与内标离子质量色谱峰面积的比值为纵坐标, 内标曲线法定量,计算试样溶液中氟吡禾灵和氟吡甲禾灵的浓度。氟吡禾灵和同位素内标的保留时间为5. 7 8 m i n, 氟吡甲禾灵的保留时间为6. 9 0 m i n。氟吡禾灵、 氟吡甲禾灵及同位素内标标准物质的液相色谱-质谱/质谱图参见图B. 1。8. 4. 2. 3 水解效率监测 样品溶液色谱图中应无氟吡甲禾灵色谱峰或其响应值低于检出限水平的响应值, 否则说明样品水解不完全, 该批样品需重新进行检测。8. 5 空白试验 除不加试样外, 均按上述测定条件和步骤进行。9 结果计算和表述9. 1 以氟吡禾灵计的结果计算 按式(1) 计算试样中测得的氟吡禾灵总和, 计算结果需扣除空白值。X1=(c1-c0)V)m1 0 0 0( 1 )式中: X1 试样中测得的氟吡禾灵的总和, 单位为毫克每千克 (m g/k g) ; C1 从标准工作曲线得到的试样溶液中氟吡禾灵的浓度, 单位为纳克每毫升 (n g/m L) ; C0 从标准工作曲线得到的空白溶液中氟吡禾灵的浓度, 单位为纳克每毫升 (n g/m L) ; V 样液最终定容体积, 单位为毫升(m L) ; m 样品溶液所代表试样的质量, 单位为克(g) ; 1 0 0 0 单位换算系数。 结果保留三位有效数字。9. 2 以氟吡甲禾灵计的结果计算 按式(2) 计算氟吡甲禾灵的含量。X2=X1F( 2 )式中: X2 试样中换算的氟吡甲禾灵的含量, 单位为毫克每千克 (m g/k g) ; X1 试样中测得的氟吡禾灵的总和, 单位为毫克每千克 (m g/k g) ; F 氟吡甲禾灵与氟吡禾灵的转换系数, 分子量之比1. 0 4。5S N/T5 4 4 32 0 2 2 结果保留三位有效数字。1 0 方法性能指标1 0. 1 检出限和定量限 茶叶样品中氟吡禾灵和氟吡甲禾灵的检出限为0. 0 0 8 m g/k g、 定量限为0. 0 2 5 m g/k g, 其他样品中氟吡禾灵和氟吡甲禾灵的检出限为0. 0 0 3 m g/k g、 定量限为0. 0 1 m g/k g。1 0. 2 回收率和精密度 在添加浓度0. 0 1 m g/k g 3 m g/k g浓度范围内, 回收率在8 0%1 1 0%之间, 相对标准偏差小于1 5%。不同基质中不同浓度添加水平下氟吡甲禾灵的回收率范围参见附录C。6S N/T5 4 4 32 0 2 2附 录 A( 资料性)H P L C - M S/M S参考质谱条件1) 质谱条件:a) 离子化模式:E S I+;b) 质谱扫描模式: 多反应监测模式(MRM) ;c) 电喷雾电压:4 5 0 0 V;d) 离子源温度:6 5 0 ;e) 碰撞气: 氮气;f) 气帘气压力:2 5 k P a;g) 喷雾气压力:6 0 k P a;h) 辅助加热气压力:5 0 k P a;i) 其他质谱参数参见表A. 1。1) 非商业性声明 : 附录A所列参考质谱条件是在A B S C I E X A P I 5 5 0 0 Q - t r a p型液质联用仪上完成的, 此处列出试验用仪器型号仅为提供参考, 并不涉及商业目的, 鼓励标准使用者尝试不同广家或型号的仪器。表A. 1 待测农药定性、 定量离子对、 碰撞能量(C E) 和去簇电压(D P)中文名称保留时间/m i n母离子/ (m/z)子离子/ (m/z)C E/e VD P/V氟吡禾灵5. 5 83 6 1. 93 1 5. 9*1 82 8 7. 82 89 0. 82 89 0氟吡甲禾灵6. 9 03 7 6. 03 1 6. 0 9*1 69 1 9 1. 22 69 1氟吡禾灵-d45. 5 73 6 6. 03 1 9. 0 9*1 73 1 7. 91 59 1 *为定量离子。7S N/T5 4 4 32 0 2 2附 录 B( 资料性)氟吡禾灵、 氟吡甲禾灵及氟吡禾灵-d4( 内标) 标准物质多反应监测(MRM) 质谱图 图B.l 给出了氟吡禾灵、 氟吡甲禾灵及氟吡禾灵-d4( 内标) 标准物质多反应监测(MRM) 质谱图。图B. 1 氟吡禾灵、 氟吡甲禾灵及氟吡禾灵-d4( 内标) 的多反应监测(MRM) 质谱图8S N/T5 4 4 32 0 2 2附 录 C( 资料性)不同基质中氟吡甲禾灵添加浓度及回收率 表C. 1给出了不同基质中氟吡甲禾灵添加浓度及回收率。表C. 1 不同基质中氟吡甲禾灵添加浓度及回收率样品名称添加水平/(m g/k g)回收率范围/%R S D/%大米葵花籽柠檬马铃薯豌豆( 鲜)甜菜咖啡豆0. 0 18 0. 0 01 0 0. 0 09. 40. 0 58 4. 0 01 0 4. 0 07. 90. 19 4. 0 01 0 9. 0 05. 438 1. 3 39 1. 9 34. 40. 0 19 0. 0 01 0 0. 0 05. 80. 0 51 0 2. 0 01 1 0. 0 02. 90. 11 0 4. 0 01 1 0. 0 02. 00. 0 19 0. 0 01 1 0. 0 07. 70. 0 59 6. 0 01 0 4. 0 03. 20. 11 0 1. 0 01 1 0. 0 03. 30. 0 19 0. 0 01 1 0. 0 08. 90. 0 58 6. 0 01 0 0. 0 06. 10. 18 7. 0 09 2. 0 02. 00. 0 19 0. 0 01 0 0. 0 04. 40. 0 58 6. 0 08 8. 0 00. 90. 11 0 0. 0 01 0 4. 0 01. 619 0. 9 09 7. 6 02. 30. 0 18 0. 0 09 0. 0 06. 40. 0 58 4. 0 09 6. 0 04. 80. 58 4. 2 09 4. 4 04. 50. 0 18 0. 0 01 0 0. 0 08. 60. 0 59 8. 0 01 0 4. 0 02. 40. 19 3. 4 01 0 3. 0 03. 5样品名称添加水平/(m g/k g)回收率范围/%R S D/%小麦茶叶柑橘结球甘蓝洋葱菜籽油0. 0 18 0. 0 01 1 0. 0 01 4. 40. 0 51 0 0. 0 01 1 0. 0 03. 50. 19 9. 0 01 1 0. 0 03. 639 0. 4 09 9. 3 03. 40. 0 2 59 2. 0 01 0 8. 0 05. 90. 0 59 2. 0 01 0 2. 0 04. 80. 58 4. 4 09 2. 8 04. 30. 0 18 0. 0 01 0 0. 0 07. 00. 0 59 0. 0 09 4. 0 02. 20. 19 0. 0 09 2. 0 01. 10. 0 18 0. 0 09 3. 0 08. 40. 0 51 0 2. 0 01 0 4. 0 01. 90. 11 0 9. 0 01 1 0. 0 01. 00. 29 5. 0 01 0 1. 0 02. 20. 0 18 0. 0 01 1 0. 0 01 1. 10. 0 59 8. 0 01 0 4. 0 02. 10. 19 3. 0 09 6. 0 01. 20. 29 5. 0 09 6. 0 01. 50. 0 18 0. 0 01 0 0. 0 09. 70. 0 58 6. 0 09 8. 0 05. 00. 19 4. 0 01 0 6. 0 04. 219 0. 3 29 8. 2 03. 39S N/T5 4 4 32 0 2 222023445 T/NS中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准出口植物源食品中氟吡禾灵、 氟吡禾灵酯( 含氟吡甲禾灵) 及共轭物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法S N/T 5 4 4 32 0 2 2*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(1 0 0 0 2 3)编辑部: (0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2 - 7 5 3 0网址 w ww. c u s t o m s k b . c o m/b o o k中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本8 8 01 2 3 0 1/1 6 印张1 字数2 3千字2 0 2 2年9月第一版 2 0 2 2年9月第一次印刷印数 15 0 0*书号: 1 5 5 1 7 58 3 7 定价1 8. 0 0元