《检验仪器分析》第10章-免疫分析.pptx

免疫分析相关仪器免疫分析相关仪器 第十章第十章 主讲人：周振华主讲人：周振华2教学基本要求教学基本要求v掌掌 握握（1）免疫分析相关仪器检测的基本原理）免疫分析相关仪器检测的基本原理 （2）免疫分析相关仪器的基本结构）免疫分析相关仪器的基本结构 （3）免疫分析相关仪器的使用与维护）免疫分析相关仪器的使用与维护v熟熟 悉悉（1）免疫分析相关仪器的分类和特点）免疫分析相关仪器的分类和特点 （2）免疫分析相关仪器的性能评价）免疫分析相关仪器的性能评价 （3）免疫分析相关仪器常见故障与处理）免疫分析相关仪器常见故障与处理v了了 解解（1）免疫分析相关仪器的发展和作用）免疫分析相关仪器的发展和作用 （2）免疫分析相关仪器的临床应用）免疫分析相关仪器的临床应用第十章第十章 免疫分析相关仪器免疫分析相关仪器第二节第二节 发光免疫分析仪发光免疫分析仪2第四节第四节 时间分辨分析仪时间分辨分析仪4第一节第一节 酶免疫分析仪酶免疫分析仪 3 1第三节第三节 免疫浊度分析仪免疫浊度分析仪3 3第第五五节节 放射免疫分析仪放射免疫分析仪54前前 言言v大量免疫学分析技术被不断地创新、发明，极大地大量免疫学分析技术被不断地创新、发明，极大地促进了临床免疫学检测项目的推陈出新和检测手段促进了临床免疫学检测项目的推陈出新和检测手段的自动化、智能化和网络化。的自动化、智能化和网络化。v基于各种免疫分析技术（基于各种免疫分析技术（酶免疫分析、发光免疫分酶免疫分析、发光免疫分析、免疫浊度分析、荧光免疫分析、放射免疫分析析、免疫浊度分析、荧光免疫分析、放射免疫分析）的仪器也应运而生。的仪器也应运而生。返回目录5第一节第一节 酶免疫分析仪酶免疫分析仪v酶免疫分析（酶免疫分析（enzyme immunoassay，EIA）v目前临床免疫检验最常用目前临床免疫检验最常用的分析技术，具有灵敏度的分析技术，具有灵敏度高，特异性强，试剂稳定，高，特异性强，试剂稳定，操作简单、快速且无放射操作简单、快速且无放射性污染等优点。性污染等优点。返回目录6一、酶免疫分析仪的分型一、酶免疫分析仪的分型返回目录7（一）酶免疫分析技术的分类（一）酶免疫分析技术的分类v根据抗原抗体反应后根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶是否需要分离结合与游离的酶标记物标记物，可分为：，可分为：测定对象主要是激素、药物测定对象主要是激素、药物等小分子抗原或半抗原，其等小分子抗原或半抗原，其测定模式为测定模式为竞争抑制法竞争抑制法，无，无需分离结合和游离的酶标记需分离结合和游离的酶标记物。主要有酶扩大免疫测定物。主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定技术两种方法。技术两种方法。均相酶免疫分析法均相酶免疫分析法 需采用适当的方式将游离的和需采用适当的方式将游离的和结合的酶标记物加以结合的酶标记物加以分离分离，可，可分为液相酶免疫法和固相酶免分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，后者称为疫法两种，后者称为酶联免疫酶联免疫吸附测定吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。）。非均相酶免疫分析法非均相酶免疫分析法 返回目录8双抗体夹心法反应原理示意图ELISA检测方法：双抗体夹心法，间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法91011（二）酶免疫分析仪的类型（二）酶免疫分析仪的类型v根据固相支持物的不同而设计成的酶免疫分析仪可根据固相支持物的不同而设计成的酶免疫分析仪可以分为以分为 磁微粒固相酶免疫分析仪磁微粒固相酶免疫分析仪 管式固相酶免疫分析仪管式固相酶免疫分析仪 微孔板固相酶免疫分析仪微孔板固相酶免疫分析仪微粒固相酶免疫分析仪微粒固相酶免疫分析仪 返回目录12二、酶免疫分析仪的工作原理二、酶免疫分析仪的工作原理 v以临床免疫检以临床免疫检验最常用的验最常用的酶酶标仪标仪为例介绍为例介绍酶免疫分析仪酶免疫分析仪的工作原理。的工作原理。返回目录13二、工作原理二、工作原理 返回目录14v酶免疫分析仪其实就是一台特殊的光电比色计或酶免疫分析仪其实就是一台特殊的光电比色计或分光光度计，根据分光光度计，根据ELISA技术的特点而设计。技术的特点而设计。二、酶免疫分析仪的工作原理二、酶免疫分析仪的工作原理 返回目录15三、酶免疫分析仪的基本结构三、酶免疫分析仪的基本结构v全自动酶标仪可以将整个系统分为全自动酶标仪可以将整个系统分为加样系统加样系统 温育系统温育系统软件控制系统软件控制系统判读系统判读系统液路动力系统液路动力系统洗板系统洗板系统这些这些系统系统既相既相互独互独立又立又联系联系紧密。紧密。机械臂系统机械臂系统返回目录16 温育箱温育箱 反应板反应板 存储器存储器返回目录17X-YX-Y头架头架返回目录18 样品架样品架 5050根装根装 503503返回目录19 4 4根独立根独立 上下上下 吸移管吸移管返回目录20 检检 测测 光光 纤纤返回目录21 反应板反应板 反应板反应板 夹具夹具 返回目录22 清清 洗洗 装装 置置返回目录23 供水箱供水箱 废水箱废水箱 返回目录24四、性能评价四、性能评价v目前国内已经初步建立起一套酶免疫分析仪目前国内已经初步建立起一套酶免疫分析仪性能的评价体系。性能的评价体系。1噪声检测噪声检测2准确度准确度3精密度精密度4灵敏度灵敏度5通道差与孔间差检测通道差与孔间差检测6线性范围线性范围 7双波长评价双波长评价 返回目录25五、仪器的操作与维护与常见故障处理五、仪器的操作与维护与常见故障处理开开 机机参数设置参数设置打开酶联软件，进入主菜单，选择测量模式打开酶联软件，进入主菜单，选择测量模式以及某些参数以及某些参数将离心好的样品，放入样品盘，选择相应的将离心好的样品，放入样品盘，选择相应的测定程序以及试剂盘。测定程序以及试剂盘。样品装载样品装载关关 机机卸载样品盘，清洗管路后关闭仪器卸载样品盘，清洗管路后关闭仪器接通接线板电源，打开酶标仪器开关，仪器接通接线板电源，打开酶标仪器开关，仪器开始自检，自动预热开始自检，自动预热23分钟。分钟。结果结果测定结束后，保存测定结果，并用外置打印测定结束后，保存测定结果，并用外置打印机打印结果机打印结果样本测定样本测定检查无误后，按检查无误后，按”开始开始”键，酶标仪对样品键，酶标仪对样品开始进行测试开始进行测试（一）（一）操操 作作 流流 程程 图图返回目录26（二）仪器的维护（二）仪器的维护v酶免疫分析仪是一种精密的光学仪器，良好的工酶免疫分析仪是一种精密的光学仪器，良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。长其使用寿命。返回目录27安装要求安装要求仪器放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于仪器放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于40分贝分贝操作环境空气清洁，温、湿度适宜操作环境空气清洁，温、湿度适宜避免阳光直射，以延缓光学部件的老化避免阳光直射，以延缓光学部件的老化操作时电压应保持稳定操作时电压应保持稳定保持工作台面干燥、干净、水平，有足够操作空间保持工作台面干燥、干净、水平，有足够操作空间返回目录28日常维护日常维护仪器外部的清洁仪器外部的清洁检查加样系统检查加样系统清洁仪器内部清洁仪器内部 每日仪器工作结束后的维护每日仪器工作结束后的维护处理废弃物处理废弃物返回目录29月维护月维护使用仪器厂商提供的软件执行检查程序，并打印检使用仪器厂商提供的软件执行检查程序，并打印检查结果报告归档；查结果报告归档；检查所有管路及电源线是否有磨损及破裂检查所有管路及电源线是否有磨损及破裂;检查样品注射器及与之相连探针是否有泄露及破损检查样品注射器及与之相连探针是否有泄露及破损;检查微孔探测器是否有堵塞物检查微孔探测器是否有堵塞物;检查支撑机械臂的轨道是否牢固，并检查机械臂及检查支撑机械臂的轨道是否牢固，并检查机械臂及其轨道上是否有灰尘。其轨道上是否有灰尘。返回目录30（三）常见故障处理（三）常见故障处理1洗板头堵塞洗板头堵塞 此故障在该分析仪最为常见此故障在该分析仪最为常见 2加样注射器和硅胶管连接处漏水或脱落加样注射器和硅胶管连接处漏水或脱落 3开机自检时报试剂盘错误开机自检时报试剂盘错误返回目录31第二节第二节 发光免疫分析仪发光免疫分析仪v发光免疫技术发光免疫技术是将发光系统是将发光系统与免疫反应相结合，以检测与免疫反应相结合，以检测抗原或抗体的方法。既具有抗原或抗体的方法。既具有免疫反应的特异性，更兼有免疫反应的特异性，更兼有发光反应的发光反应的高敏感性高敏感性，在免，在免疫学检验中应用日趋广泛。疫学检验中应用日趋广泛。返回目录32一、发光免疫分析仪的分型及特点一、发光免疫分析仪的分型及特点v在常温下，某些特定的化学反应产生的能量使其产在常温下，某些特定的化学反应产生的能量使其产物或反应中间态分子激发，形成电子物或反应中间态分子激发，形成电子激发态分子激发态分子；当其衰退至当其衰退至基态基态时，释放出的化学能量以可见光的时，释放出的化学能量以可见光的形式发射，我们把这种现象称为形式发射，我们把这种现象称为化学发光化学发光（chemiluminescence，CL）v化学发光免疫根据标记物的不同，有化学发光免疫根据标记物的不同，有化学发光免疫化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析、微粒子化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析、微粒子化学发光免疫分析分析、化学发光酶免疫分析和生物发光免疫分析等、化学发光酶免疫分析和生物发光免疫分析等分析方法。现临床以前三者较为常用。分析方法。现临床以前三者较为常用。返回目录33发光免疫分析的基本种类及常用标记物发光免疫分析的基本种类及常用标记物种类种类常用标记物常用标记物化学发光免疫分析化学发光免疫分析氨基酰肼类及其衍生物，如氨基酰肼类及其衍生物，如5-5-氢基邻苯二氢基邻苯二甲酰肼甲酰肼(鲁米诺鲁米诺)等等电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析三联吡啶钌三联吡啶钌微粒子化学发光免疫微粒子化学发光免疫分析分析二氧乙烷磷酸酯（二氧乙烷磷酸酯（金刚烷金刚烷）等）等化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶生物发光免疫分析生物发光免疫分析荧光素荧光素返回目录34（二）常用的发光免疫分析仪的特点（二）常用的发光免疫分析仪的特点全自动化学发光全自动化学发光免疫分析仪免疫分析仪采用采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合，是一个全自动、随机存取、软件相结合，是一个全自动、随机存取、软件控制的智能分析系统控制的智能分析系统。（雅培）（雅培）全自动微粒子化学全自动微粒子化学发光免疫分析仪发光免疫分析仪 采用采用微粒子化学发光技术微粒子化学发光技术对人体内的微量对人体内的微量成分以及药物浓度进行定量成分以及药物浓度进行定量测定。测定。（贝克（贝克曼）曼）全自动电化学发光全自动电化学发光免疫分析仪免疫分析仪磁性微珠包被采用磁性微珠包被采用“链酶亲和素链酶亲和素-生物素生物素”新型固相包被技术，使检测的灵敏度更高，新型固相包被技术，使检测的灵敏度更高，线性范围更宽，反应时间更短线性范围更宽，反应时间更短。（罗氏）（罗氏）返回目录35二、发光免疫分析的工作原理二、发光免疫分析的工作原理（一）全自动化学发光免疫分析仪（一）全自动化学发光免疫分析仪这种免疫分析技术又称为微量倍增技术，包括：这种免疫分析技术又称为微量倍增技术，包括：竞争法：多用于测定小分子抗原物质。竞争法：多用于测定小分子抗原物质。夹心法：多用于测定大分子的抗原物质。夹心法：多用于测定大分子的抗原物质。返回目录36（二）全自动微粒子化学发光免疫分析仪（二）全自动微粒子化学发光免疫分析仪 应应用用经经典典的的免免疫疫学学原原理理，小小分分子子物物质质采采用用竞竞争争法法或或抗体捕获法进行测定，而大分子物质采用夹心法。抗体捕获法进行测定，而大分子物质采用夹心法。返回目录金刚烷37（三）全自动电化学发光免疫分析仪（三）全自动电化学发光免疫分析仪 该类分析仪综合应用了免疫学、链酶亲合素生物素该类分析仪综合应用了免疫学、链酶亲合素生物素包被技术及电化学发光标记技术，按照免疫学方法包被技术及电化学发光标记技术，按照免疫学方法的原理可应用三种抗原抗体反应方法：的原理可应用三种抗原抗体反应方法：检测小分子量蛋白抗原检测小分子量蛋白抗原抑制免疫法抑制免疫法夹心免疫法夹心免疫法桥联免疫法桥联免疫法检测抗体如检测抗体如IgG、IgM检测大分子量物质检测大分子量物质返回目录38 三联吡啶钌标记的三联吡啶钌标记的ECLIA反应原理（夹心法）反应原理（夹心法）返回目录39三、发光免疫分析的基本结构三、发光免疫分析的基本结构全自动化学发光全自动化学发光免疫分析仪免疫分析仪 主机主机微机微机仪器的运行反仪器的运行反应测定部分，应测定部分，包括原材料配包括原材料配备部分、液路备部分、液路部分、机械传部分、机械传动部分、光路动部分、光路检测部分检测部分。仪器的核心部分，仪器的核心部分，是指挥控制中心。是指挥控制中心。其功能有程控操其功能有程控操作、自动监测、作、自动监测、指示判断、数据指示判断、数据处理、故障诊断处理、故障诊断等，并配有光盘。等，并配有光盘。返回目录40电子电子系统系统 流体流体系统系统 分析分析系统系统 主探针主探针系统系统 传送舱传送舱 微电脑微电脑控制控制 全自全自动微动微粒子粒子化学化学发光发光免疫免疫分析分析仪仪 三、发光免疫分析的基本结构三、发光免疫分析的基本结构返回目录41全自动电化学发全自动电化学发光免疫分析仪光免疫分析仪 三、发光免疫分析的基本结构三、发光免疫分析的基本结构就是一台完整的就是一台完整的计算机，并配有计算机，并配有支架及打印系统。支架及打印系统。是检测系统的核是检测系统的核心，主要包括预心，主要包括预清洗区、测量区、清洗区、测量区、试剂区、耗品区。试剂区、耗品区。主要由条形码阅主要由条形码阅读器、标本舱位、读器、标本舱位、标本架转盘、模标本架转盘、模块轨道等组成。块轨道等组成。控制单元控制单元核心单元核心单元 分析模块分析模块返回目录42四、性能评价四、性能评价v目前应用于临床检目前应用于临床检验的发光免疫分析验的发光免疫分析仪有很多种类，具仪有很多种类，具有检测速度快、精有检测速度快、精度好、重复性高、度好、重复性高、条码识别系统、条码识别系统、24小时待机、系统稳小时待机、系统稳定等特点。定等特点。返回目录43四、性能评价四、性能评价项目项目全自动化学发全自动化学发光免疫分析仪光免疫分析仪全自动微粒子全自动微粒子化学发光免疫化学发光免疫分析仪分析仪全自动电化学发全自动电化学发光免疫分析仪光免疫分析仪测定速度测定速度60180个个/h100个个/h80个个/h最小检测量最小检测量10-15g/ml10-15g/ml10-15g/ml重复性重复性CV3%CV3%CV3%样品盘样品盘60个标本个标本60个标本个标本75或或30个标本个标本试剂盘试剂盘13种试剂种试剂24种试剂种试剂18或或25种试剂种试剂急诊标本急诊标本均可随到随做，无需中断运行均可随到随做，无需中断运行返回目录44五、仪器的使用与维护及常见故障的处理五、仪器的使用与维护及常见故障的处理开开 机机参数设置参数设置进入菜单，设定测量参数，放置检测试剂和进入菜单，设定测量参数，放置检测试剂和消耗品消耗品将被测样品放入样品架，输入起始样品栏的将被测样品放入样品架，输入起始样品栏的位置和起始样品编号，选择样品的测试项目位置和起始样品编号，选择样品的测试项目样品装载样品装载关关 机机取出试剂放入冰箱，清理废弃物，清洗探针取出试剂放入冰箱，清理废弃物，清洗探针后，关闭仪器后，关闭仪器打开仪器电源，等待仪器自检，按打开仪器电源，等待仪器自检，按“STARTUP”键启动键启动结果结果测定结束后，可以选择需要浏览的结果，打测定结束后，可以选择需要浏览的结果，打印报告印报告样本测定样本测定按已设定的参数和程序，按按已设定的参数和程序，按“Run”键仪器键仪器自动检测自动检测 全自全自动动化化学发学发光光免免疫分疫分析仪析仪 返回目录45五、操作与维护及常见故障处理五、操作与维护及常见故障处理开开 机机工作前准备工作前准备在主屏幕进行系统设置后，装入各类耗材，在主屏幕进行系统设置后，装入各类耗材，并按要求进行质控和定标并按要求进行质控和定标将样本装入标本架，在试验菜单下输入标本将样本装入标本架，在试验菜单下输入标本架号、标本号以及检测项目架号、标本号以及检测项目样品装载样品装载关关 机机卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，让仪卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，让仪器处于器处于24h待机状态待机状态打开仪器主电源和显示器，开机仪器进行初打开仪器主电源和显示器，开机仪器进行初始化始化结果结果测定结果可自动打印，也可以在菜单下选择测定结果可自动打印，也可以在菜单下选择浏览结果，以标准模式发送结果浏览结果，以标准模式发送结果样本测定样本测定确认标本装载无误后，开始测定操作，仪器确认标本装载无误后，开始测定操作，仪器会自动检查耗材和校准状态会自动检查耗材和校准状态 全自全自动动微微粒子粒子化学化学发光发光免疫免疫分析分析仪仪 返回目录46五、操作与维护及常见故障处理五、操作与维护及常见故障处理开开 机机设置仪器参数，装载各种耗材，运行校准程设置仪器参数，装载各种耗材，运行校准程序，再运行质控和定标序，再运行质控和定标将样本装入标本架，选择标本类型，输入标将样本装入标本架，选择标本类型，输入标本架号、标本号以及检测项目本架号、标本号以及检测项目样品装载样品装载关关 机机卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，关闭卸载标本，清理废弃物，清洗管路后，关闭主电源，关闭供水系统主电源，关闭供水系统打开供水系统和操作电源，开启启动程序，打开供水系统和操作电源，开启启动程序，输入操作者输入操作者ID，进入软件，启动系统操作，进入软件，启动系统操作结果结果可以在仪器上选择浏览结果，也可以打印检可以在仪器上选择浏览结果，也可以打印检测报告，以标准模式发送结果测报告，以标准模式发送结果样本测定样本测定确认启动条件后，按确认启动条件后，按“Start”键，仪器会键，仪器会自动对标本进行测定自动对标本进行测定 全自全自动动电电化学化学发光发光免疫免疫分析分析仪仪 工作前准备工作前准备返回目录47（二）仪器的维护（二）仪器的维护1日保养日保养 保持机器外壳干净。检查系统基本状态，保持机器外壳干净。检查系统基本状态，之后再之后再 按保养程序进入清洗系统进行清洗针。按保养程序进入清洗系统进行清洗针。2周保养周保养 检查主探针上、下导轨，进行特殊清洗。检查主探针上、下导轨，进行特殊清洗。每周保养后一定要做系统检测。每周保养后一定要做系统检测。3月保养月保养 每月用专用不锈钢小刷刷洗每月用专用不锈钢小刷刷洗1次主探针、次主探针、标本采样针、试剂针的内部。生理盐水反复冲洗针标本采样针、试剂针的内部。生理盐水反复冲洗针内部，针外部用酒精擦拭干净，然后上好针。内部，针外部用酒精擦拭干净，然后上好针。返回目录48（三）常见故障处理（三）常见故障处理v全自动的发光分析仪一般都具备很好自我诊断功能，全自动的发光分析仪一般都具备很好自我诊断功能，一旦有故障发生时，仪器一般都能自动检测到，显一旦有故障发生时，仪器一般都能自动检测到，显示错误信息并伴有报警声。示错误信息并伴有报警声。1压力表指示为零压力表指示为零 2真空压力不足真空压力不足 3发光体错误发光体错误 4轨道错误轨道错误 返回目录49第三节第三节 免疫浊度分析仪免疫浊度分析仪v免疫浊度技术将现代光学仪免疫浊度技术将现代光学仪器与自动分析检测系统相结器与自动分析检测系统相结合应用于免疫沉淀反应，可合应用于免疫沉淀反应，可对各种液体介质中的微量抗对各种液体介质中的微量抗原、抗体、药物及其他小分原、抗体、药物及其他小分子半抗原物质进行定量测定。子半抗原物质进行定量测定。返回目录50一、免疫浊度分析仪的分型一、免疫浊度分析仪的分型v（一）免疫浊度技术的分类（一）免疫浊度技术的分类v根据检测原理的不同，免疫浊度技术分为根据检测原理的不同，免疫浊度技术分为透射光免透射光免疫浊度法疫浊度法（turbidimetric immunoassay）和）和散射光散射光免疫浊度法免疫浊度法（nephelometry immunoassay）。）。返回目录51一、免疫浊度分析仪的分型一、免疫浊度分析仪的分型v（二）免疫浊度仪的种类（二）免疫浊度仪的种类ARRAY特种特种蛋白分析仪蛋白分析仪 DBl00特种蛋白特种蛋白分析仪分析仪 BN Prospec特种特种蛋白免疫分析仪蛋白免疫分析仪 IMMAGE免疫免疫浊度分析仪浊度分析仪 返回目录52二、免疫浊度分析仪的工作原理二、免疫浊度分析仪的工作原理v常用免疫浊度仪检测原理基本都是常用免疫浊度仪检测原理基本都是速率散射浊度法速率散射浊度法，所谓速率是指在抗原所谓速率是指在抗原-抗体结合反应过程中，在单抗体结合反应过程中，在单位时间内两者结合的位时间内两者结合的速度速度。v在抗体过量的前提下，悬浮于缓冲液中的抗原在抗体过量的前提下，悬浮于缓冲液中的抗原-抗抗体免疫复合物颗粒通过光束时产生的散射光速率变体免疫复合物颗粒通过光束时产生的散射光速率变化，散射测浊仪在抗原与抗体反应的最高峰测定其化，散射测浊仪在抗原与抗体反应的最高峰测定其复合物形成的量，该信号的强弱与抗原浓度成正比，复合物形成的量，该信号的强弱与抗原浓度成正比，速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度返回目录53三、免疫浊度分析仪的基本结构三、免疫浊度分析仪的基本结构vARRAY特种蛋白分析仪一般由分析仪、计算机、特种蛋白分析仪一般由分析仪、计算机、打印机三部分组成。打印机三部分组成。v分析仪是系统的主要部分，包括散射测浊仪、加液分析仪是系统的主要部分，包括散射测浊仪、加液系统、试剂和样品转盘、卡片阅读器、软盘驱动器系统、试剂和样品转盘、卡片阅读器、软盘驱动器等。等。返回目录54四、性能评价四、性能评价v特种蛋白分析仪通常采用红色激光，散射比浊原理特种蛋白分析仪通常采用红色激光，散射比浊原理测定单个样本中的特定蛋白含量。操作简便，无需测定单个样本中的特定蛋白含量。操作简便，无需做定标曲线，仪器能自动做空白对照。做定标曲线，仪器能自动做空白对照。1精密度精密度2正确度正确度 3线性范围线性范围4测定速度测定速度 5检测标本类型检测标本类型返回目录55五、仪器的操作与维护及常见故障处理五、仪器的操作与维护及常见故障处理开开 机机进入主菜单，进行光源校正，检查所有试剂，进入主菜单，进行光源校正，检查所有试剂，缓冲液等量是否足够，查看废液是否满缓冲液等量是否足够，查看废液是否满 将被测样品放入样品架，输入杯号和项目组将被测样品放入样品架，输入杯号和项目组合号或单选所需项目合号或单选所需项目样品装载样品装载关关 机机清理转盘，清洗仪器后，先关上主机电源开清理转盘，清洗仪器后，先关上主机电源开关，再依序关上显示屏和打印机开关关，再依序关上显示屏和打印机开关 先打开显示屏和打印机电源，最后打开主机先打开显示屏和打印机电源，最后打开主机电源开关，仪器自检后进入待机状态电源开关，仪器自检后进入待机状态结果结果测定结束后，可以选择需要浏览的结果，打测定结束后，可以选择需要浏览的结果，打印报告印报告样本测定样本测定按已设定的参数和程序，按按已设定的参数和程序，按“Start”键仪键仪器自动检测器自动检测 （一）（一）操操 作作 流流 程程 图图 工作前准备工作前准备返回目录56（二）仪器的维护（二）仪器的维护v良好的保养可以延长机器的使用寿命并减少故障的良好的保养可以延长机器的使用寿命并减少故障的发生，因此检验工作者应严格按照操作手册定期对发生，因此检验工作者应严格按照操作手册定期对仪器做以下的保养。仪器做以下的保养。日保养日保养每两个月一次的保养每两个月一次的保养周保养周保养每六个月一次的保养每六个月一次的保养返回目录57（三）常见故障处理（三）常见故障处理1机械传动问题机械传动问题 2流动池液体外流故障流动池液体外流故障 3工作中突然死机工作中突然死机 4中文信息处理系统无检测信号中文信息处理系统无检测信号 返回目录58第四节第四节 时间分辨分析仪时间分辨分析仪v近近 年年 来来，时时 间间 分分 辨辨 荧荧 光光 免免 疫疫 分分 析析（time-resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）作作为一种新型的非放射性免疫标记技术，为一种新型的非放射性免疫标记技术，具有灵敏具有灵敏度高、线性范围宽、应用范围广等优点。度高、线性范围宽、应用范围广等优点。返回目录59一、时间分辨分析仪的分型及特点一、时间分辨分析仪的分型及特点vTRFIA 可以分为均相和非均相两种类型。可以分为均相和非均相两种类型。均相均相均相均相 TRFIA省去了洗涤、分离和加增强液等烦省去了洗涤、分离和加增强液等烦琐的步骤，具有快速、方便等优点，琐的步骤，具有快速、方便等优点，但不足之处是需要特殊螯合剂。但不足之处是需要特殊螯合剂。非均相非均相非均相非均相 TRFIA目前广泛应用于临床，又可以分为目前广泛应用于临床，又可以分为好几种测量方法。好几种测量方法。12返回目录60一、时间分辨分析仪的分型及特点一、时间分辨分析仪的分型及特点协同荧光协同荧光测量法测量法 直接荧光直接荧光测量法测量法 固相荧光固相荧光测量法测量法 解离增强解离增强测量法测量法 非均相非均相TRFIATRFIA 返回目录61二、时间分辨分析仪的检测原理与基本结构二、时间分辨分析仪的检测原理与基本结构v用镧系三价稀土离子用镧系三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标记抗及其螯合物作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，反应后，将结合部分原、抗体、核酸探针等物质，反应后，将结合部分与游离部分分开，根据与游离部分分开，根据稀土离子螯合物的荧光光谱稀土离子螯合物的荧光光谱的特点的特点（特异性强、（特异性强、Stokes位移大、荧光半衰期长）位移大、荧光半衰期长），待背景荧光信号降低到零以后，再进行测定，此，待背景荧光信号降低到零以后，再进行测定，此时所得信号完全是时所得信号完全是稀土元素螯合物稀土元素螯合物发射的特异荧光。发射的特异荧光。根据荧光强度判断反应体系中分析物的浓度，达到根据荧光强度判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。定量分析的目的。（一）检测原理（一）检测原理返回目录62（一）检测原理（一）检测原理v正常情况下，免疫复合物中的稀土离子自身荧光信正常情况下，免疫复合物中的稀土离子自身荧光信号很微弱，若加入一种号很微弱，若加入一种酸性增强液酸性增强液，可使原来微弱，可使原来微弱的荧光信号增强将近的荧光信号增强将近100万倍。万倍。返回目录63（二）基本结构（二）基本结构vDELFIA为台式为台式仪器，由样品处仪器，由样品处理系统、实验运理系统、实验运行系统、检测系行系统、检测系统和电脑数据处统和电脑数据处理系统四部分组理系统四部分组成。成。返回目录64三、性能评价三、性能评价v时间分辨荧光免疫分析仪具有灵敏度高、特异性高、时间分辨荧光免疫分析仪具有灵敏度高、特异性高、线性范围宽、标准曲线稳定性好、试剂有效期长和线性范围宽、标准曲线稳定性好、试剂有效期长和易于自动化等优点，是临床医学实验室理想的免疫易于自动化等优点，是临床医学实验室理想的免疫分析仪之一。分析仪之一。v此外，时间分辨荧光免疫检测动态范围宽，可达此外，时间分辨荧光免疫检测动态范围宽，可达45个数量级；标记物制备简单，稳定性好，有效个数量级；标记物制备简单，稳定性好，有效使用时间长，多数可达使用时间长，多数可达6个月；标记蛋白时反应条个月；标记蛋白时反应条件温和，免疫活性很少受损；测量快速。件温和，免疫活性很少受损；测量快速。返回目录65四、仪器的使用与维护及常见故障处理四、仪器的使用与维护及常见故障处理开开 机机检查试剂和耗材是否到位，检查试剂和耗材是否到位，选择测试模式，选择测试模式，设置系统参数，进行校准、定标和质控设置系统参数，进行校准、定标和质控样品放入样品架，并放到装载位置，创建工样品放入样品架，并放到装载位置，创建工作表，编辑试管架图，输入样品作表，编辑试管架图，输入样品ID和测试项和测试项目目样品装载样品装载关关 机机处理废弃物，清洗管路，关闭电脑电源，关处理废弃物，清洗管路，关闭电脑电源，关闭微孔板处理器和样品处理器电源闭微孔板处理器和样品处理器电源依次打开样品处理器电源依次打开样品处理器电源、微孔板处理器、微孔板处理器电源、计算机电源，运行系统软件电源、计算机电源，运行系统软件结果结果测定结果被保存在指定的文件夹中，可以在测定结果被保存在指定的文件夹中，可以在屏幕浏览结果并发送报告，并打印结果。屏幕浏览结果并发送报告，并打印结果。样本测定样本测定按开始键，仪器显示试剂架各试剂和消耗品按开始键，仪器显示试剂架各试剂和消耗品的情况，检查无误后，点击的情况，检查无误后，点击“OK”。（一）（一）操操 作作 流流 程程 图图 工作前准备工作前准备返回目录66（二）仪器的维护（二）仪器的维护v时间分辨荧光免疫分析仪所在实验室需要适宜的温时间分辨荧光免疫分析仪所在实验室需要适宜的温湿度，实验室应注意清洁，防止灰尘。我们对仪器湿度，实验室应注意清洁，防止灰尘。我们对仪器的维护工作包括：的维护工作包括：1每日维护每日维护 2每周维护每周维护 3每月维护每月维护 返回目录67（三）常见故障处理（三）常见故障处理故障现象故障现象原因分析原因分析处理方法处理方法仪器自检不仪器自检不通过，或在通过，或在开始实验时开始实验时提示错误，提示错误，实验无法继实验无法继续续（1）左侧增强液瓶未拧紧或无增）左侧增强液瓶未拧紧或无增强液或仪器的流量传感器漂移。强液或仪器的流量传感器漂移。（2）测量部件滤光片灰尘较多，）测量部件滤光片灰尘较多，仪器本底过高。仪器本底过高。（3）试剂传送器或微孔板传送器）试剂传送器或微孔板传送器的传感器有灰尘或故障。的传感器有灰尘或故障。（1）重新拧紧增强液瓶。对仪器）重新拧紧增强液瓶。对仪器的流量传感器漂移问题应联系维的流量传感器漂移问题应联系维修工程师修工程师（2）打开仪器盖子，用擦镜头纸）打开仪器盖子，用擦镜头纸擦拭干净。擦拭干净。（3）用酒精棉球擦拭相应传感器）用酒精棉球擦拭相应传感器和滑轨，然后用润滑油擦拭滑轨，和滑轨，然后用润滑油擦拭滑轨，重新引导系统。重新引导系统。不能正常加不能正常加样，实验停样，实验停止止（1）试剂液体量不足，可能由于）试剂液体量不足，可能由于缓冲液（或标记抗体）不够。缓冲液（或标记抗体）不够。（2）试剂液体量过多，可能由于）试剂液体量过多，可能由于缓冲液（或标记抗体）过多。缓冲液（或标记抗体）过多。（3）实验中缓冲液（或标记抗体）实验中缓冲液（或标记抗体）中气泡过多，加样头遇到气泡中气泡过多，加样头遇到气泡由于全自动仪器需要一定的保底由于全自动仪器需要一定的保底量，在实验前应确保有足够的液量，在实验前应确保有足够的液体，但也要注意不要超过一瓶未体，但也要注意不要超过一瓶未用过试剂相应的量，需要溶解的用过试剂相应的量，需要溶解的试剂应提前一天配制，配制时将试剂应提前一天配制，配制时将气泡吸去。气泡吸去。部分吸头无部分吸头无法取到法取到吸头是清洗后重复使用的，如果吸头是清洗后重复使用的，如果未清洗干净，吸头尖部容易堵塞。未清洗干净，吸头尖部容易堵塞。尽量使用新吸头，如果使用旧吸尽量使用新吸头，如果使用旧吸头，使用前应检查吸头的尖端是头，使用前应检查吸头的尖端是否干净。否干净。返回目录68第五节第五节 放射免疫分析仪放射免疫分析仪v放射免疫分析（放射免疫分析（radio immunoassay，RIA）将放将放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性结合在一起，常用于定量测定受检样本中的微量性结合在一起，常用于定量测定受检样本中的微量物质。物质。v由于存在接触放射性物质，以及测定完成后如何妥由于存在接触放射性物质，以及测定完成后如何妥善处置放射性材料等问题，再加上近年来其他标记善处置放射性材料等问题，再加上近年来其他标记免疫分析技术的诞生，放射免疫分析有被取代的趋免疫分析技术的诞生，放射免疫分析有被取代的趋势。势。返回目录69一、放射免疫分析仪的分类一、放射免疫分析仪的分类v放射免疫分析中经抗原抗体反应和结合态的标记抗放射免疫分析中经抗原抗体反应和结合态的标记抗原（原（B）、游离态的标记抗原（）、游离态的标记抗原（F）分离后通过检）分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。测放射性量来反映待测物的含量。v进行放射性量测定的仪器有两类，即液体闪烁计数进行放射性量测定的仪器有两类，即液体闪烁计数仪（主要用于检测仪（主要用于检测射线，如射线，如3H、32P、14C等）等）和晶体闪烁计数仪（主要用于检测和晶体闪烁计数仪（主要用于检测射线，如射线，如125I、131I、57Cr等）。等）。返回目录70二、液体闪烁计数器二、液体闪烁计数器v液体闪烁计数器是医学液体闪烁计数器是医学研究中常用的一种放射研究中常用的一种放射性测定仪器，多用于蛋性测定仪器，多用于蛋白质白质(如细胞因子、激如细胞因子、激素等素等)对细胞增殖分化对细胞增殖分化的影响或分泌表达蛋白的影响或分泌表达蛋白质能力的研究。质能力的研究。返回目录71（一）液体闪烁计数器的工作原理（一）液体闪烁计数器的工作原理v液体闪烁计数器的基本原理是依据射线与物质相互液体闪烁计数器的基本原理是依据射线与物质相互作用产生荧光效应。作用产生荧光效应。v首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子由激发态回到基态时，发出荧光光子。荧光光子被由激发态回到基态时，发出荧光光子。荧光光子被光电倍增管（光电倍增管（PM）接收转换为光电子，再经倍增，）接收转换为光电子，再经倍增，在在PM阳极上收集到好多光电子，以脉冲信号形式阳极上收集到好多光电子，以脉冲信号形式输送出去。将信号符合、放大、分析、显示，表示输送出去。将信号符合、放大、分析、显示，表示出样品液中放射性强弱与大小。出样品液中放射性强弱与大小。返回目录72（二）液体闪烁计数器的基本结构（二）液体闪烁计数器的基本结构基本电基本电子线路子线路 主要由双管快符合、相加电路、主要由双管快符合、相加电路、线性门电路及多道脉冲幅度分析线性门电路及多道脉冲幅度分析器等组成器等组成 自动自动换样器换样器 样品传送机构类型较多，一般使样品传送机构类型较多，一般使用继电器控制的传送带、升降机、用继电器控制的传送带、升降机、轮盘等轮盘等 微机操微机操作系统作系统 多数仪器都可用微机进行工作条多数仪器都可用微机进行工作条件选定、各种参数的校正、读取件选定、各种参数的校正、读取数据等操作数据等操作 返回目录73（三）液体闪烁计数器的使用（三）液体闪烁计数器的使用1样品样品-闪烁液反应体系建立闪烁液反应体系建立 样品和闪烁液按一定比例装入测量瓶，向光电倍增样品和闪烁液按一定比例装入测量瓶，向光电倍增管提供光信号。管提供光信号。2猝灭猝灭 3计数效率测定计数效率测定 由于标准样品与待测样品的猝灭情况不同，就需要由于标准样品与待测样品的猝灭情况不同，就需要对猝灭进行必要的校正来求出每个具体样品相对于对猝灭进行必要的校正来求出每个具体样品相对于标准样品的实际计数效率。目前广泛使用的是外部标准样品的实际计数效率。目前广泛使用的是外部标准源校正法。标准源校正法。返回目录74v酶免疫分析仪种类以及基本工作原理。酶免疫分析仪种类以及基本工作原理。v发光免疫分析仪有几类，各自的工作原理是什么？发光免疫分析仪有几类，各自的工作原理是什么？v免疫比浊的检测原理是什么？免疫比浊的检测原理是什么？v时间分辨荧光免疫分析仪的特点有哪些？时间分辨荧光免疫分析仪的特