DB65∕T 4336-2020 马细管精液(新疆维吾尔自治区).pdf

I二565.020.30DB65疆维吾尔自治区地方标准DB65/T4336一2020马细管精液E.q u l n cSc m c ns t r a w一04一01发布2021一05一01实施拍rn日nZ八OJl代n乙新疆 维吾尔自治区市 场监督管理局发布DB65/T4336一2020言前本标准根据GB. . 7】一2020标 准化 上作 导则第1部分：标准文林！摊i宝构和 起草观则的要求编写本标准由新珊维了I尔自治区畜牧兽民 局提出并组织实施本标准由新沥维石尔自治区畜牧业标准化技术委贝会技术归口二本标准由昭 苏县两戏马业有限责任公司、新栅维吾尔自治区畜牧总站、伊犁哈萨克自治夕七畜牧总站、阿勒泰地区畜牧工作站、伊犁哈萨克自治州 l l1苏l . 4场、昭 苏县畜牧公医J苟起草本标准=Ji要起草入：与：文 忿、许桥、李沁、党乐、罗l l l f J辉、范守民、毋状元、解烧任、杨l巩、刘琦、农d=华、绪洪忠、夏迪娅热合性、乙合f f森皮达巴依、邓夕叨曦、团刃、吕燕、芦文圆，赵沟利、z r= -爷强、马玉辉、孙 瑛瑛木标准实施应用1.，的疑问，清咨询新棍维 一力（乙治区畜牧兽叹局、IJB苏县西域马业有限货任 公司、新弧维7子尔自治区畜牧总站、！J犁哈萨克自治州畜牧总站，阿勒泰地区 畜牧工作站、伊犁哈萨克自治州唱苏马场、昭苏 县击月文公哄局对木示准的修 改意见建议，11兮少乏姗至 新 洲维升尔自i台i K 市J4）监瞥管 理局（乌鲁术齐肖新华，l r i路L臼号）、刀；弧维书呀尔自沙区畜牧公日长局, （今木 齐l. f. J新华 南路40珍号）、昭苏县l Fj践马让有限贵仔公i刃:昭苏县人马大j笠78号J、新抓维八尔自治 区畜牧总站戈r乙份木 齐 市新华南路4邸号）、伊犁哈 萨茫 自治州畜牧总站L伊j市阿哈灭提江跻172，r J-）、阿勒泰地区，t h牧工作 站（阿勒泰市解放终农 林巷8号）、伊犁哈萨克自治州昭苏今升（Il召苏马场场部）、沼苏县畜牧兽医局（日召苏 县鸟孙路84号）。新锻封1互 . 1 - 尔自治区市场监7斗宁拿1 :(）动联系电 话；09912817197；传 真09912311250:l1卜编：830004新栅维：, c尔自治区畜牧兽医局联系电话：0991一8568308；传真099!.8568940：邮编：830004昭苏县i. .r Lj域马业有 限贵任公司联系电话；09()9一602之242：传真0999一6029359；邮编：835600新张维万尔自治区畜牧位，站联系 电话：0991,8560!80；传直0991856() 569；邮编；830004价犁哈萨克自治 州畜牧总站联系电话；0999一8210017；传真[phone]:昨编：835000坷勒泰地区，e i牧工作站联系电话：0906一2122449；传真0906,2133730；邮编：830000仃，犁J合萨克自治州 昭苏马场联系电l舌；0999一6290818；传真0999一6290818;!！石编：835602昭苏县畜牧丹医局联系电话：[phone]；传) (伽99一6029359：邮编；835600DB65/T4336一2020马细管精液本标准规定了马细符丰r Jj液I均术语和定义、要求、少山样、试验方法、判定规州以及标志、包装、贮存和运巧俞的要求。本标准适用于马细管丰青液：注品。2规范性引用文件下列文件对T本文件的应用 是必不可少l内、凡是注日J梦n勺弓i用文件，仅所注口期的版木适用 于本 文件：凡是不注日期的引. l?文件其姗新版木包括所有：勺修改单）适. T于本文件，Gf 3.2828.21. 1一数抽样检验观序第2部分：按极 限质士LQ检 索的孤立批检验J山样方案G田，J 2828.J i- I一数抽样检验程序第t J部分：小总体 声称质赞水，！乙的评定程序GBl T5455液氮生物容怒GB.IT163Q6.: - . i称质11水平复价衣艾验的评定于！序3术语和定义一）：列术语适川于木文卞卜。原精液e j a c t l l a t叫。m o n采集后未经稀释处理的精液，低温保存细管精液c o I( 1s t o r a g os e m c n洛新鲜精液浓缩处理后添加丰肖液稀释液搜丁月价苏环境中进行低温保存或运输的精液。自q八J众口冷冻细管精液f r。：。n、。m e l l将细管精 液超低温冷冻后在 液毓中（一196）长 期保存。3.4精子活力s p e。nn l o t i l i t y在37一38环境下，直线前进运动精子数：l. j总精子数的百分率。3.5精子密度印e r;nd e n s i t y悴毫升 枯液中所含的精一数。3.6DB65/T4336一2020直线前进运动稀子数p r o g r。、s i v c,1:o t i j j t y精 液中呈直线i亡j井运 动才午广的急数。3.7精子畸形率。b n o r n l01s p e n o lp o r ce n t o g e崎形精 子数占c.丰占子数的百分率。3.8细菌菌落数b;：以。r j,0,，口1梅剂 址精 液经J8养后观察到 的细菌菌落数。4要求原精液来源只有种用价值。品种特征l l:显，七产州；能高，体. l) j健l k，系的种马，应来源于获得州（.1也国 外引进 的f中公马，护照或系级颁发种畜禽生产经营许可证: j: .i晋清晰，年龄适当 的种公马。卫内生产利“与场 生产的种公马，等级一级以上；i普齐全，三产性能优越，具有较高的利，川价彼。4门2齐l量地j J .1种30：、L，一50:1、L，热l!l二马品利，30，、L一50m L，温l l J.L马 品利，50m L一80m l.，冷JIL马品种80m L一120n 1L4,1.3外观淡乳自色或灰自色，无脓性分泌物，副性腺较少，无皮毛等异物。4.1.4气味略 有崖味，无尿味、血脚味等异常心叫4.1.5精子活力)45二4.,.6精子密度要1、10个m L,4.1.7精子畸形率蕊】5。4.1.8细菌数切O个。4.2低温保存细管精液产品DB 65/T4336一20204.2.1外观细管无裂浪，内于端封卜I ) 之密印 制 的标公清晰。4.2.2剂型、剂最细，型：0.5m La.2.3储存时间蕊】20！、一4.2.4精子活力30。4.2.5直线前进运动精子数扮5二l）？个，. 义4.2.6精子畸形率蕊20。4.2.7细菌数l 20(）个：4.34.3冷冻细管精液产品外观细管无裂痕，两端封卜甲“密，印制的标志清晰。4.3.2齐l J型拿I!1剂级、鑫牙板l艺：0.5m L。4.3.3精子活力扮25%4,3.4直线前进运动精子数3、！0T个支。4.3,5精子田奇形率返25。4.3.6细菌数蕊800个。5抽样DB65/T433含s e 20205.1方案5.1.1生产方抽样检验按照GB. .172眨8,2，采用极限质爪吸LQ）为8，孤立批模式A热样，确定抽样公马细管精液 产品）样本饿、5.1.2质量监督抽样检验.l r 8封戈监份总体为 生产单位的种公乡细管精液产：.!。按照GB汀2828.11，采用监督质量水平D。为O，选用第二险马立等级j韭行111代，确定抽样种 公马细管才1呀液产r l样本星。5.1。3复检和仲裁抽样检验复检可按 原抽 样 方案确 定币，裁抽污翔安GB.IT16306勺勺要求执行。5.2抽取方法抽习又样木应在 . l, =：l- t洲汗总了扫！随刁I才Ii Il仅。按照妇样方案，对已矾定 取刁羊l i JJ由样公马或批次样本（l, l儿）数，安利r公马或批次顺序寸作列：从贮存设各（容器）中抽取。6试验方法6.16.2外观用日刘（法：其结果符合t Il I管丰击液产。占类型外观的规定指标根拢抽样产况：类型，精子活力、直线前进运动精子数、精子畸形率、细菌数的检验按附录八规定的f J法J七结果应符合4.2或4.3中的规定。6.3检验分类6.3,1常规检验j，品单项检验，是型式检验l一扣的一部分，主 买是在奋生产批入库前和销售出库前的检验。6.3.2型式检验产品全项日检验，足评定产品质以是否符合标准的检验，在生i L.方抽样检验、质批监督抽样检验和复险、们，裁检验时所选定的检验。6.4检验项目检验项l刁和检验周期 见表l。DB 65/T4336一202D表1检验项目、周期检验类型低温保左幻管才肖液）沉召冷冻f l l！诊牛，液检验J灭日要求草，条试验方法!幸、条捡验）胃期4_2.,4.2常规命验4.2.391.视、冬肖一广活 力4.3、4.3每牛产批，入库比l z产六.保存细诊汾变产：洁红钾结滩:l洁外观，倩广；买少4.3.34.2r线的J t-i二动攀l t4.2.4一4.2.7生产方每2个月为一J .Jl检周期在周期内j过行l次寸111检公马细勺七内改曰八口）几“肖J汽l,)衫，吐里：岁数“33一4：飞夕管丰万放产钻l. .7i讯水督检5众，C为不定期逻勺7判定规则7.1常规检验样品所检 验项l; I中任何l项不合格，则判为不合格。了2型式检验样品所检验项口中任f u j l项不合格：则判为不介格。了3抽样检验对群体质t水平的判定7.3.1生产抽样检验的判定按四（: i团r 28282的规定进行判定二7,3.2质t监督抽样检验的判定按照GB. . T2828.11的规定进行判定。8标志、包装、贮存、运输8，标志8.1.1品种种公马的品种 可用代号。代号为该品种第】、第2个汉字的汉语拼音大写宇母。示倒：价犁马的拈种代号YL”。8.,.2内容t I1:彗川液产应在管壁（或包装袋）一上印制 生产场名、公马品种、公马号、生产日期等标志，且标志要i占晰。8.2包装细管 精液产品用O,5m L细管25支包装，再装入灭菌纱布袋，每l包装址不得超过100份。DB65/T433卜一20203,3贮存3.3门低温保存精液产品贮存将灭菌布袋月消 洁毛巾缠绕包褒置于45C设备中贮存。8.3.2冷冻精液产品贮存贮存容器应符台GB汀5458的规定。容器内液氮必须没没冷 冻精液，应经常检查 容器内液氮存很液氮 不足l乃“寸必须添加。8.4运愉运输过程中应有专人负页，1 胶好运输I荧记。8.4.1低温保存精液产品r l q于4C?5的低温运输箱中运输运输过程)，应避免强烈雕动、碰掩。8.4.2冷冻精液产品贮存容器卿定牢冈j：做外部软处外，运输中不得横倒、碰北和强烈振动，保证产异始终浸在液纵DB65/T4336一2Q20附录A（规范性附录）马细管拚液产品质量检验方法抽样样品的收集抽 样；从受检单位细 营丰i, j液贮存设备（容器夕中按规定 边机油取样品。送样；生产 单位或使川单位将TIr取的样显送至检巧贪初构二A.1.2抽样方案A.1.2一，生产方抽样检验按木标准5.1.！确定 样 本效。A.1.22质量监督抽样检验按木标准5.1.2确 定 样 本数甘八1一2.3抽样方法1安公马号或1士次 号顺 序1二列山：沛r人贝现场 疚样本数 随机确定样公l公马氏1.2.4全音肠取样对投产的姆匹公马取样。A.1.3取样方法J . J确定取样的公马，从贮存设备（容器）中随机抽取低温保存精液产品或冷冻 精液产品。低温保存苏青液i乍)和冷冻精液产异：包装赞印七次揪）不礼侧一25份。,1,4样品的保存专入保管，保管期严禁脱离贮存设备（容器）。抽样登记：户与样刀随杆，样品包装、标记应保持原八1门，低温精液的保存：常温清 洁毛巾缠绕包褒，快速 置十4C一5贮存设 备保存。A.,.4.2冻精的保存贮存 容器质里应符合GB/T5458规定。使用前经过消洗后加入新鲜液氮，样品浸在液氮中贮藏。取欣样时在空中暴器时I lIJ不得i迢过105。A.2剂t检查A -2一1主要器材DB 65/T4336一2020小试什、剪刀、水浴 箱、5.0m L试管、1.0m L细管。A.2.2检查 方法同产品类型联二支低温保存精液产品或冷冻精液 产昂37水浴预 热或解冻，而后 剪去两端，把精液倒入一小试管内。用！.U。飞以吸管 准确吸取精液，并检测 其 精液量沙A.2.3计算三支的 刹愉；戒均数为样的刹直i上按式（AQ二二）计算：刀月：一尹了J-.（A幻飞式寿叮币孔;,：】r n Lr匕r匕L气气气第一支1羊, r- r剂1几n第二义1羊, l l!1. . T . J谧，:n,第二文1子认1剂讯，A,3精子活力 的检查A,3r t主要仪器和 器材显1敖镜或显1知包视装置，. 1 .1一t温水浴箱、5.Om上J试管、软玻片针l髻液性状板、盖玻片（!8：。：。、18m。n）、显i: .褪保温箱或恒撇装搜、滴竹二八3.2检查方法同类型产另，将只支低温保存精液产异或冷冻精液产品37水浴 预热或解冻，而后取混合精液50卜L置于载玻片上加书元玻片在保持37, C?38载物台1：用400倍600倍显微镇下观察活力，也可通过匕视显1散装仪在荧光屏上观察活力。每样片观察3个视野夕牛应观察不同液层内的精子运动状态，进行全日评定八3.3计算三个忧野活力评价值的平均 数按 式（A.2）计算；M一竺业竺生,.，.，,.,（八，2 )式,:M-n l-n Z一n宝活力；第一视野活力：第二视野活力；第三视野活力。八4直线前进运动精子数检查A.4门主要器材OB 65/T4336一2020血球i数 f .、 l.色索管、！n l1吸管，小试哨“、计 数器、显微镜或电视显微装置、滴管、3.0氯化牛内溶液：.4,2检查方法取低温保存精液产品或冷冻精液产钻37C水浴预 热或解冻，也可使用A.2检查后 的4羊品用血色素管准确 吸取20L扔液，注入盛有O,48山L的3,O氯化钠溶液的试管内，而 后分伦合均 匀，使之成为50倍稀释精液。将指好的 11. 1球计数板用 血孟片将计数室J监好r用 小吸管吸取一滴稀释精液笠于血盖片边缘，使精液自行流入i. 1一数室1均 匀充杯与不允许有气泡或厚l. u过大1然后在显微镜下或电视荧光异一， 观察计数A4.3计算A.4.3每剂量中精一广数按式（八3）计算：理白减cx250二.（A.3)J仗,:子数万个：格石子数个；八，4.3,2每剂l; : ,，呈直线前j公j二动精 子数按式A.4夕C=s x l，忆.:C每产U石上！，直线前i址丘示讨粘r吃敌个；s每剂觅中才涂J . 数，个；m呀舌力，。i t炸；.八4A.5精子畸型率的检查八5.1主要器材和材料显微竣、载玻片、血球分类计数雄、小吸 针。雀馏水、姬姆萨染料、磷酸二氢呐、磷酸氢二钠、甲醚、甲醉、;:一油、所用试剂为AI弋八5.2试剂配韦I】丰l呀子畸形 率检查试剂配制如下：a）磷酸盐缓冲液磷胶二氢钠（No HZPO。一ZHZO)0.559磷酸氢二钠（Na ZHPO。12H20)2.259双蒸创盯水定容至100m L曰中性福尔马林固定液4D 甲醛IIC卜10（使川前经碳酸镁中和过滤）8,o m L磷酸二；么钠（Na l卜PO42H20)0 ,559磷酸氛二钠（Na ZHPO。12H20)2.259用0,89写条化钠约50.0n 1L溶解后加入8.0m L中和后的甲醛，再）1 : 10的氛化钠 溶液定容至100.0刀IL。9DB65/T4336e e 2020。）姬姆萨原液姬姆萨 染料！.09！一油（C,HS(OH)3)66.(n,L甲醉（CHOH)66.0n L姬姆萨 染料放入研体,. . l少量 甘油允分研磨里无颗；立为! . - :然后将日泊全邵倒入并放入恒温箱中保浸继纠扮荞解4h再勺日甲醉充分 溶解泥匀，过滤后贮于稼色瓶中待用贮存时间越久染色效果越好。d）姬姆护染液姬姆萨原液2 .0m L磷酸盐缓冲液3.0m L蒸馏水5 .0m L姬姆萨染液现户！乙A.5.3制片染色、镜检、计算低温保存枯i l i产钾或冷 冻不液，=.:.1 - 1.3？水 浴 顶 热或解冻也可同时 使用 精子活力枪 在用的样介。：a）抹片取才六液一滴滴于载玻片一端。用另一边缘光淞的载 玻片与样钻的载玻片呈35。，将样钻均匀地涂布于载玻少上，自然风一5而n。每样、l!门均作二个抹片：b川，,LI定汽己风于的抹片上滴土1.o m L一2.0,n L中性福尔与林。i fi i定15而。后 LH 消水缓缓冲去. j l定液，吹一卜或自然风二:;。）染色将固定 好后的抹片反少11在带有平棚的有. 5 t玻璃面上，把姬姆萨 染液滴于酒和抹片之问让共充满、泥咭曲少【“使抹片炙角上染液，染色】s h后 川汾i号水缓缓冲去 处液，晾干待检；d）镜检将制解好的抹片 在400倍一600倍显微谈卜观察，分左、右两个区，姆个抹片观察2叨个以卜的精 子，取几片的平 均值J二片的变异系数不得大t劝，若两片 的变 异系数大于20%，应重折制 片镜检；c丰作j e l崎形率按式（A.5）计算：亡JA了、月一巴、100%式;A畸形率，%;畸形习者子数，个：精子Al-S才总数，个。A.6细菌数的检查A.6.1主要器材和材料培养箱、超净化工作台、三角烧瓶、烧杯、沪）、培养皿、水浴箱、p H试纸（5.5?9.( ) )浸有、蛋自陈、磷酸氢二钾、抓化钠、儿五脂粉、八6.2培养基的配制普通 凉 l 5 旨的制作：羊肉浸材f跃自 肋乏盆筒、玻棒、天平、羊角匙、高压热汽灭菌铝（或微波、棉花、羊皮纸、记号笔、棉绳、纱布、放大讥、全亡肉n l o l/LNa o l l、1r n o l./LHCL、蒸馏水。5.0910.09DB 65/T4336一2020磷酸氢二钾（K:HPO一3H=O)1.09氧化钠（Na c！、5.09用蒸馏水100。巾L溶解后加 琼脂粉209加温融解。矫止p H至7 -4一7.6并那脱脂棉过滤，分装：f三角烧瓶中经高压灭菌（0.1MPa,20m i n）。也P - J使用营养琼脂培养 从其质最应符台GB4789,2的要求。A,6.3检查方法灭 菌平皿事先标号。低振日呆存精液产品或冷 冻精液产品37C水浴预热或解 冻，用 酒精棉 球消毒以无菌操作，将一支！到妾注于个 灭l 2= l平l l内；把凉至SOU左右的普通琼脂以无 菌操吮倾倒入平皿内每皿约！5m L并转动5力且使精液混 合均匀，！找时作空l 1对照 平皿待琼脂凝黝后御转平 皿，哭37c l巨温箱内培养36卜取川计数声Ic l l: L内菌落效，每匹公特样品取一：支作 两个，l，取平均使。八6.4计算所检细管 样完的细菌菌落数按式叹A.6 )i一卜算；n二嗯n之方二.A.6斗2式中细菌 菌落数，个：n In之第一J皿l x l落数，个：第一二一平皿菌落数今二