DB23∕T 3096-2022 水稻稻瘟病抗谱鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.20CCS B 16黑龙江省地方标准DB23/T 3096-2022水稻稻瘟病抗谱鉴定技术规程2022-01-29 发布2022-02-28 实施黑龙江省市场监督管理局发 布DB23DB23/T 3096-2022I前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省农业农村厅提出。本文件起草单位：黑龙江省农业科学院生物技术研究所。本文件主要起草人：张国民、马军韬、邓凌韦、赵文生、宋显东、彭友良、王春荣、司兆胜、胡亚军、王永力、张齐凤、高洪儒、张君、王南博、任洋。DB23/T 3096-20221水稻稻瘟病抗谱鉴定技术规程1范围本文件规定了水稻稻瘟病抗谱鉴定技术的环境条件、鉴定方法、评价标准和技术档案。本文件适用于水稻品种的抗谱鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。本文件没有规范性引用文件。3术语与定义本文件没有规定的术语与定义。4环境条件鉴定时的环境条件， 温度、 相对湿度和光照条件必须可控， 温度范围 2628， 相对湿度 100%，具有遮光和加光设备。5鉴定方法5.1水稻苗的种植与管理5.1.1水稻品种的选择选择主栽或高潜力水稻品种 10份15份用于试验。同时，选择稻瘟病发生较重地块，种植普感品种丽江新团黑谷或蒙古稻，用于采集、分离当地稻瘟病菌株。5.1.2浸种催芽水稻种子装入纱网袋，在 1112的清水中浸种 6d8d。浸种完成后，32进行破胸处理，然后在 2528条件下，催芽 24h36h。5.1.3播种选取发芽一致的种子穴播于 128孔塑料育秧盘内（54cm28cm4cm），每孔播种 4粒或 5粒，3次重复，播种后将育秧盘置于温室苗床上，其上覆盖约 1cm 厚的干细土。5.1.4水稻苗管理DB23/T 3096-20222水稻苗全程不施用任何杀菌剂，其他按常规管理。5.2接种体制备将稻瘟病菌点接于番茄燕麦平板培养基上，2628培养至菌落直径接近培养基边缘，加入无菌水洗脱菌丝和分生孢子，将其涂布于另一平板培养基上，超净工作台内吹干后，2628光照培养至表面产生一层气生菌丝。用无菌水将气生菌丝和分生孢子冲洗干净，晾干后罩上 2层纱布，2628光照培养至大量分生孢子产生。用含 0.025% Tween20 的无菌水洗脱分生孢子，过滤后将其浓度调至 3105个孢子/mL，现用现配，从配制到完成接种不得超过 2h。5.3人工接种流程5.3.1离体叶片准备在水稻苗中选取 5叶期充分展开的心叶，剪成长约 5cm、上下宽度基本一致的叶段，每个品种从不同植株选取 3个叶段作为三次重复。用灭菌昆虫针在叶片正面、垂直于叶脉方向轻轻划出微创点，每个叶段 3点，每点长 2mm5mm。将两层灭菌滤纸片平铺于直径 9cm 的培养皿内，加无菌水浸湿，表面无明水。将灭菌牙签放入灭菌水浸泡 10min20min，取两根灭菌牙签放在浸湿的滤纸片表面，将已划出微创点的叶段摆放其上。用 0.025% Tween 20水溶液对叶段均匀喷雾，培养皿盖内侧同时喷雾。5.3.2人工接种用微量移液器吸取分生孢子悬浮液点接于叶段的微创点，每个微创点接分生孢子悬浮液5L10L，盖上培养皿盖。将接种后的叶段在 2628、相对湿度 100%和完全黑暗条件下培养24h30h，然后在相同条件下转至光照培养，直至发病。5.4病情调查5.4.1调查时间在接种后 3d 开始调查，连续调查 5d，每天上午、下午各调查一次。5.4.2抗感反应型调查标准接种点部位无病斑或仅有很小的黑褐色坏死斑，不产生分生孢子，记为抗病反应型；接种点部位病斑较大，呈梭形，中心有灰色的崩溃部，可以产生菌丝和分生孢子，崩溃部边缘可能有褐色坏死，最外层为黄色的中毒部，形状不规则，记为感病反应型。5.4.3调查方法每个水稻品种接种后的9个接种点全部调查，将抗感反应结果记入表A.1。6评价标准6.1接种有效性评价标准每次接种均以普感品种丽江新团黑谷为对照，对照表现为典型的感病反应型时，视为接种有效。6.2重复性接种判定标准DB23/T 3096-20223在第一次接种后，供试菌株表现为抗病反应型或者不能准确判定其反应型，需要进行第二次和第三次接种，只要其中一次表现为感病反应型，则记为感病反应型，否则记为抗病反应型。6.3供试菌株数量标准室内鉴定水稻品种的抗瘟性，供试菌株必须为单孢菌株，且必须从适宜种植区内种植的普感品种丽江新团黑谷或蒙古稻上分离获得。建议每个县（市）菌株数量不少于300株，或者连续3年、每年不少于100株。6.4抗瘟性评价标准依据各县或县级市水稻品种室内抗谱的高低评价其在当地田间抗瘟性的优劣，评价标准见表A.2。7技术档案建立水稻稻瘟病抗谱鉴定技术档案，内容包括环境条件、鉴定方法、评价标准及试验数据等。DB23/T 3096-20224附录 A资料性附录水稻稻瘟病抗谱调查A.1水稻稻瘟病抗谱调查见表 A.1 和 A.2。表 A.1 供试菌株抗感反应型调查记录表调查时间：水稻品种名称：生育期：供试菌株编号供试菌株名称反应型123456表 A.2水稻品种田间抗瘟性评价标准田间抗瘟性评价抗谱评价标准抗病 Resistant（R）抗谱70%中抗 Moderately resistant（MR）50%抗谱70%中感 Moderately Susceptible（MS）30%抗谱50%感病 Susceptible（S）抗谱30%DB23/T 3096-20225参考文献1NY/T 3257水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程2DB23/T 2735水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程3DB2308/T 075优质高产水稻品种“垦稻41”生产技术操作规程_