SN∕T 5481-2022 进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱∕质谱法.pdf

ICS 6 5. 020. 30CCS B 41SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 54812022进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法Determination of Gentamycin in edible animal and feeds for import and exportI.C-MS/MS2022-07-07 发布2023-02-01 实施中华人民共和国海关总、署发布SN/T 54812022.I / 1刖 后本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国成都海关。本文件主要起草人：于刚、谭志、李永丽、何开蓉、俞凌云、肖宇、林华、李丹丹。ISN/T 54812022进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了食用动物、饲料中庆大霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于进出口工作中牛、猪、羊、鸡的血清牛、猪、羊的尿液和猪饲料中庆大霉素的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4试剂和材料除另有说明外所用试剂均为分析纯.水为GB/T 6682规定的一级水。4 . 1甲醇：色谱纯。4.2 乙睛：色谱纯。4.3 三氯乙酸：优级纯。4. 4 七氟丁酸（Heptafluorobutyric acid, HFBA）：HPLC 级。4. 5甲酸：色谱纯。4.6标准物质:庆大霉素硫酸盐（C19H39N5O7 HzSO,）,含量高于99.0%。4. 7标准储备溶液：1.0 mg/ml-称取4. 6所述标准物质适量.用水配成1.0 mg/mL的标准储备溶 液于塑料容量瓶中，2 8七保存。4.8标准工作溶液（10.0 jug/mL）：吸取4.7所述各标准储备溶液1 ml.于100 ml.塑料容量瓶中.用 水定容至刻度.2 8 保存。4.9 三氯乙酸溶液（5%）：称取三氯乙酸10.0 g.用水200 ml.溶解（常温下保存2个月）。4. 10 七氟丁酸（HFBA）水溶液（500 mmol/I.）：准确量取12. 8 mL七氟丁酸.用水稀释至200 ml. （4 （避光保存.有效期1个月建4. 11七氟丁酸（HFBA）水溶液（50 mmol/L）：准确量取4. 10中七氟丁酸溶液10 mL,用水稀释至 100 mL（4 （避光保存.有效期1个月）。4. 12 七氟丁酸（HFBA）水溶液（5 mmol/L）：准确量取4. 11中七氟丁酸溶液10 ml.,用水稀释至 100 ml.（4（避光保存.有效期1个月）。4. 13七氟丁酸（HFBA）水溶液（10 mmol/L）：准确量取50 mmol/L七氟丁酸溶液10 mL.用水稀释 1S7T 54812022至 100 ml”4. 14 II1.B 固相萃取柱（6 0 mg/3 ml,）。4. 15 0.22 Mm水相滤膜，5仪器设备5. 1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5. 2天平：感量分别为0. 01 g和0. 000 1 g。5.3氮吹浓缩仪。5. 4 高速冷冻离心机（最高转速可达15 000 r/min）。5.5固相萃取装置，6样品的采集与保存6 . 1血样的采集采集动物血样约10 ml.待自然凝固后分离血清.分装于聚四氟乙烯材质小管.加盖密封。6 .2 尿样的采集采集动物尿样约10 ml.12 000 r/min离心10 min后.上清液分装于聚四氟乙烯材质小管.加盖 密封。6 .3 饲料试样采集饲料样品约500 go在实验室粉碎混匀.四分法至约20 g后分装于小塑料袋.密封。6 .4 试样的保存将分装后的血清、尿样于一20 %保存.饲料样品于4 号保存。7测定步骤7. 1提取7. 1. 1血清和尿样试样称取约2 g血清或尿样（精确至0.01 g）于50 ml.离心管中.加入3 ml.三氯乙酸溶液（4. 9）.涡旋 振荡1 min.在4 下10 000 r/min离心5 min.取上清液置于15 ml.离心管中。用2 ml,三氯乙酸溶 液重复提取1次.合并提取液力口 2 ml.七氟丁酸（HFBA）水溶液（4. 11）.混匀.备用。7. 1.2饲料试样称取约2 g试样（精确至0.01 g）,加入5 ml.三氯乙酸溶液（4. 9）.涡旋振荡3 min.在4 下以 10 000 r/min离心5 min.取上清液层置于1 5 ml,塑料离心管中。用5 ml,三氯乙酸溶液（4. 9）重复提 取1次.合并提取液.力口 2 ml.七氟丁酸（HFBA）水溶液（4. 11）,混匀.备用，7.2 净化固相萃取柱14）依次用甲醇、水、七氟丁酸（HFBA）水溶液（4. 12）各3 ml,活化.取备用 2SN/T 54812022液上柱.用水5 mL淋洗.甲醇3 mL洗脱.收集洗脱液于塑料离心管中.置于40 水浴中轻微氮气流吹 干.用七氟丁酸（HFBA）水溶液（4. 12）1.0 ml.溶解残渣.经0.22 ,um滤膜过滤后.待测。7.3 基质工作曲线的配制取空白试样（不含有庆大霉素的动物生物样品或饲料）按7. 1和7. 2进行提取净化,获得基质提取 液。分别吸取适量标准工作溶液（4. 8）.依次加入相应试剂瓶中.用基质提取液定容至1.0 ml.获得 0. 05 mg/L、0. 2 mg/L 0 mg/L、2. 0 mg/L 和 5. 0 mg/L 的系列基质标准工作溶液。7.4 测定条件7.4 . 1液相色谱质谱参考条件7. 4. 1. 1 色谱柱:C ,3 即,2. 1 X100 mm,或相当者。7. 4. 1.2 流速：0. 3 ml./min。7.4. 1.3 柱温箱温度：35七。7. 4. 1.4 进样量：5 ,uLo7.4. 1.5 流动相：10 mmol/L HFBA水溶液（A）和乙睛（B）。梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱条件时间/ min流动相A./%流动相B/%0.090103.010906. 010906. 5901010.090107.4. 1.6离子源：电喷雾离子源。7.4. 1.7扫描方式:正离子扫描。7.4. 1.8检测方式：多反应监测。7.4. 1.9 电喷雾电压：5 5OOV。7. 4. 1. 10 气帘气压力：20psi。7. 4. 1. 11 辅助气压力：GAS1 .6 0 psi；GAS2,60 psi。7.4 . 1. 12 离子源温度：550 。7.4. 1. 13定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量.见表2。表2庆大霉素定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量被测物名称离子对/（m/z）去簇电压/V碰撞能量/eV庆大霉素（C1）478.4/157.15022478. 4/322.2a5041为定量离子.7.4.2 测定7.4.2. 1定性测定在相同试验条件下样品溶液中的被测物的保留时间与基质标准工作溶液中被测物的保留时间比 3S7T 54812022值.偏差在2. 5%之内。待测样品溶液中.被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作 溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值.若偏差不超过表3规定的范围.则可判定为样品中存在庆 大霉素，表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为%相对离子丰度5020501020g/kg牛血清牛尿液回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大卷素10072. 392. 010. 170. 998. 46.120070. 698. 59.275. 996. 09.55008099. 15.18696.06.6B.2猪血清和尿样中添加回收率和精密度表B.2 猪血清和尿样中添加回收率和精密度B. 3羊血清和尿样中添加回收率和精密度名称添加浓度g/kg猪尿液猪血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10074. 288. 612.47090.213.420075. 89611.678.6 10111. 150077989.376. 79810. 3表B. 3 羊血清和尿样中添加回收率和精密度名称添加浓度 Rg/kg羊尿液羊血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10077. 497. 86.279. 686. 89.420079935.177. 2926.450082. 597. 57.08195. 57.06SN/T 54812022B.4 鸡血清和猪饲料中添加回收率和精密度表B.4 鸡血清和猪饲料中添加回收率和精密度名称添加浓度 寤kg猪饲料鸡血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大毒素10079.6-102.86.279. 4100. 88. 420078. 292. 25.177.8 928.350082. 594. 67.081 93.56.07SN/T 5481-2022ZLOdL8tzs I / M S中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 SN/T 54812022*中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023) 编辑部: [phone]-7530网址 www. customskb. com/book 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880X1230 1/16 印张0.75 字数18千字 2023年1月第一版2023年1月第一次印刷 印数1500*书号：135175856 定价12.00元