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脂质体脂质体 Liposomes脂质体 liposomes 1965年被英国Bangham提出磷脂分散在水中可形成多层囊泡，每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开一、概述一、概述 Introductions脂质体的示意图脂质体主要由磷脂和胆固醇组成 磷脂由一个亲水的头部和两个疏水的尾部组成 磷脂的结构示意图载药脂质体的结构示意图 药物被脂质体包封后有以下特点：1靶向性和淋巴定向性 2长效性 3细胞亲和性与组织相容性 4降低药物毒性 5提高药物稳定性 脂质体在体内与细胞的作用过程吸附 adsorption脂交换 lipid exchange内吞作用 endocytosis融合 fusion1中性磷脂磷中性磷脂磷 电中性、化学惰性天然磷脂 磷脂酰胆碱phosphatidylcholine合成的磷脂 二棕榈酰胆碱dipalmitoyl phosphatidyl choline DPPC 二硬脂酰胆碱distearoyl phosphatidyl choline DSPC 鞘磷脂sphingomyelin 磷脂酰乙醇胺phosphatidylethanolamine 二、制备脂质体的材料 Materials for preparation of liposomes2负电荷磷脂负电荷磷脂 负电荷磷脂又称为酸性磷脂磷脂酸 phosphatidic acid,PA 磷脂酰甘油 phosphatidyl glycerol,PG 磷脂酰肌醇 phosphatidylinositol,PI 磷脂酰丝氨酸 phosphatidyl serine,PS 3正电荷脂质正电荷脂质 均为人工合成产品硬脂酰胺 stearylamine,SA 胆固醇衍生物 4胆固醇胆固醇 cholesterol 自然界生物膜中的另一类重要的组分 中性脂质，两亲性分子，亲油性大于亲水性胆固醇的结构 5长循环膜材料长循环膜材料 神经节苷脂 ganglioside GM1GM1引入了唾液酸残基增强了膜的稳定性、减少了网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂质体的体内循环时间 聚乙二醇衍生物 polyethylene glycol derivatives聚乙二醇基则增强了脂质体膜的亲水性，阻止网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂质体的体内循环时间 1薄膜法薄膜法 最早由Bangham报道 磷脂等膜材溶于适量的有机溶剂脂溶性药物可加在有机溶剂中，然后在减压旋转下除去溶剂，使脂质在器壁形成薄膜，加入含有水溶性药物的缓冲液，进行振摇，则可形成大多室脂质体，其粒径范围约1-5m。三、制备脂质体的方法三、制备脂质体的方法 Preparation of liposomes2逆相蒸发法逆相蒸发法 Reverse-phase evaporation 由Szoka提出膜材溶于有机溶剂，加入待包封药物的水溶液，进行短时超声，直至形成稳定的W/O型乳剂，减压蒸发有机溶剂，形成脂质体。一般为大单层脂质体 包封的药物量大它适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质 脂质体膜制备脂质体膜制备 挤压制备小粒径脂质体挤压制备小粒径脂质体 通过挤压使脂质体通过固定孔径的滤膜，脂质体粒径变小。该方法需要很低的压力，689kPa即可。聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane），该膜的通道是直的并且大小相同，脂质体容易通过，即使脂质体直径略大于孔径也能通过。一般将脂质体原液稀释至12mol/ml后再过膜，脂质体易通过孔径。脂质体加压通过孔时，其结构发生变化，根据所需脂质体的大小选择膜的孔径。3主动包封法主动包封法 Remote loading method从根本上改变了难以制备高包封率脂质体的局面。主动包封技术的应用与药物的结构密切相关，不能推广到任意结构的药物，因而受到了限制。弱碱性的药物 采用pH梯度法、硫酸铵梯度法 弱酸性的药物 采用醋酸钙梯度法等。遥控装载遥控装载硫酸铵梯度法硫酸铵梯度法包封阿霉素隐形脂质体 根据化学平衡移动原理而设计的，空白脂质体包封阿霉素的前提是：1.脂质体膜可透过分子型药物；2.离子型化合物较少或几乎不透过脂膜；3.硫酸阿霉素的溶度积 盐酸阿霉素的溶度积。硫酸铵梯度法包封阿霉素的步骤硫酸铵梯度法包封阿霉素的步骤1.制备脂质材料薄膜旋转蒸发；2.用硫酸铵溶液使脂膜水化，形成粗空白脂质体；3.挤压使通过聚碳酸酯微孔滤膜，较大粒径的脂质体被“粉碎”成小粒径的脂质体，得空白脂质体；4.通过透析法或凝胶柱过滤，除去空白脂质体囊泡外部的硫酸铵，从而使脂质体囊泡内、外部的硫酸铵浓度形成了浓度梯度差(1000倍）；5.盐酸阿霉素水溶液与上述空白脂质体混合、60孵育30min、不断振摇，即得。(NH4)2SO4 2NH3+2H+=2NH4+SO42-(DOX-NH2)2SO4 DOX-NH2gel-like precipitate2DOX-NH3.CI2DOX-NH3+2CI-2DOX-NH2+2HCI2DOX-NH2硫酸铵梯度法包封盐酸阿霉素硫酸铵梯度法包封盐酸阿霉素隐形脂质体的隐形机理隐形脂质体的隐形机理4免疫脂质体制备法免疫脂质体制备法 抗体与脂质体结合方法有：（1）吸附法（2）脂质蛋白融合法（3）交联法1形态、粒径及其分布2包封率和载药量的测定3释放度与渗漏率的测定4药物体内分布的测定 四、脂质体的表征 Characterization of liposomes1.脂质体的研究与应用进展2.简述脂质体的概念、特点与用途。3.简述制备脂质体的常用的材料。4.简述pH梯度法制备载药脂质体的原理和方法。思考题思考题