T∕NAIA 0122-2022 枸杞中玉米黄质、叶黄素、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯和玉米黄素双棕榈酸酯成分的含量测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01 B 38 TB 团团 体体 标标 准准 T/ NAIA 0122-2022 枸杞中玉米黄质、叶黄素、枸杞中玉米黄质、叶黄素、-胡萝卜素、胡萝卜素、-隐黄素棕榈酸酯和玉米黄素双棕榈酸酯成隐黄素棕榈酸酯和玉米黄素双棕榈酸酯成分的含量测定分的含量测定 高效液相色谱法高效液相色谱法 Determination of zeaxanthin, lutein, -carotene, -cryptoxanthin palmitate and zeaxanthin dipalmitate in wolfberry High performance liquid chromatography 2022-07-01发布 2022-07-15 实施 宁夏化学分析测试协会宁夏化学分析测试协会 发发 布布全国团体标准信息平台I前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分 ： 标准化文件的结构和起草规则规定编写。 本文件由宁夏医科大学提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位 ： 宁夏医科大学、宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心（宁夏）、宁夏沃福百瑞枸杞产业股份有限公司、宁夏中宁枸杞产业创新研究院有限公司。 本文件主要起草人 ： 马学琴、马玲、陈欢、杨玲玲、潘泰安、郭荣、余君伟、马宗卫、韩璐、黄钰馨、张霞、孙莹、徐波、马小荣、孙涛、陈国宁、苏晓娟、雷艳、李艳婷、宗蓉、吴琛、沈晓华。全国团体标准信息平台枸杞中玉米黄质、叶黄素、-胡萝卜素、-隐黄素棕榈酸酯和玉米黄素双棕榈酸酯成分的含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞子及枸杞籽油中玉米黄质、叶黄素、-胡萝卜素、-隐黄素棕榈酸酯和玉米黄素双棕榈酸酯5种类胡萝卜素成分含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于枸杞子及枸杞籽油中上述5种类胡萝卜素单个或多个成分含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的类胡萝卜素成分采用正己烷-无水乙醇-丙酮-甲苯（10:6:7:7）混合溶剂提取，用0.1%二丁基羟基甲苯无水乙醇溶液稀释，微孔滤膜过滤，高效液相色谱法测定，相对保留时间定性，外标法加校正因子定量。 5 试剂与材料 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯和GB/T 6682 中规定的一级水。 全国团体标准信息平台5.1 正己烷：色谱纯。 5.2 甲醇：色谱纯。 5.3 乙腈：色谱纯。 5.4 二氯甲烷：色谱纯。 5.5 无水乙醇。 5.6 丙酮。 5.7 甲苯。 5.8 二丁基羟基甲苯（BHT）。 5.9 标准品：玉米黄质（zeaxanthin，C40H56O2，CAS号144-68-3）：纯度98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.10 0.1%二丁基羟基甲苯（BHT）无水乙醇溶液：称取1 g二丁基羟基甲苯（BHT），用无水乙醇定容至1000 mL，混匀备用。 5.11 提取溶剂：分别量取正己烷100 mL、无水乙醇60 mL、丙酮70 mL和甲苯70 mL，混匀备用。 5.12 玉米黄质标准储备液 避光操作，准确称取玉米黄质标准品适量（精确至0.1 mg） ，用二氯甲烷溶解并稀释成0.4 mg/mL的标准储备液，-18下贮存于密封棕色玻璃瓶中。 5.13 玉米黄质标准工作液 避光操作，以0.1%BHT无水乙醇溶液（5.10）作为溶剂，将玉米黄质标准储备液稀释成0.8 g/mL的标准工作液，-18下贮存于密封的棕色玻璃瓶中。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 6.2 分析天平，感量0.00001 g。 6.3 粉碎机。 6.4 超声波清洗器。 6.5 超纯水机。 6.6 0.45 m滤膜，有机相。 7 试样制备 7.1 试样预处理 全国团体标准信息平台取-18冷冻的枸杞子样品，粉碎至粗粉，置干燥器中在-18保存，待用。 7.2 试样制备 枸杞子试样：避光操作，准确称取枸杞子样品粗粉1 g（精确至0.1 mg），置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂（5.11）20 mL，密塞，称定重量，超声30 min，放冷，用提取溶剂（5.11）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2 mL，置5 mL量瓶中，用0.1%BHT无水乙醇溶液（5.10）稀释至刻度，摇匀，经滤膜（6.6）过滤，取续滤液上机待测。 枸杞籽油试样：避光操作，准确称取枸杞籽油2 g（精确至0.1 mg），置20 mL量瓶中，加入提取溶剂（5.11）溶解并定容至刻度，摇匀；取溶液2 mL，置5 mL量瓶中，用0.1%BHT无水乙醇溶液（5.10）稀释至刻度，摇匀，经滤膜（6.6）过滤，取续滤液上机待测。 8 分析步骤 8.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱：C30柱，长250 mm，内径4.6 mm，粒度5 m，或相当者。 柱温：20 。 流动相：A为甲醇-乙腈-水（81:14:5），B为二氯甲烷；梯度洗脱条件见表1。 检测波长：450 nm。 流速：1.0 mL/min。 进样量：20 L。 表1 梯度洗脱表 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 70 30 20 50 50 48 50 50 50 70 30 55 70 30 8.2 测定步骤 分别取玉米黄质标准工作液和平行两份的试样溶液20 L，按8.1条件测定，以相对保留时间确定待测成分峰，以外标法加校正因子计算待测成分含量。上述仪器条件下，玉米黄质标准工作液和枸杞子试样溶液的典型HPLC色谱图参见附录A。 全国团体标准信息平台8.3 方法的检测限和定量限 本文件方法的检测限和定量限参见附录B。 9 结果计算和表达 定性分析：以玉米黄质标准品的色谱峰为对照，计算玉米黄质色谱峰保留时间与各待测成分色谱峰保留时间的比值， 其相对保留时间应在规定值的5%范围之内。 相对保留时间和校正因子见表2。 表2 玉米黄质与待测成分的相对保留时间和校正因子 玉米黄质/待测成分 相对保留时间 校正因子 叶黄素 1.0996 1.3651 玉米黄质 1.0000 1.0000 -胡萝卜素 0.4102 1.1083 -隐黄素棕榈酸酯 0.2549 1.3894 玉米黄素双棕榈酸酯 0.1576 1.1581 定量分析：试样中玉米黄质、叶黄素、-胡萝卜素、-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯的含量以质量分数Xi计，数值以微克每克（g/g）计，按式（1）计算： X= (/) 50 （1） 式（1）中： Ai试样中待测成分的峰面积； As玉米黄质标准工作液峰面积； Cs玉米黄质标准工作液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； f(s/i)玉米黄质与待测成分的校正因子； m试样的质量，单位为克（g）； 50稀释体积，单位为毫升（mL）。 测定结果保留三位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。全国团体标准信息平台附 录 A （资料性附录） 玉米黄质标准品及枸杞子试样色谱图 玉米黄质标准工作液和枸杞子试样溶液的HPLC色谱图见图A.1和图A.2。 图A.1 玉米黄质标准工作液的HPLC色谱图 图A. 2 枸杞子试样溶液的HPLC色谱图 标引序号说明： 1.玉米黄质； 2.-胡萝卜素； 3.-隐黄素棕榈酸酯； 4.玉米黄素双棕榈酸酯。12431全国团体标准信息平台附 录 B （规范性附录） 方法的检测限和定量限 方法的检测限和定量限见表B.1。 表B.1 方法的检测限和定量限 名称 定量限（g/mL） 检测限（g/mL） 叶黄素 0.0786 0.0234 玉米黄质 0.0597 0.0179 -胡萝卜素 0.1217 0.0365 -隐黄素棕榈酸酯 0.2859 0.0858 玉米黄素双棕榈酸酯 0.2820 0.1128 全国团体标准信息平台