DB15∕ 445-2008 科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程(内蒙古自治区).pdf

ICS 65.120 B 25 备案号:23330-2008 DB15 内古古东自 J曰区地方标准DB15/445一-2008科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程Technical Guideline for Certification of Lespedeza hedysaroides (Pall.) Kitag. cv. Keerqin 2008-08-20发布2008-10-01实施内蒙古自治区质量技术监督局发布DB15/445一-2008目。言本标准的第2、第4章为强制l性的，其余为推荐性的。本标准由中国农业科学院草原研究所和中国农业大学提出，中国农业科学院草原研究所负责解释。本标准由中国农业科学院草原研究所、中国农业大学和内蒙古林西县草原工作站负责起草。本标准一十累起草人:挝、启忠、韩建国、王费文、玉柱、赵淑芬、乔玉梅。DB15/445一-2008科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程1 范围木标准给出了科尔沁尖叶胡枝子的品种名和来源，规定了植物学认定、幼苗认定、物候期认定和DNA认定力法。木标准适用于科尔沁尖叶胡枝子的认定。2 品种名2. 1 中文名科尔沁尖叶胡枝子2. 2 学名Lespedeza hedysaroides (Pall.) Kitag. cv. Keerqin 3 品种来源科尔沁尖叫胡枝子是由中国农业科学院草原研究所、中国农业大学和内蒙古林同县草原工作站等单位，采用一次混合选择法，从内蒙古林同县野生尖叫i)j枝子(Lespedezahe司ysaroides(Pall.) Kitag.)群体中选出优良单株，经过多年人工栽培驯化而成。2006年12月经全国平品种审定委员会审定登记为栽培品种(品种登记号:325)。品种原产地内蒙古林国县，原种由中国农业科学院草原研究所保存。4 植物学认定4. 1 株型多年生草本状半灌木，直立，林型呈帚状，成熟才朱高85cm100cmo4. 2 根系直根系，为表层聚积型，主要分布在20cm土层内C4. 3 枝条l年生枝条基部相0.5mm以下。2年坟2年生以上主枝基部相l.3mm3.5mm，分枝为27个:主枝中下部侧枝较多，为1558个，长度25cm48cm，与主枝呈250350夹角。4.4 日十片习习状3出复叶，个别植株羽状45出复叶，托叶刺芒状，叶片条状长园形，小TiI密，开花前叶色呈黄绿色，:七后稍暗。顶生小叶较大，椭圆状或长矩困状披针形，长20mm25mm，宽6mm7mmo叶脉伸出呈短刺尖，主叶脉凹陷。4. 5 花序总状花序腋生，长j叶片，每花序35小花，小花较小，部分小花直接生j二日十腋处。总花梗和小花梗较短。花冠蝶形白色，旗瓣中央和龙骨瓣顶端为紫色。主享浅材、犬，披针形，顶端渐尖，较尊筒长。DB15/445一-20084. 6 果实芙果包子尊内，倒卵形或椭圆形，先端有宿存也柱，腹缝线略长于背缝线，伏生白柔毛，内含丰11子1粒。和1子椭圆形或卵形，黄色、紫色或具紫色、淡紫色斑纹，下粒重1.57g1.84go5 幼苗认定子叶出士后呈长椭圆形、绿色、肉质，生长缓慢:真叶45片后生长力口快，口十片黄绿色。当年基部不分枝，主枝上分生侧枝较多，株市30cm40cmo 6 物候期认定在原产地5月下句捂种，6月初出苗，20d芹右苗齐，6月下旬J至7月上句进入分枝期，8月上旬现苦，中下旬少量开花，8月下旬至9月上旬有少量植株结实，9月中旬少数种子成熟。翌年，5月初开始萌动、下旬返青，6月中下旬开始现苦，7月下旬至8月上句为开花期，8月下旬至9月初为结实期，9月中下旬种子成熟。生育期115d120do7 DNA认定7. 1 实验仪器PCR扩增仪:电泳仪:紫外分光光度计:多逼迫分子成像系统。7. 2 取样与保存在开花期分单株采集嫩叫，样品置于液氮中，于实验室-200C保存。7.3 DNA t取用DNA提取试剂盒提取总DNA，0.8%晾脂糖凝胶电泳检测DNA质量。7.4 ISSR反应体系及程序7.4. 1 TSSR反应体系总体积20/-lL，含有约40ng基因组DNA，0.2 /-lmo1/L引物，10/-lL 2XTaq PCR MasterMixO.1 U /-l几TaqPolymerase, 500M dNTP each , 20mM Tris-HCI(pH8.3), 100 mM KC, 3mMMgCI外，用ddH20补充休积至20L6.4.2 PCR扩增程序940C充分变性5min，然后进行35个循环940C变性30s, 500C或520C(根据引物而定)追火45s，720C延伸1.5min，最后720C延伸7min, 40C终止反应(表1)0 PCR产物在0.8%琼脂糖凝胶土电泳分离，核酸染料，染色思带，多通道分子成像系统成像并观察。2 DB15/445一-2008表1所用的ISSR寻|物序列和退火温度31物序列ill火i，度FCUBC-812 (GA) sA 50 UBC-809 (AG) sG 52 UBC-811 (GA) sC 52 UBC-825 (AC) sT 52 UBC-827 (AC) sG 50 UBC-880 (GGAGA), 50 UBC-842 (GA)IYG 52 UBC-824 (TC) .IG 50 注Y二C!T7. 5 特异条带用UBC-880引物或者扩增后，在500bp600bp处出现一沽晰明显的特异条带。1 J