5章-沉淀反应(免疫学).ppt

第第5 5章章 沉淀反应沉淀反应 Precipitation沉淀反应：沉淀反应：是指是指可溶性可溶性抗原和抗体特异性结合，在抗原和抗体特异性结合，在适当条件下形成沉淀物的现象，包括液相沉适当条件下形成沉淀物的现象，包括液相沉淀试验和凝胶沉淀试验。淀试验和凝胶沉淀试验。主要内容：主要内容：液相沉淀反应液相沉淀反应 凝胶中沉淀反应凝胶中沉淀反应 免疫浊度分析免疫浊度分析 第一节第一节 液相沉淀反应液相沉淀反应(fluid phase precipitation)v液相沉淀试验液相沉淀试验 指可溶性抗原与相应抗体在含电解质的液指可溶性抗原与相应抗体在含电解质的液体介质中反应，形成肉眼可见的沉淀物。体介质中反应，形成肉眼可见的沉淀物。v液相内沉淀分为液相内沉淀分为 絮状沉淀试验絮状沉淀试验 环状沉淀试验环状沉淀试验 免疫浊度分析免疫浊度分析一、絮状沉淀试验一、絮状沉淀试验（一）（一）基本原理基本原理 可溶性可溶性抗原抗原与相应与相应抗体抗体在有在有电解质电解质存在的条件存在的条件 下，形成可见的絮状沉淀物下，形成可见的絮状沉淀物。方法：玻片法和试管法。方法：玻片法和试管法。v方法简单方法简单v不需特殊设备不需特殊设备v灵敏低灵敏低v已被其它方法取代已被其它方法取代二、二、环状沉淀试验环状沉淀试验v(一一 )基本原理基本原理 将抗原溶液叠加在细小玻璃管中抗体溶液上将抗原溶液叠加在细小玻璃管中抗体溶液上面，抗原与抗体在两液交界面处特异性结合，面，抗原与抗体在两液交界面处特异性结合，形成白色沉淀环形成白色沉淀环 絮状沉淀试验：絮状沉淀试验：方法简单，不需特殊设备方法简单，不需特殊设备 但敏感度较低，已其他方法被取代。但敏感度较低，已其他方法被取代。第二节第二节 凝胶内沉淀试验凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation)v凝胶内沉淀试验凝胶内沉淀试验 可溶性抗原与相应抗体分别放入凝胶内进可溶性抗原与相应抗体分别放入凝胶内进行扩散，二者在比例合适的位置形成肉眼可行扩散，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环，又称凝胶扩散见的沉淀线或沉淀环，又称凝胶扩散(gel diffusion)。v凝胶内沉淀试验分为凝胶内沉淀试验分为 自由扩散：自由扩散：单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 定向扩散：定向扩散：火箭电泳火箭电泳 对流免疫电泳对流免疫电泳 定向定向-自由扩散：自由扩散：免疫电泳免疫电泳 免疫固定电泳免疫固定电泳一、单向琼脂扩散试验一、单向琼脂扩散试验 single immunodiffsionv（一）基本原理（一）基本原理 待测抗原从局部含有相应定量抗体的凝胶待测抗原从局部含有相应定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在二者比例合适的部位，形成白色沉淀环，在二者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。v（二）技术要点（二）技术要点 制板：将抗体和热融化琼脂混合，倾注成平板。制板：将抗体和热融化琼脂混合，倾注成平板。打孔：打孔：加样：待测抗原和抗原标准品，加样：待测抗原和抗原标准品，反应：置反应：置3737，242448h48h后观察孔周围沉淀环。后观察孔周围沉淀环。(三三)数据处理数据处理 1Mancini曲线曲线 适用于适用于大大分子抗原，如分子抗原，如IgM测定，扩散测定，扩散时间时间48h.沉淀环直径的平方（沉淀环直径的平方（d2）与抗原浓度（）与抗原浓度（C）呈线）呈线性关系。性关系。2Fahey曲线曲线 适用于适用于小小分子抗原，分子抗原，扩散扩散时间时间较短较短(24h).抗原浓度的对数（抗原浓度的对数（log c）与沉淀环直径（）与沉淀环直径（d）呈线性关系。呈线性关系。v(四四)临床应用临床应用 用于用于IgG、IgA、IgM、C3、C4等定量测定。等定量测定。简单、特异，但敏感性低，已被其它方法取代简单、特异，但敏感性低，已被其它方法取代二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验（double immunodiffusion）（一）基本原理（一）基本原理 将抗原和抗体溶液分别放在凝胶不同将抗原和抗体溶液分别放在凝胶不同的对应孔中，让两者均在凝胶中自由扩的对应孔中，让两者均在凝胶中自由扩散，当抗原与抗体相遇，浓度比例适当散，当抗原与抗体相遇，浓度比例适当处形成可见的白色沉淀线处形成可见的白色沉淀线。（二）技术要点（二）技术要点 琼脂倾注制板。琼脂倾注制板。待琼脂凝固后，在琼脂胶板上打孔。待琼脂凝固后，在琼脂胶板上打孔。在相对的孔中分别加入抗原或抗体。在相对的孔中分别加入抗原或抗体。置室温或置室温或371824h观察沉淀线观察沉淀线。（三）方法评价（三）方法评价 方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设备，重复性好，但灵敏度稍差备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。（四）临床应用（四）临床应用1 1血清学诊断血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的出现沉淀线，表明存在相应的AgAg或或Ab.Ab.2.2.免疫化学分析免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反 出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。在琼脂内扩散的速度受分子量的影响。在琼脂内扩散的速度受分子量的影响。如分子量大时，沉淀线弯向分子量大的一边。如分子量大时，沉淀线弯向分子量大的一边。如二者分子量相等，则形成直线。如二者分子量相等，则形成直线。用于抗原性质的分析用于抗原性质的分析 分析两种受检抗原的性质是分析两种受检抗原的性质是 完全相同、完全相同、部分相同或部分相同或 完全不同。完全不同。3 3用于抗体效价的滴定用于抗体效价的滴定 固定抗原的浓度，稀释抗体，经过自固定抗原的浓度，稀释抗体，经过自由扩散，形成沉淀线，出现沉淀线的最高由扩散，形成沉淀线，出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。抗体稀释度为该抗体的效价。二、定向免疫扩散二、定向免疫扩散 v在电场作用下，抗原抗体在介质中发生定向在电场作用下，抗原抗体在介质中发生定向移动的沉淀反应。移动的沉淀反应。v定向、加速扩散定向、加速扩散 v分类分类 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis)对流免疫电泳对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis)(一一)对流免疫电泳对流免疫电泳v对流免疫电泳对流免疫电泳 是双向免疫扩散与电泳相结合，在电场中加速定是双向免疫扩散与电泳相结合，在电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。向扩散的双向免疫扩散技术。1.1.基本原理基本原理 在在pH8.6的琼脂凝胶中，的琼脂凝胶中，大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，且大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，且分子较小，电泳时，泳向正极。分子较小，电泳时，泳向正极。抗体带弱负电荷，但分子量大，电泳力小于电渗抗体带弱负电荷，但分子量大，电泳力小于电渗力，泳向负极。力，泳向负极。抗原和抗体相遇，比例合适时形成肉眼可见抗原和抗体相遇，比例合适时形成肉眼可见的沉淀线。的沉淀线。2.技术要点技术要点 v制板，在琼脂板上成对打孔，加抗原和抗体。制板，在琼脂板上成对打孔，加抗原和抗体。v电泳后观察结果。电泳后观察结果。3.方法评价方法评价v操作简便。操作简便。v灵敏度较高，比双扩高约灵敏度较高，比双扩高约1010倍。倍。v分辨率低于双扩。分辨率低于双扩。4.4.临床应用临床应用v常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴定等定等(二二)火箭免疫电泳火箭免疫电泳v火箭免疫电泳火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形似火箭，故称为火箭电泳。似火箭，故称为火箭电泳。1.1.基本原理基本原理 v电泳与反应电泳与反应 抗原在电场作用下，在含有适量抗体的抗原在电场作用下，在含有适量抗体的凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀带，峰形高低与抗带越来越窄，形成火箭峰样沉淀带，峰形高低与抗原量呈正相关。原量呈正相关。v结果分析结果分析 用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。2.2.技术要点技术要点 v制板与打孔制板与打孔：v结果结果：电泳完毕，观察琼脂板上沉淀峰，测量：电泳完毕，观察琼脂板上沉淀峰，测量(从孔从孔 中心到峰尖的高度中心到峰尖的高度)。v计算计算:以峰高为纵坐标，抗原浓度为横坐标以峰高为纵坐标，抗原浓度为横坐标(对数对数 坐标坐标)，绘制标准曲线，求出待检样品抗原浓度。，绘制标准曲线，求出待检样品抗原浓度。v电泳电泳：样品孔侧置负极电泳。：样品孔侧置负极电泳。3.方法评价方法评价v操作简便操作简便v灵敏度较高（灵敏度较高（mg/Lmg/L）4.4.临床应用临床应用1.抗原蛋白定量，如抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和和sIgA检测。检测。2.C3、C4及其裂解产物检测。及其裂解产物检测。3.AFP等检测等检测 已被免疫浊度分析取代。已被免疫浊度分析取代。三、定向自由扩散三、定向自由扩散v是将区带电泳与免疫扩散相结合的免疫化学是将区带电泳与免疫扩散相结合的免疫化学分析技术分析技术。（一）（一）免疫电泳免疫电泳（immunoelectrophoresis，IEP）v免疫电泳免疫电泳 是将区带电泳与双向免疫扩散相结合的一是将区带电泳与双向免疫扩散相结合的一种免疫化学分析技术种免疫化学分析技术。1.1.基本原理基本原理v电泳电泳 AgAg在凝胶上进行电泳，被分离成不同区带。在凝胶上进行电泳，被分离成不同区带。v反应反应 在在停止电泳后，在与电泳方向平行挖一条停止电泳后，在与电泳方向平行挖一条形槽，加入相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩形槽，加入相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩散，在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀散，在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀线。线。根据沉淀线的数量、位置和形状，可分析、鉴根据沉淀线的数量、位置和形状，可分析、鉴定样品中所含抗原成分及其性质定样品中所含抗原成分及其性质。2.2.技术要点技术要点v制板与打孔制板与打孔：v加样加样：加入待检抗原标本或正常血清对照。：加入待检抗原标本或正常血清对照。v电泳电泳：抗原一端接阴极，电泳：抗原一端接阴极，电泳1.51.52h2h。v反应反应：挖一小槽，向槽内加入抗体，使抗原抗：挖一小槽，向槽内加入抗体，使抗原抗体双向扩散。体双向扩散。v观察结果观察结果：放置：放置24h24h后，观察沉淀线的数目、后，观察沉淀线的数目、形状和位置。形状和位置。3.方法评价方法评价v主要优点主要优点:特异、分辨率高特异、分辨率高4.4.临床应用临床应用主要用于：主要用于：v纯化抗原或抗体的成分分析。纯化抗原或抗体的成分分析。v异常体液中蛋白质分析，如无丙种球蛋白血异常体液中蛋白质分析，如无丙种球蛋白血症、白血病等病人的血清蛋白成分的分析。症、白血病等病人的血清蛋白成分的分析。(二二)免疫固定电泳免疫固定电泳（immunofixation electrophoresis）v区带电泳与区带电泳与免疫沉淀免疫沉淀反应相结合的免疫分析反应相结合的免疫分析技术。技术。（一）原理（一）原理 似免疫电泳，不同之处是电泳后似免疫电泳，不同之处是电泳后直接将抗直接将抗体作体作用于被分离的各组分蛋白质，抗用于被分离的各组分蛋白质，抗Ag-Ab发发生反应，使生反应，使Ag在电泳位置上被免疫固定。在电泳位置上被免疫固定。2.2.技术要点技术要点v电泳电泳 先将抗原作区带电泳，分离成不同区带先将抗原作区带电泳，分离成不同区带沉淀反应沉淀反应 v电泳后，将电泳后，将AbAb加于蛋白质区带表面，加于蛋白质区带表面，vAgAg与与AbAb发生沉淀反应，形成的发生沉淀反应，形成的CIC嵌于固相支持物中。嵌于固相支持物中。v洗去游离的洗去游离的AgAg或或AbAb，显示出被结合固定的某种蛋白质。，显示出被结合固定的某种蛋白质。3.方法评价方法评价v简便、快速简便、快速v灵敏度高于免疫电泳灵敏度高于免疫电泳4.4.临床应用临床应用v可用于鉴定具有近似迁移率的多种蛋白可用于鉴定具有近似迁移率的多种蛋白 如各种如各种M M蛋白、补体的裂解产物、免疫球蛋白的蛋白、补体的裂解产物、免疫球蛋白的轻链型别；轻链型别；脑脊液、尿液或其他体液中微量蛋白的检测与鉴脑脊液、尿液或其他体液中微量蛋白的检测与鉴定。定。第三节第三节 免疫浊度分析技术免疫浊度分析技术（immunoturbidimetry）v免疫浊度测定免疫浊度测定 是将液相内的是将液相内的沉淀试验沉淀试验与与现代光学仪器现代光学仪器和和自动自动分分析技术相结合的一项分析技术。析技术相结合的一项分析技术。v当当可溶性抗原可溶性抗原与相应的抗体特异结合，可以形成不与相应的抗体特异结合，可以形成不溶性的溶性的CIC，使反应液出现浊度。用仪器检测浊度，使反应液出现浊度。用仪器检测浊度，推算出复合物的量。推算出复合物的量。v免疫浊度测定按测量方式分为免疫浊度测定按测量方式分为 透射免疫比浊法透射免疫比浊法 （turbidimetric immunoassay或或turbidimetry）散射免疫比浊法散射免疫比浊法 （nephelometric immunoassay或或nephelometry）一、透射免疫比浊法一、透射免疫比浊法（transmission turbidimetry）(一一)基本原理基本原理v抗原抗体结合后形成的抗原抗体结合后形成的CIC引起液体介质出引起液体介质出现浊度改变，光线的透过量减少，被吸收现浊度改变，光线的透过量减少，被吸收光线量与光线量与CIC形成量呈正相关，依所测吸光形成量呈正相关，依所测吸光度值推算待测抗原的量度值推算待测抗原的量。二、散射免疫比浊法二、散射免疫比浊法（nephelometry）v1967年，年，Ritchie等等 利用激光照射在液相中利用激光照射在液相中CIC微粒上时，部分光线微粒上时，部分光线发生散射的原理，通过测量散射光的强度来得知待发生散射的原理，通过测量散射光的强度来得知待测抗原的量，称为散射比浊法（测抗原的量，称为散射比浊法（nephelometry）。）。v1977年，年，Sternberg 建立了速率散射比浊法（建立了速率散射比浊法（rate nephelometry），），使微量抗原的定量测定得以快速灵敏地进行。使微量抗原的定量测定得以快速灵敏地进行。(一一)基本原理基本原理v利用激光照射在液相中的利用激光照射在液相中的CIC微粒上时部分光线发微粒上时部分光线发生散射的原理，通过测量散射光的强度来得知待测生散射的原理，通过测量散射光的强度来得知待测抗原的量。抗原的量。v沿水平轴照射的一定波长的光通过溶液时，被免沿水平轴照射的一定波长的光通过溶液时，被免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光散射光。v散射光强度与粒子的浓度和体积成正比。散射光强度与粒子的浓度和体积成正比。v散射比浊法的灵敏度和特异性比透射比浊散射比浊法的灵敏度和特异性比透射比浊法高。法高。Nephelometry(二二)技术类型技术类型v散射比浊法分为散射比浊法分为 终点散射比浊法（终点散射比浊法（end-point nephelomtry）速率散射比浊法（速率散射比浊法（rate nephelometry）1.1.终点散射比浊法终点散射比浊法v当抗原当抗原-抗体相遇后，反应达到平衡通常需抗体相遇后，反应达到平衡通常需1030min。v免疫浊度测定应在复合物聚合产生絮状沉淀之前进行，免疫浊度测定应在复合物聚合产生絮状沉淀之前进行，否则光散射值降低，影响测定结果。否则光散射值降低，影响测定结果。因此，终点散射比浊是在免疫反应进行到一定时间因此，终点散射比浊是在免疫反应进行到一定时间时测量其浊度。时测量其浊度。2.2.速率散射比浊法速率散射比浊法v速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。v抗原与抗体结合形成抗原与抗体结合形成IC的速度，在每个单位时间内的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时间是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时间的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s25s时时出现一个反应最快的速率峰，峰值与抗原量呈正相出现一个反应最快的速率峰，峰值与抗原量呈正相关。关。v速率散射比浊法：速率散射比浊法：是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段的散射信号值。段的散射信号值。三、速率抑制免疫比浊法三、速率抑制免疫比浊法(rate inhibition immunoturbidimetry)v是一种竞争性结合试验，主要用于测定半抗原和是一种竞争性结合试验，主要用于测定半抗原和药物等小分子物质。药物等小分子物质。v试验时先将试验时先将一定量一定量的已知半抗原的已知半抗原-载体（大分子）载体（大分子）与与限量限量的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合物可形成一定的速率散射峰值。物可形成一定的速率散射峰值。v待测抗原与抗体竞争结合，速率散射峰值降低，待测抗原与抗体竞争结合，速率散射峰值降低，降低程度与标本中的待测半抗原成正比。降低程度与标本中的待测半抗原成正比。四、免疫胶乳浊度测定法四、免疫胶乳浊度测定法(immunolatex turbidimetry)v免疫胶乳浊度测定法免疫胶乳浊度测定法 与透射免疫比浊法基本相似，与透射免疫比浊法基本相似，为一种带为一种带载体载体的免疫比浊法，提高了免疫浊的免疫比浊法，提高了免疫浊度测定的灵敏度。度测定的灵敏度。(一一)基本原理基本原理v将抗体吸附到胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，将抗体吸附到胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，胶乳颗粒发生凝集。胶乳颗粒发生凝集。v单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。v当两个以上胶乳颗粒凝聚时，则使透过光减少，当两个以上胶乳颗粒凝聚时，则使透过光减少，吸光度（吸光度（A A值）与胶乳凝聚程度成正比，并与待测值）与胶乳凝聚程度成正比，并与待测抗原量直接相关。抗原量直接相关。五、免疫浊度分析的影响因素五、免疫浊度分析的影响因素v抗体必须适量过剩，以保证抗体必须适量过剩，以保证IC复合物的生成量与浊复合物的生成量与浊度的改变一致。度的改变一致。（一）抗体试剂的质量（一）抗体试剂的质量 1.1.抗体质量：特异性强抗体质量：特异性强,效价高效价高,亲和力强。亲和力强。2 2.抗体类型：抗体类型：R R型型：亲和力强：亲和力强,不易解离不易解离,抗体过剩时易形抗体过剩时易形成大而稳定的成大而稳定的ICIC。H H型：亲和力弱型：亲和力弱,易解离。易解离。（二）抗原抗体比例（二）抗原抗体比例v抗体必须适量过剩，以保证抗体必须适量过剩，以保证IC复合物的生成复合物的生成量与浊度的改变一致。量与浊度的改变一致。v抗体过量，抗体过量，IC的形成随着抗原量的增加而递的形成随着抗原量的增加而递增。增。v抗原过量，形成的抗原过量，形成的IC分子小，易发生解离分子小，易发生解离（三）反应条件（三）反应条件 提供：提供：v合适合适pHv合适合适离子强度离子强度:（四）（四）增增浊剂的作用浊剂的作用 v加入加入PEG、Tween-20等，可以促进等，可以促进IC的形的形成，增加反应浊度。成，增加反应浊度。增浊剂作用原理：增浊剂作用原理：是消除蛋白质分子周围的电子云和水化层，促是消除蛋白质分子周围的电子云和水化层，促进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合。进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合。浓度：浓度：3-4%3-4%，过高易引起非特异蛋白沉淀。，过高易引起非特异蛋白沉淀。“伪浊度伪浊度”（五）标本因素（五）标本因素v高血脂易引起非特异反应高血脂易引起非特异反应v内源性免疫复合物影响测定结果内源性免疫复合物影响测定结果v高混浊标本不能用于检测高混浊标本不能用于检测六、免疫浊度测定法的应用六、免疫浊度测定法的应用v主要应用于血液、体液中的特定蛋白系列，主要应用于血液、体液中的特定蛋白系列，（1 1）免疫球蛋白）免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、，（2 2）补体）补体C3C3、C4C4，（3 3）血浆蛋白中的白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、）血浆蛋白中的白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、血清铁蛋白、血清铁蛋白、C C反应蛋白、和载脂蛋白，反应蛋白、和载脂蛋白，（4 4）尿微量蛋白系列）尿微量蛋白系列 （5 5）治疗性药物浓度。）治疗性药物浓度。沉淀反应沉淀反应1.液相沉淀反应液相沉淀反应2.自由扩扩散：单扩、双扩自由扩扩散：单扩、双扩2.凝胶沉淀反应凝胶沉淀反应 定向扩散：火箭与对流免疫电泳定向扩散：火箭与对流免疫电泳 免疫电泳免疫电泳 定向定向-自由联合免疫扩散自由联合免疫扩散 免疫固定电泳免疫固定电泳 透射免疫比浊透射免疫比浊3.免疫浊度分析免疫浊度分析 散射免疫比浊：终点法、速率法散射免疫比浊：终点法、速率法思考题：思考题：v免疫比浊分析的影响因素的哪些免疫比浊分析的影响因素的哪些v沉淀反应的技术分类沉淀反应的技术分类