T∕CAIA∕ SH001-2014 味精 硫化物测定 亚甲基蓝分光光度法.pdf

T/CAIA 中国分析测试协会标准中国分析测试协会标准 T/T/CAIACAIA/SH/SH001001- -20142014 味精 硫化物测定 亚甲基蓝分光光度法 Monosodium glutamateDetermination of sulfide Methylene blue spectrophotometric method 2014-12-24 发布 2015-05-01 实施 中国分析测试协会发布 T/CAIA/SH001-2004 前前 言言 本标准由中国分析测试协会标准化委员会提出并归口。 本标准起草单位： 北京普析通用仪器有限责任公司, 广西壮族自治区食品药品检验所, 北京出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：郑清林，李东明，陈连明，芦静，张涛，高峰，张娜，窦宏亮，吴英良，周素敏，闫永楠 本标准为首次制订。 1 T/CAIA/SH001-2004 味精味精 硫化物测定硫化物测定 亚甲基蓝分光光度法亚甲基蓝分光光度法 1 1 范围范围 本标准规定了用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物含量的方法。 本标准适用于味精中 0.3 mg/kg 4.6 mg/kg 硫化物（以 S2-计）的测定。 2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 1 部分 总则与定义（ISO 5725-1，IDT） GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分 确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（ISO 5725-2，IDT） 3 3 方法提要方法提要 试料用水溶解，酸化后使硫化物转化为硫化氢，同时用空气将硫化氢带至盛有三乙醇胺-EDTA-氢氧化钠的吸收液中，在铁（）存在下，与 N,N-二甲基对苯二胺反应生成亚甲基蓝络合物，在分光光度计上，于 665 nm 波长处测量吸光度。计算硫化物质量分数。 4 4 试剂试剂 除非另有说明，分析中仅使用认可的分析纯试剂和蒸馏水或相当纯度的水。 4.1 磷酸，约 1.70 g/mL，稀释为 1+1。 4.2 硫酸，约 1.84 g/mL，稀释为 1+5。 4.3 氢氧化钠溶液，40 g/L 称取 4 g 氢氧化钠，溶于 100 mL 水中，混匀。 4.4 淀粉指示液，10 g/L 称取 l g 可溶性淀粉，加 5 mL 水使其成糊状，在搅拌下将糊状物加到 90 mL 沸腾的水中，煮沸 1min 2 min，冷却，稀释至 100 mL。使用期为两周。 4.5 N,N-二甲基对苯二胺溶液，10 g/L 称取 1 g N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐，用硫酸（2+1）溶解后稀释至 100 mL。 2 T/CAIA/SH001-2004 4.6 硫酸铁铵溶液，150 g/L 称取 15 g 硫酸铁铵（FeNH4(SO4)25H2O） ，用 40 mL 体积分数 2.5硫酸溶液溶解，用水稀释至 100 mL。如出现不溶物或浑浊，应过滤后使用。 4.7 乙酸锌-乙酸钠溶液 称取 50 g 乙酸锌 (ZnAc22H2O) 和 12.5 g 乙酸钠 (NaAc3H2O) 溶于 1000 mL 水中，混匀。 4.8 抗氧化剂溶液 称取 2 g 抗坏血酸和 0.1 g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8N2Na22H2O） ，溶于 100 mL水中，混匀并贮存在棕色瓶内。使用时配制。 4.9 吸收液 称取 1g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8N2Na22H2O）和 4g 氢氧化钠，用少量的水溶解，加入 10 mL 三乙醇胺，用水稀释至 1000 mL。 4.10 碘溶液，c(1/2 I2) = 0.10 mol/L 准确称取 6.345 g 碘于烧杯中，加入 20 g 碘化钾和 10 mL 水，搅拌至完全溶解，完全转移至500 mL 棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 4.11 硫代硫酸钠标准滴定溶液 4.11.1 配制 称取 26 g 硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)或 16 g 无水硫代硫酸钠，加 0.2 g 无水碳酸钠，溶于 1 000 mL 水中，缓缓煮沸 10 min，冷却。放置两周后过滤。 4.11.2 标定 称取 0. 18 g 于 120士 2干燥至恒重的工作基准试剂重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25 mL 水，加 2 g 碘化钾及 20 mL 硫酸溶液(20%)，摇匀，于暗处放置 10 min。加 150 mL 水(1520)，用配制好的硫代硫酸钠溶液（4.11.1）滴定，近终点时加 2 mL 淀粉指示液(4.4)，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。 同时做空白试验。 硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度c(Na2S2O3)，数值以摩尔每升(mol/L)表示，按式(1)计算: (Na2S2O3) = 1000(1 2) (1) m 重铬酸钾的质量的准确数值，g； 3 T/CAIA/SH001-2004 V1 硫代硫酸钠溶液的体积的数值，mL； V2 空白试验硫代硫酸钠溶液的体积的数值，mL； M 重铬酸钾的摩尔质量的数值，g/mol M(16K2Cr2O7) = 49.031。 4.12 硫化物标准溶液 4.12.1 硫化物标准储备液 取一定量结晶状硫化钠(Na2S9H2O)于布氏漏斗或小烧杯中，用水淋洗除去表面杂质，用滤纸吸去水份。称取约 0.75 g，溶于少量水。将溶液移入 100 mL 棕色容量瓶，用水稀释至刻度，混匀，标定其准确浓度，每次配制硫化物标准溶液 A（4.12.2）之前，均应重新标定。 标定方法：于 250 mL 碘量瓶中，加入 10 mL 乙酸锌-乙酸钠溶液(4.6)、10.00 mL 待标定的硫化物标准储备液和20.00 mL碘溶液(4.10)， 用水稀释至约60 mL。 加入5 mL硫酸溶液(4.2)，立即盖紧瓶塞，混匀。于暗处放置 5 min，用硫代硫酸钠标准滴定溶液(4.11)滴定至溶液呈淡黄色，加入 1 mL 淀粉指示液(4.4)，继续滴定至蓝色刚好消失为终点。记录硫代硫酸钠标准滴定溶液(4.11)的体积，同时取 10 mL 水，作空白试验。硫化物标准溶液的质量浓度(S2-)，数值以毫克每毫升(mg/mL)表示，按式(2)计算： 0122322Na S O16.03SVVcV(2) 式中： V0滴定空白溶液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL； V1滴定硫化钠标准溶液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL； V2待标定的硫化物标准溶液的体积，mL； c(Na2S2O3)硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，mol/L； 16.03硫化物(1/2S2-)的摩尔质量，g/mol。 4.12.2 硫化物标准溶液 A，(S2-) = 10.00 g /mL 以新配制的氢氧化钠溶液(4.3)调节 pH=1012 的煮沸过的水，取约 400 mL，置于 500 mL棕色容量瓶，加 12 mL 乙酸锌-乙酸钠溶液(4.7)，混匀。吸取一定量刚标定过的硫化物储备液(4.12.1)，边振荡边成滴状移入上述棕色瓶，用已调节 pH = 1012 的水稀释至刻度，充分混匀，使之成均匀的含 S2-质量浓度为 10.00 g/mL 的硫化锌混悬液。此溶液在室温下避光保4 T/CAIA/SH001-2004 存，可稳定半年。每次使用时，应充分混匀。 注：硫化物储备液取样量V计算： =10 500(S2)(3) 式中： (S2-) 硫化物标准储备液(4.12.1)的质量浓度，mg/mL； 10 硫化物标准溶液 A 的质量浓度，mg/mL； 500 硫化物标准溶液 A 的体积，mL。 4.12.3 硫化物标准溶液 B，(S2-) = 2.00 g/mL 取 20.00 mL 硫化物标准溶液 A (4.12.2)于 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。使用时配制。 5 5 仪器仪器装置装置 5.1 分光光度计。 5.2 比色管 16 mm（分光光度计附件） 。 5.3 硫化氢发生装置。 硫化氢发生装置 1）50 mL 提取瓶；2）硫化氢检测器；3）10 mL 量杯；4）聚乙烯管3.50.6（内径壁厚，mm） ；5）气泵组件 6 6 分析步骤分析步骤 6.1 测定次数 独立地进行两次测定，取其平均值。 5 T/CAIA/SH001-2004 6.2 试料 称取 1.00g 试样，精确至 0.001g。 6.3 空白试验 随同试料做空白试验。 6.4 测定 6.4.1 将约 1g 试料 （精确到 0.01g） 置于硫化氢发生装置 （5.3） 的提取瓶中。 加入 20 mL 水，溶解，加入 1.0 mL 抗氧化剂溶液（4.8） 。 6.4.2 加入 1.0 mL 吸收液（4.9）和 4.0 mL 水于 10mL 量杯中，连接硫化氢发生装置，开启气泵组件并调节气流，使气泡连续不间断。 6.4.3 加入 1.0 mL 磷酸（4.1）于提取瓶中，迅速盖紧瓶塞，吹气 20 min。将量杯中吸收液转移至比色管（5.2）中。用水稀释至 5.0mL，混匀。 6.4.4 向比色管（6.4.3）中加入 0.1 mL N,N-二甲基对苯二胺溶液（4.5） ，轻轻混匀，再加入 0.1 mL 硫酸铁铵溶液（4.6） ，混匀，放置 5min。 6.4.5 将比色管（6.4.4）置于分光光度计的光路中，或将比色管（6.4.4）中待测溶液转移入 1 cm 吸收皿后将吸收皿置于分光光度计的光路中，以随同试料的空白试验溶液（6.3）为参比，于波长 665 nm 处测量其吸光度。从校准曲线上查得相应的硫化物质量。 6.5 校准曲线的绘制 6.5.1分别移取 0 mL，0.5 mL，1.0 mL，1.5 mL，2.3 mL 硫化物标准溶液 B（4.12.3）于 5 支比色管(5.2)中，加入 1.0 mL 吸收液（4.9） ，用水稀释至 5.0 mL。分别加入 0.1 mL N,N-二甲基对苯二胺溶液（4.5） ，混匀，再加入 0.1 mL 硫酸铁铵溶液（4.6） ，混匀，放置 5 min。 6.5.2将比色管（6.5.1）置于分光光度计的光路中，或将比色管（6.5.1）中待测溶液转移入1 cm 吸收皿后将吸收皿置于分光光度计的光路中，以试剂空白试验溶液为参比，于波长 665 nm处测量其吸光度。以硫化物的质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。 7 7 计算计算 硫化物（以 S2-计）的质量分数，按式（4）计算： 21(S )mwm(4) 式中： 6 T/CAIA/SH001-2004 w(S2-)硫化物的质量分数，mg/kg； m1自校准曲线上查得的硫化物质量，g； m试料质量，g。 8 8 精密度精密度 本标准的精密度数据是在 2015 年由 6 个实验室对硫化物的 5 个水平进行共同试验所确定的。按照 GB/T 6379.1 规定的重复性条件下，各实验室对硫化物的每个水平测定 6 次。原始数据按照 GB/T 6379.2 进行统计分析，硫化物在 0.3 mg/kg 4.6 mg/kg 范围内，重复性限为0.12 mg/kg，再现性限为 0.14 mg/kg。 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于重复性限（r） ，以大于重复性限（r）的情况不超过 5为前提； 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于再现性限（R） ，以大于再现性限（R）的情况不超过 5为前提。 7