猪链球菌的检测和鉴定技术.ppt

猪链球菌的检测及鉴定技术链球菌链球菌的分类的分类根据各自的种名，如猪链球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌等1986，38种；2002，60种，从链球菌属成员中划分出去新成立了6个属Abiotrophia,Granulicatella,Dolosicoccus,Facklamia,Globicatella,and Ignavigranum 鉴定不易：常见的、溶血链球菌相对容易，新发现、不常见、非溶血链球菌非常困难VITEK COMPACT 2，35种，包含了新成立的4个属，领先水平链球菌链球菌的分类的分类溶血性分类：1903 Shottmuller 溶血 不透明的草绿色溶血环。红细胞不完全溶解，过氧化氢使血红素氧化成为草绿色的正铁血红素。这类细菌致病力不强，多为条件性致病菌。甲型溶血 完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。这类菌致病力强，常引起人及动物各种疾病。乙型溶血 菌落周围无溶血现象。一般为非致病菌。丙型溶血性分类在鉴定链球菌的致病性方面有一定的意义，但初步分类,意义有限;区分溶血和溶血意义也很有限,现可分为溶血和非溶血溶血性受多种因素的影响，特别是猪链球菌猪链球菌的特性猪链球菌的特性兼性厌氧兼性厌氧血平板上菌落较小（受基础培养基影响）血平板上菌落较小（受基础培养基影响）血平板上溶血性较弱血平板上溶血性较弱 羊血平板均为溶血 马血平板为溶血或溶血革兰氏阳性球菌，成对或成链过氧化氢酶试验阴性过氧化氢酶试验阴性 过氧化氢酶试验是链球菌与葡萄球菌区别的重要反应过氧化氢酶试验是链球菌与葡萄球菌区别的重要反应 猪链球菌的血清型血清学的方法对其进行分型。根据荚膜多糖抗原的差异，用凝集试验等方法可进一步将猪链球菌分为35个血清型，用阿拉伯数字表示，即134和1/2 型。SS2型是临床上分离率最高的一种，其次为SS1型。SS2型：人畜共患 猪链球菌2型分离鉴定操作规程GB/T 19915.22005 范围本规程规定了猪链球菌2型分离鉴定的操作方法。本标准适用于猪及其产品中猪链球菌2型的分离鉴定，也可用于送检菌株的鉴定。2024/5/11 周六根据国标，以猪链球菌为例（参照GB/T19915.2-2005）猪链球菌2型分离鉴定操作规程：a.样品采集 b.分离培养 c.初步鉴定（菌落形态，革兰氏染色，过氧化氢酶试验）d.生化鉴定 （经初步鉴定后，做海藻糖，七叶苷，甘露醇等糖发酵试验或应用法国生物梅里埃公司API20strep生化鉴定系统进行生化鉴定）e.玻片凝集试验 f.实验结果分析判定 2024/5/11 周六API系统API微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易、方便、快捷、科学的鉴定程序。API鉴定原理：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。2024/5/11 周六API试条组成API 20E/RapiD 20E革兰氏阴性杆菌鉴定 API 20NE非发酵菌鉴定API STAPH葡萄球菌及微球菌 API STREP链球菌鉴定API 20C AUX酵母菌API 20A厌氧菌API LISTERIA李斯特菌API CAMPY弯曲菌属API CORYNE棒状杆菌API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌2024/5/11 周六全全WindowsWindows操作界面，多种语言。操作界面，多种语言。2024/5/11 周六1。API结果两个重要概念：鉴定百分率（id%）：根据分类单位在数据库中近似程度进行分类，最接近100%。典型T值：表示实际生化反应与最典型反应的近似程度，最接近反应结果X典型反应A B C根据id%与T值的组合，作出结果的正确评价：极好的（Excellent）鉴定：id%99.9，T0.75 非常好的（Very good）鉴定：id%99.0，T0.50 好的（Good）鉴定：id%90.9，T0.25 可接受的（Acceptable）鉴定：id%80.0，T029API STREP-20生化鉴定 猪链球菌的API鉴定结果API STREP-20检测结果 猪链球菌的API鉴定结果TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类相对于双歧分类的优点猪链球菌的API鉴定结果微生物鉴定全面解决方案15系统名称自动化程度菌悬液配制试条/试卡接种培养条件判读分析手工手工比浊管手工加样自主孵育肉眼判读软件数据库分析自动电子比浊仪DENSIMAT电子连续加样枪自主孵育数读仪判读软件数据库分析全自动电子比浊仪DensiCHEKPlus仪器整合的充填仓仪器整合的培养箱仪器整合阅读软件数据库高级报告工具微生物鉴定全面解决方案16手工革兰氏染液系统组成19ATB New是一套半自动的系统，用于鉴定细菌和酵母菌，并检测微生物对抗生素的敏感性。读数仪比浊仪电子加样枪计算机打印机试条组成试条种类：24h常规鉴定试条Ref.32400，ID32 ERef.32100，ID32 GNRef.32500，ID32 Staph4h快速鉴定试条Ref.32700，rapid ID32 ERef.32300，rapid ID32 ARef.32600，rapid ID32 StrepRef.32200，ID32 C24工作原理读数仪内部光路利用滤光片来发变换读数斱方式：4个有色滤光片（橙、紫、蓝、绿）检测比色试条各反应孔在不同波长下的透光率 1个无色的光路利用透光强度T和散射强度S检测比浊试条各反应孔的透光率（散射测浊）试条26基本操作结果判读仍基于生物编码原理：试条可借助读数仪迚行判读 大部分试条也可肉眼迚行判读（除ID32 GN外）根据颜色或浊度发化，在产品插页的记彔表格中填入或者，通过代码获得11位的数值谱，而后输入ATB New软件285-+2 40 4+111-2 4 0 0+11系统特色ATB New系统的优点包含：采用“金标准”基础上开发的即用型试条，传承了标准化的方法 借助配件实现自动化配制、自动化接种和自动化判读 完整并不断完善的数据库，针对如下几方面进行定期升级：微生物分类变化 新菌种的生物学描述 已知菌种生化特点的变化 基于数码参照的可靠结果（id%、T）32系统组成VITEK 2 Compact是一套全自动的系统，用于鉴定细菌和酵母菌，并检测微生物对抗生素的敏感性。仪器主机 条码扫描枪 计算机（显示器、键盘、鼠标）打印机 稳压电源UPS电子比浊仪DensiCHEK Plus盐水分配器配套充填卡架配套加样枪33系统组成仪器主机：包含用户操作界面的屏幕和按键 可显示仪器的日常状态 可进行卡架的充填和一部分仪器设置、日常维护 最主要的功能集中于两个仓充填仓和装载仓 分别有独立的仓门，充填仓门可随时打开（真空充填时除外），装载仓门常处于电子锁闭状态两个仓门旁均有独立的LED指示灯 此外仪器包含废物收集仓，仓门可随时打开进行清理34系统组成仪器主机：仪器还包含两个用户门可打开顶端用户门和正面用户门 在用户操作界面进行控制 两个门打开后可抵达内部的孵育箱和光学读数组件，可进行维护清理2个光学读数组件可覆盖3个波长，在孵育的过程中每15min进行一次光学读数 主机右侧有独立的开关，控制主机的通电状态 主机的运行状态可在用户操作界面进行关闭35试卡组成光学排列标记条形码预先插好的接种管路轨半透膜密封设计风干底物37试卡组成 鉴定卡类型及适用菌群：Ref.21342：GP革兰氏阳性细菌鉴定卡可用于鉴定革兰氏阳性球菌（葡萄球菌、链球菌和肠球菌）及短杄菌（李斯特菌）Ref.21341：GN革兰氏阴性细菌鉴定卡可用于鉴定革兰氏阴性杄菌（肠杄菌科细菌、非发酵菌、弧菌和假单胞菌等）Ref.21347：ANC厌氧菌及棒状杄菌鉴定卡可用于鉴定厌氧菌（梭菌、乳杄菌、双歧杄菌）、部分棒状杄菌及放线菌Ref.21345：BCL芽孢菌鉴定卡可用于鉴定芽孢杄菌38试卡组成 鉴定卡类型及适用菌群：Ref.21348：CBC棒状杄菌鉴定卡可用于鉴定革兰氏阳性无芽孢的杄菌（棒状杄菌、乳杄菌）、短杄菌及部分放线菌Ref.21346：NH奈瑟菌、嗜血杄菌鉴定卡可用于鉴定苛养的革兰氏阴性双球菌（奈瑟球菌）、杄菌（嗜血杄菌）及弯曲菌Ref.21343：YST酵母菌鉴定卡可用于鉴定酵母样真菌（念珠菌、丝孢酵母）及部分隐球菌398工作原理40TX1TX3光学读数组件分为2个，同步读数可对试卡每个孔的透光率迚行检测：TX1覆盖1个波长，适合试卡比浊反应孔（鉴定卡的同化反应及药敏卡）TX3覆盖2个波长，适合鉴定卡的比色反应孔660nm 428-568nm孔对齐基本操作有两种工作模式供选提高灵活性：装载即走（Load and Go）模式 用户只需在打印表中记彔样本信息后，直接完成充填和装载 仪器装载孵育时，通过条形码记彔卡片类型、批号等相关信息，并传输至计算机用户可在空闲时输入补齐样本信息分流处理更灵活，节约劳劢力 虚拟卡架（Virtual Cassette）模式 用户必须设置完虚拟卡架斱可进行充填加载，通过扫描条形码将卡架、卡片信息传输至计算机，补齐样本信息，建立虚拟卡架仪器装载孵育后，读取条形码，不事先输入的信息做比较保证了可溯源性，减低误差保证信息的安全41基本操作常用工作流程（Virtual Cassette）可概括为：42卡片准备信息连接真空充填装载孵育报告结果革兰染色基本操作不断升级的系统软件：43系统特色VITEK 2 Compact系统的优点包含：采用“金标准”基础上开发的智能型试卡，增强了比色和比浊方法、更多类型底物的融合卡片在装载仓中进行封口，并在完成读数后自动传送到废物收集仓，使污染的风险最小化一体化机型实现自动化配制、自动化接种、自动化孵育和自动化判读，节约劳动力动态判读法和限定时间的终点判读法加快了周转的时间，可更快得到结果，增强实验室的生产力完整并不断完善的数据库，增加了单一选择的鉴定结果基于数码参照的可靠结果（id%、T）44系统特色VITEK 2 Compact针对工业客户开发的特殊功能：SRF（Supplemental React File）：适合药厂客户创建自己的数据库，编入严苛环境下的非典型反应文件，参照创建的数据库进行鉴定 21CFR11模式：可根据FDA的要求启动，借电子记录和签名确保整个操作流程的真实性、完整性和机密性，幵配合审计 安全性进入 电子签名 数据归档 URS（Use Requirement Specification）：预填的文件以帮助户描述仪器规格 3Q认证包：协助完成仪器的认证规划，指导IQ/OQ/PQ幵完成验证报告45Vitek Compact 2 鉴定结果猪链球菌的Vitek Compact 2 鉴定结果Vitek Compact 2 鉴定结果猪链球菌的Vitek Compact 2 鉴定结果Vitek Compact 2 鉴定结果猪链球菌的Vitek Compact 2 鉴定结果公司简介3TheranosticIndustialMicrobiology食品安全/营养/健康疫苗/免疫疗法/感染性疾病及癌症临床诊断预防治疗诊断 超过30年的友谊并发展公司简介4