T∕QAS 076-2022 青稞中直链淀粉和支链淀粉的含量测定 双波长分光光度法.pdf

ICS 67.060 CCS B 20 T/QAS 团体标准 T/QAS 0762022 青稞中直链淀粉和支链淀粉的含量测定 双波长分光光度法 2022 - 05 - 12 发布 2022 - 05 - 22 实施 青海省标准化协会 发 布 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国科学院西北高原生物研究所提出。 本文件由青海省标准化协会归口。 本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省药品检验检测院、青海金麦杞生物科技有限公司。 本文件主要起草人：谭亮、李玉林、海平、陈涛、马家麟、赵静、俞泽帆、刘亚蓉、杨凤梅、蒋桂娟、王虹蕾、王婷、赵景阳、罗芳。 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 1 青稞中直链淀粉和支链淀粉的含量测定 双波长分光光度法 1 范围 本文件规定了青稞中直链淀粉和支链淀粉的含量测定双波长分光光度法的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、数据处理、结果表示和精密度。 本文件适用于青稞中直链淀粉（检出限：0.25 g/100g，定量限：0.75 g/100g）、支链淀粉（检出限：0.16 g/100g，定量限：0.49 g/100g）的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7648-1987 水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法 GB/T 20264 粮食、油料水分两次烘干测定法 GB/T 21305 谷物及谷物制品水分的测定 常规法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 青稞 Hordeum vulgare L. var. nudum Hook.f. 又称裸大麦、裸麦、米大麦、元麦，为禾本科（Gramineae）大麦属（Hordeum Linn.）一年生高原禾谷类作物，栽培大麦的一种类型，成熟后果实与颖壳易于分离。 来源：GB/T 11760-2021,3.1 3.2 直链淀粉 amylase -D-吡喃葡萄糖基以-(1,4)糖苷键连接成含200个左右葡萄糖基的螺旋形多聚糖大分子。 3.3 支链淀粉 amylopectin -D-吡喃葡萄糖基以-(1,4)糖苷键连接，同时又以-(1,6)糖苷键连接有分支的含300400个葡萄糖基的螺旋形多聚糖大分子。 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 2 4 原理 直链淀粉和支链淀粉与碘试剂作用分别产生蓝色和紫红色的淀粉碘包合物， 在测定波长和参比波长分别在624 nm和425 nm处测定直链淀粉碘包合物的吸光度值， 在测定波长和参比波长分别为536 nm和750 nm处测定支链淀粉碘包合物的吸光度值。 通过各自两个波长的吸光度差值与该溶质浓度成正比可分别求得直链淀粉和支链淀粉的含量，二者之和即为总淀粉含量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 5.1.1 试验用水应符合 GB/T 6682 规定的三级水。 5.1.2 氢氧化钠（NaOH）：含量96.0 %。 5.1.3 浓盐酸（HCl）：含量 36.0 %38.0 %。 5.1.4 碘化钾（KI）含量99.0 %。 5.1.5 碘（I2）：含量99.8 %。 5.1.6 无水乙醇（CH3CH2OH）：质量分数99.7 %。 5.2 标准品 5.2.1 直链淀粉标准品：纯度95 %，来源于马铃薯，其纯品质量鉴定可参照 GB 7648-1987 附录 A中 A.4 要求进行操作。 5.2.2 支链淀粉标准品：纯度85 %，来源于糯玉米，其纯品质量鉴定可参照 GB 7648-1987 附录 A中 A.4 要求进行操作。 5.3 试剂配制 5.3.1 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取 40 g 氢氧化钠固体（准确至 1 mg） ，加水溶解，冷却至室温，转移至 1 000 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。室温下保存，保存期 2 个月。 5.3.2 盐酸溶液（0.1 mol/L）：准确移取 0.83 mL 浓盐酸至 100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。室温下保存，保存期 1 个月。 5.3.3 碘试剂：称取 2 g 碘化钾（准确至 1 mg） ，加入水以形成饱和溶液，再加入 0.2 g 碘（准确至 0.1 mg） ，待碘全部溶解后转移至 l00 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。现配现用，避光保存。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 直链淀粉标准溶液（1.0 mg/mL）：称取 25.0 mg 直链淀粉标准品（准确至 0.1 mg） ，置于 25 mL烧杯中，加入 10 mL 1 mol/L 氢氧化钠溶液，加热煮沸溶解分散 5 min，冷却至室温，转移至 25 mL 容量瓶中，烧杯用水洗涤 3 次后一并转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 5.4.2 支链淀粉标准溶液（1.0 mg/mL）：称取 25.0 mg 支链淀粉标准品（准确至 0.1 mg） ，置于 25 mL烧杯中，然后按本文件 5.4.1 要求进行操作。 6 仪器和设备 6.1 分析天平：感量 1 mg 和 0.1 mg。 6.2 紫外-可见分光光度仪：配有 1 cm 比色皿。 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 3 6.3 pH 计：精度 0.01。 6.4 涡旋混合器：旋速2 800 r/min。 6.5 超声波清洗机：频率 40 KHz。 6.6 电子调温万用电炉：功率 2 KW。 6.7 台式离心机：转速8 000 r/min。 6.8 食物粉碎机：可将固体样品粉碎并通过 150 m（100 目）筛。 6.9 容量瓶：25 mL、100 mL、1 000 mL。 7 分析步骤 7.1 试样制备 7.1.1 样品预处理 用四分法取适量或取全部，除去肉眼可见青稞秆、碎屑、坏粮、小石子等杂质后，取有代表性试样50 g100 g，用食物粉碎机粉碎后，称取0.5 g（准确至 1 mg）粉碎可通过100目筛的青稞样品，置于150 mL三角瓶中，加入2.5 mL无水乙醇，涡旋以润湿样品。 7.1.2 样品溶液 样品润湿后加入10 mL浓度为 1 mol/L氢氧化钠溶液，涡旋混匀1 min，超声分散30 s，置于电炉加热煮沸40 min。冷却至室温，转移至100 mL容量瓶中，三角瓶用水洗涤3次后一并转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以8 000 r/min离心3 min，取上清液备用。 注：在置于电炉加热煮沸时出现个别样品中少量粉末结块或糊在瓶底的情况时， 需要不断振摇分散。 若无法解决时，将已煮好并冷却至室温的样品溶液转移至100 mL容量瓶中，继续往原糊有少量粉末的三角瓶中加2 mL5 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液，涡旋混匀1 min，超声分散30 s，置于电炉加热煮沸至完全溶解，冷却至室温后转移至同一100 mL容量瓶中，将先后两部分样品溶液按本文件7.1.2要求进行洗涤、定容、离心，取上清液备用。 7.2 标准曲线绘制 7.2.1 直链淀粉标准曲线 7.2.1.1 准确移取按本文件 5.4.1 要求配制的直链淀粉标准溶液 0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL、1.0 mL 分别置于 5 个 25 mL 烧杯中。 7.2.1.2 加入 15 mL 水，以 0.1 mol/L 盐酸溶液调节 pH 为 3.0，再加入 0.75 mL 碘试剂，转移至 25 mL容量瓶中，烧杯用水洗涤 3 次后一并转移至该容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 7.2.1.3 静置 5 min 后，用 1 cm 比色皿，以蒸馏水为空白，分别在 624 nm、425 nm 两波长处测定吸光度，以两吸光度差值为纵坐标，直链淀粉质量（mg）为横坐标，绘制直链淀粉标准曲线。 7.2.2 支链淀粉标准曲线 7.2.2.1 准确移取按本文件 5.4.2 要求配制的支链淀粉标准溶液 1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 分别置于 5 个 25 mL 烧杯中。 7.2.2.2 按本文件 7.2.1.2 要求进行操作。 7.2.2.3 静置 5 min 后，用 1 cm 比色皿，以蒸馏水为空白，分别在 536 nm、750 nm 两波长处测定吸光度，以两吸光度差值为纵坐标，支链淀粉质量（mg）为横坐标，绘制支链淀粉标准曲线。 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 4 7.3 测定 7.3.1 样品溶液显色 准确移取两份按本文件7.1要求制备的样品溶液各1.0 mL分别置于25 mL烧杯中（一份作为样品空白对照液，另一份作为样品测定液），均加入15 mL水，以0.1 mol/L盐酸溶液调节pH为3.0，在样品测定液中加入0.75 mL碘试剂，样品空白对照液中不加碘试剂，分别转移至2个25 mL容量瓶中，烧杯用水分别洗涤3次后一并转移至对应容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 7.3.2 样品溶液测定 样品溶液显色后静置5 min后，分别在624 nm、425 nm波长处测定直链淀粉吸光度，在536 nm、750 nm波长处测定支链淀粉吸光度， 并分别在直链淀粉和支链淀粉标准曲线上查得相应两吸光度差值所对应的直链淀粉和支链淀粉质量（mg），即可计算出青稞样品中直链淀粉和支链淀粉含量，二者之和即为总淀粉含量。 8 数据处理 直链淀粉、 支链淀粉和总淀粉的含量1、2和（以干基计，按GB/T 20264、GB/T 21305测定水分），分别按公式（1）、公式（2）、公式（3）计算： .(1) (2) (1) 式中： 1青稞中直链淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）； 2青稞中支链淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）； 青稞中总淀粉（以干基计）的含量，单位为克每百克（g/100g）； m1从直链淀粉标准曲线上查得样品溶液中直链淀粉质量，单位为毫克（mg）； m2从支链淀粉标准曲线上查得样品溶液中支链淀粉质量，单位为毫克（mg）； V1、V2移取制备样品溶液体积，单位为毫升（mL）； V样品溶液显色定容总体积，单位为毫升（mL）； m样品的称样量，单位为毫克（mg）； wm样品的含水量，%。 9 结果表示 9.1 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果。 9.2 结果保留至小数点后一位。 全国团体标准信息平台T/QAS 0762022 5 10 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 _ 全国团体标准信息平台