SN∕T 5469-2022 铁皮石斛鉴定方法.pdf

ICS 65 .020.01CCS B 16SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 54692022铁皮石斛鉴定方法Detection and identification of Dendrohiiun catenation LindL2022-07-07 发布 2023-02-01 实施中华人民共和国海关总署 发布SN/T 5 4 692022.t /. 刖 百本文件按照GB/T 1. 12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中华人民共和国拱北海关技术中心、中华人民共和国上海海关动植物与食品检验 检疫技术中心、中华人民共和国杭州海关技术中心、中华人民共和国海口海关热带植物隔离检疫中心。本文件主要起草人：张卫东、李伟刚、水克娟、薛华杰、张明哲、潘英文、黄永辉、权永兵、徐淼锋、廖 力、林伟、闫邦奇。ISN/T 5 4 692022铁皮石斛鉴定方法1范围本文件描述了铁皮石斛的形态学和DA条形码检验鉴定方法。本文件适用于铁皮石斛及其产品的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 194 95 .2转基因产品检测实验室技术要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1萼片sepal花的外轮花被片。注：包括1片中萼片（背萼片）和2片侧萼片。3.2花瓣 petal内轮花被片中的左右两片。3. 3蕊柱 column融合有雄性及雌性生殖器官的柱状结构。3.4唇瓣 labellum内轮花被片中央的1片变态而成.常有鲜艳的色泽和复杂的结构。4铁皮石斛基本信息学名：Dedrobiui catenatum Lindl.中文名：铁皮石斛异名：Dendrobiiun officinale Kimura &- Migo; Dendrobium tosaense Makino; Dendrobium funius- hanense T. B. Chao, Z. X. Chen & Z. K. Chen； Dendrobium perefauriei Hayata; Dendrobium strick- landianum Rchb. f. iCallista stricklandiana （Rchb. f. ） Kuntze俗名：黑节草、黄石斛分类地位：被子植物Angiosperms.单子叶植物分支Monocots.天门冬目Asparagales.兰科Orchi-1SI/T 5 4 692022daceae,石斛属 Dendrobium o5方法原理根据石斛属的内转录间隔区（internal transcribed spacer 2, ITS2 ）序列特征.应用DNA条形码技 术对铁皮石斛进行鉴定.通过肉眼、放大镜和体视显微镜观察铁皮石斛的茎、叶和花等形态特征进行种 类鉴定。6主要仪器设备、用具和试剂6. 1主要仪器设备PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、体视显微镜、生物显微镜、分析天平（感量0. 1 mg）、低温冷冻 高速离心机、微量分光光度仪、组织研磨器、生物安全柜、冰箱。6.2 用具移液器（1 000L、200 ptLJOO mLJ04、2.5 一，）及配套枪头、放大镜、离心管、研钵、镶子等。6.3 主要试剂Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、75%乙醇、95%乙醇、十二烷基硫酸钠（SDS）、PVP4 0、f-硫 基乙醇、蛋白酶K（20 mmol/L）、RNase A、液氮、TE缓冲液、10XPCR缓冲液、氯化镁（25 mmol/L）、 dNTP（10 mmol/L）,Ta,酶（5 U/记.）、引物、琼脂糖、D A分子量标记和电泳缓冲液。除另有规定外所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T 6682中相关规定。7 鉴定方法7. 1形态学鉴定通过肉眼、放大镜和体视显微镜观察铁皮石斛的茎、叶和花.依据其与近似种的形态特征（参见附录 A、附录B）进行种类鉴定。7.2分子生物学检测7. 2. 1 DNA 提取铁皮石斛DNA提取方法按附录C执行。7. 2. 2 PCR 检测铁皮石斛PCR检测应设置空白核酸提取对照和空白扩增对照.每个样品设置两个平行反应.具体 方式按照GB/T 194 95 . 2中相关规定进行。具体操作按附录D执行.铁皮石斛及常见近似种ITS2基因序列表信息参见附录E。8形态学鉴定特征8. 1石斛属主要形态特征附生草本。茎丛生，少有疏生在匍匐茎上的.直立或下垂.圆柱形或扁三棱形不分枝或少数分枝 2SN/T 5 4 692022具少数或多数节.有时1至数个节间膨大成种种形状.肉质（亦称假鳞茎）或质地较硬.具少数至多数叶。 叶互生扁平圆柱状或两侧压扁先端不裂或2浅裂.基部有关节和通常具抱茎的鞘。总状花序或有时 伞形花序.直立.斜出或下垂.生于茎的中部以上节上.具少数至多数花.少有退化为单朵花的；花小至 大.通常开展：萼片近相似.离生：侧萼片宽阔的基部着生在蕊柱足上.与唇瓣基部共同形成萼囊：花瓣比 萼片狭或宽：唇瓣着生于蕊柱足末端.3裂或不裂.基部收狭为短爪或无爪.有时具距；蕊柱粗短.顶端两 侧各具1枚蕊柱齿.基部具蕊柱是；蕊喙很小；花粉团蜡质.卵形或长圆形.4个离生.每2个为一对.几 无附属物。8.2 铁皮石斛形态特征8. 2. 1基本生物学特性多年生草本。8. 2.2 植株形态特征8. 2.2. 1 茎铁皮石斛的茎直立.圆柱形.长约9 cm35 cm.粗2 mm4 mm.不分枝.具多节.节间长1.3 cm 1.7 cm。8. 2.2. 2 叶叶二列.互生于茎的中部以上.通常3枚5枚.纸质.长圆状披针形.长3 cm4 cm.宽9 mm I I mm.先端钝并且多少有钩转.基部下延为抱茎的鞘.边缘和中脉常带淡紫色。叶鞘常具紫斑.老时其 上缘与茎松离而张开并且与节留下1个环状铁青的间隙。8. 2.2. 3 花总状花序从落了叶的老茎上部发出.通常2朵3朵花。花序柄长5 mm10 mm.基部具2枚 3枚短鞘花序轴回折状弯曲.长2 cm4 cm。花苞片干膜质.浅白色.卵形长5 mm7 mm.先端稍 钝。花梗和子房长2 cm2.5 cm。萼片和花瓣为黄绿色.长圆状披针形.长约1.8 cm.宽4 mm 5 mm.先端锐尖.具5条脉侧萼片基部较宽阔.宽约1 cm。唇瓣白色.基部具1个绿色或黄色的脏服 体.卵状披针形，比萼片稍短.中部反折.先端急尖.不裂或不明显3裂.中部以下两侧具紫红色条纹.边 缘多少呈波状。唇盘密布细乳突状的毛.并且在中部以上具1个紫红色斑块。萼囊圆锥形，长约 5 mm.末端圆形。蕊柱黄绿色.长约3 mm,先端两侧各具1个紫色斑点。蕊柱足黄绿色带紫红色条 纹.疏生毛。药帽白色.长卵状三角形.长约2.3 mm.顶端近锐尖且2裂。8.3 铁皮石斛与近似种的主要区别铁皮石斛与近似种的主要区别参见附录Bo9结果判定9. 1形态学结果判定以茎、叶、花的形态特征为依据符合8. 2所描述的形态鉴定特征的.判定为铁皮石斛。9.2分子生物学结果判定送检样品ITS2基因序列结果与铁皮石斛基因序列相似性最高.最大相似度在99%以上.且形态 3SI/T 5 4 692022学特征符合8. 2描述的形态鉴定特征的.判定为铁皮石斛。送检样品ITS2基因序列结果与铁皮石斛基因序列相似性低于99%,判定为非铁皮石斛。10标本和样品的保存和处理10. 1标本和样品的保存样品应在低温的条件下保存保存期为1年.以备复验。10.2 结果记录与资料保存完整的试验记录包括：样品的来源、种类、时间.试验的时间、地点、方法和结果等.并要有实验人员 和审核人员签字。检测需有最终的试验数据、电泳结果照片等,原始数据应归档.妥善保管.以备复验、 谈判和仲裁。10.3 样品处理保存期满后样品经灭活后妥善处理。4SN/T 5 4 692022附录 A （资料性） 铁皮石斛及近似种形态特征图标引序号说明：1-3-细茎石斛Dendrobium moniliforme （L. ） Sw. ；1.植株,2.唇瓣正面观，3.药帽正面观；46-霍山石斛D. huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng：4 .植株，5 .唇瓣正面观，6.药帽正面观；79-铁皮石斛D.ca/dw Lindl. ：7.植株,8.唇瓣正面观,9.药帽正面观。图A. 1铁皮石斛及近似种形态特征（引自中国植物志）5SN/T 5 4 692022附录 B(资料性)铁皮石斛近缘种类群检索表1234567891011121314151617萼片和花瓣淡黄色、奶黄色至金黄色.除唇瓣外决不带紫色或其他颜色.2萼片和花瓣紫红色、天蓝色、白色或淡黄绿色.有时后来渐转变为淡黄色或乳黄色.先端常染有紫红色.15茎上部常分枝.叶狭长圆形.宽不及7mm.先端2圆裂.细叶石斛D. hancockiiRolfe茎不分枝.叶宽1cm以上先端锐尖、不裂. 3花单生于叶腋.干后蜡质.唇瓣卵状菱形，无任何斑纹.罗河石斛D./MMe标Tang & Wang花通常2至多朵组成总状花序或伞形花序，极罕为单花.干后不为蜡质. 4伞形花序几乎无花序柄.唇盘具2个紫红色斑块.束花石斛Q. Mow汕Wall. & Lindl.总状花序.唇盘不具2个紫红色斑块.5茎上下一致的圆柱形.节和节间不肿胀.6茎常在中部或中部以上的节间增粗.有时呈纺锤形或稍呈棒状.11花序出自已落了叶的茎上.7花序出自带叶的茎中部或中部以上部分，花序柄与茎交成近垂直.花瓣全缘.14花序轴长不及5 cm.唇瓣边缘具啮蚀状细齿.黄花石斛D. dixanthiun Rchb.花序轴长10 cm以上.唇瓣边缘无啮蚀状细齿或不明显. 8唇瓣近圆形凹陷成兜状.杓唇石斛D. moschatmn(Buch. - Ham. ) Sw.唇瓣近圆形，不凹陷成兜状.9花序柄基部被覆着长5 mm20 mm套叠的大鞘.花苞片大.舟状长 1.8 cm 3 cm 线叶石 14 aurantiacum (F. Muell. ) Muell.花序柄基部被覆着长3 mm10 mm套叠的小鞘.花苞片小.卵形.长约5 mm. 10唇瓣圆形.具1个横生的半月形的深紫色斑块.边缘其复流苏.流苏石斛T). fhnhriatum Hook.唇瓣近圆形.具2个栗色斑块.边缘稍啮蚀状.曲轴石斛D. gibsonii Lindl.花奶黄色或淡黄色.唇瓣卵状披针形.边缘不具流苏尖刀唇石斛Wall. & Lindl.花金黄色.唇瓣非卵状披针形.12唇瓣近肾形基部两侧具红色条纹，边缘无流苏.短棒石斛力Rehb.唇瓣非肾形.唇瓣边缘具流苏.13花瓣边缘密生长流苏.唇瓣近圆形.边缘具复式短流苏.苏瓣石斛Rchb.花瓣边缘全缘唇瓣卵状三角形.边缘具很长的流苏.长苏石斛T). brymerlanumRchb. 花序具2朵7朵花.唇瓣金黄色.近肾状圆形.具2个紫色斑块金耳石斛D. hookerianum Lindl.花序具1朵2朵花.唇瓣金黄色.圆形.无紫色斑块.疏花石斛Schltr.茎上的节或节间肿胀.至少在分枝上如此有的呈串珠状.16茎上的节和节间不肿胀.20茎细长多分枝叶生于分枝上部宽不及5 mm.串珠石斛D. falconeri Hook.茎通常粗壮.不分枝.叶宽5 mm以上.17花序柄基部具长2 cm3 cm的鞘.花白色先端紫红色.唇瓣先端微凹，唇盘黄色并且有2个暗紫色 斑块.大苞鞘石角斗ivardianum WarnerSN/T 5 4 692022181920212223242526272829303132花序柄基部具长3 mm6 mm的鞘. 18花苞片较小.卵形.长5 mm6 mm.总状花序出自具叶的茎上端.棒节石斛D. find la ya num Parish & Rchb.花苞片大宽卵形长7 mm10 mm.总状花序出自落了叶的茎上.19茎节肿胀.不为串珠状.唇盘中央横生1个中间不连接的淡黄色、半月形的斑块.基部两侧具数条紫 红色条纹.杯鞘石斛 D. gratimifnitnum Rchb.茎节肿大呈串珠状.唇盘中部以下金黄色.基部无紫红色条纹肿节石斛D. pendulum Roxb.茎下部常狭窄.向上变宽呈压扁的圆柱形.叶先端不等侧2圆裂. 21茎上下一致的圆柱形.22唇瓣宽卵形，远比花瓣大.金钗石斛Q. 。历/e Undl.唇瓣宽长圆形.与花瓣约等大或较小.矩唇石斛D. Rchb.节间的鞘具绿白相间的条纹.玫瑰石斛Q. crepidatutn Lindl. & Paxton节间的鞘无绿白相间的条纹.23萼片和花瓣纯紫色或紫红色.24萼片和花瓣白色、黄绿色或淡黄色.有时仅先端带紫红色. 25花大.普片长约3.5 cm,唇瓣宽卵形.唇盘中部以下具1个深紫色斑块.喇叭唇石斛D.lituitlorum Lindl.花较小.萼片长约2.7 cm.唇瓣菱状圆形.唇盘两侧各具1个深紫红色斑块.紫瓣石斛D. parishii Rchb. f.具1朵2朵花，恻生于具叶的老茎上部.美花石斛D./od由ges Rolfe具1朵3(6)朵花.生于落了叶的茎上. 26花瓣边缘具细齿萼片和花瓣白色带紫红色先端唇瓣肾状圆形白色带紫红色先端唇盘两侧各具1 个黄色斑块.齿瓣石斛 D. devsuZ？ Paxton花瓣边缘全缘.27花苞片大.长1 cm1.2 cm,纸质.萼片和花瓣白色带紫红色先端.药帽密布白色长晶体状的附属物唇瓣桔黄色带紫红色先端.晶帽石斛D. crystallinum Lindl.花苞片小，长2 mm8 mm.膜质.药帽光滑或被细乳突. 28花大.萼片长2. 5 cm 4 . 5 cm.29花小.萼片长不及2. 5 cm.30茎较细长.花序柄短.从茎节上发出.花瓣明显比萼片宽.兜唇石斛D.aphyllum (Roxb.) Fisch.茎较粗壮.花序柄不明显从茎节的舟状凹槽中发出.花瓣与萼片近等宽.报春石斛D. primulinum Wallich &- Lindley花苞片在基部或近中部具横生的赤褐色斑块花白色或黄绿色细茎石斛D. moniliforme (L. ) Sw.花苞片无赤褐色的斑块.31花序轴多少回折状弯曲.唇瓣上面在中部或中部以下具1个横向紫色或紫褐色斑块.铁皮石斛 Lindl.花序轴或花序柄不回折状弯曲.唇瓣上面在前端具1个深紫色斑块. 32茎长6 cm11 cm.稍回折状弯曲.萼片和花瓣淡黄白色带淡粉红色的先端.唇瓣基部两侧边缘和 先端紫色.曲茎石斛 D. /lexicaule Tsi. Sun & Xu茎长20 cm60 cm 劲直.萼片和花瓣乳白色.基部稍带淡黄绿色.唇瓣基部两侧边缘和先端乳白 色.广西石角斗 Dendrobium scoriarum W. W. Sm.注：引自中国植物志。7SI/T 5 4 692022附录C (规范性) 基因组DNA提取方法C. 1检测样品的制备C. 1. 1铁皮石斛植株取铁皮石斛叶片或茎秆0.5 g.加液氮研磨粉碎后进行DA提取。C. 1.2铁皮石斛制品称取0. 5 g铁皮石斛制品加TE缓冲液中浸泡过夜.晾干去除胶质后加液氮研磨粉碎进行DNA提取。C. 2 基因组D、A提取称取100 mg磨碎样品于1.5 mL的灭菌离心管中，加入核分离液100 mmol/L Tris-HCL(pH 8. 0) ,20 mmol/L EDTA(pH8. 0) ,0. 7 mmol/L NaC1.2% PVP4 0,0. 4% 伊琉基乙醇1900*L ,振荡混 匀5 min,7 5 00 r/min离心3 min.弃上清液。如样品胶质较多时.可重复上述操作直至胶质去除干净。 沉淀加入 SDS 抽提液(2%SDS, 100 mmol/L Tris-HCl pH 8. 0,5 0 mmol/L EDTA pH 8. 0,5 00 mmol/ L NaCl,10 mmol/L伊琉基乙醇)5 00 振荡混匀.置于561温浴60 min90 min.期间不断混匀；冷却后加入5 fxl. RNA酶溶液.置37(温浴30 min ；加入150 jxL 5 mol/L K Ac.混匀.置冰上20 min 30 min；加入等体积的酚：三氯甲烷：异戊醇(25 : 24 : 1).振荡均匀.12 000 r/min.离心15 min；取上 清液转移到新的1.5 ml.离心管中.加入等体积的异丙弹.轻轻颠倒3次5次.置于一20号冰箱中放 置40 min；12 000 r/min离心10 min.弃去上清液；加入1 mL 70%乙醇溶液洗涤.12 000 r/min离心 1 min.弃上清液.将离心管在室温下干燥15 min;加入100 TE缓冲液或无菌去离子水.置65 水 浴40 min充分溶解D、A.测定DA浓度和纯度后置于一20 1冰箱保存备用。注：也可使用试剂盒进行DNA提取.具体方法按照试剂盒说明书操作。C. 3 基因组D、A纯度与浓度的测定用微量分光光度仪测定DA的纯度与浓度.分别检测260 nm和280 nm处的吸光值。D、A的浓 度按照式(1)计算.当OD./OD.比值在1.52.1之间时.符合PCR扩增要求。计算公式如下：C-A XNX5 0/1 000 .( 1 )式中：CDNA浓度.单位为纳克每微升(ng/f/L);A260 nm处的吸光值：N 核酸稀释倍数。8SN/T 5 4 692022附录 D(规范性)铁皮石斛条形码片段扩增与序列比对方法I). 1引物信息PCR检测引物序列见表D. 1。表I). 1 PCR引物目标基因引物序列扩增片段大小/bpITSITS2F3 ATGCGATATGTGGTGCGAAT- 3Z515ITS3R5 - GACGCTTCTCCAGACTACAAT- 3I), 2 PCR反应体系PCR扩增反应体系为25 KL，每个反应分别加入1OXPCR缓冲液2. 5ML,dNTP(10 mmol/L) 1 记八上下游引物各1 (10 Mmol/L).Ty DA聚合甑(5 U/fzL)0. 5记.，D、A模板1 ,uL.最后补充ddH/)至总体积为25设置空白提取对照和空白对照.每个样品重复2次。I). 3 PCR反应条件PCR反应条件为：95 预变性5 min； 30个循环为95 变性30 s、5 6 退火45 s、72 延伸1 min;最后72 延伸5 min.PCR结束后产物于4 冰箱保存。D.4 电泳分析取5 “L扩增产物与1位.的6X上样缓冲液混合均匀.在0. 5 XTBE缓冲液配制的1.5%琼脂糖凝 胶中，4 V/cm6V/cm电泳50 min .漠化乙锭(EB)染色后在成像系统中观察.拍照并保存。1). 5 PCR产物测序取剩余PCR扩增产物20 使用DNA产物纯化试剂盒纯化回收产物.进行测序，I). 6 D、A序列数据的处理使用D、A测序仪对目的条带进行双向测序.应用软件进行序列拼接.去除引物区获得包含 242 bp大小的完整ITS2基因序列.序列方向应与PCR扩增正向引物方向一致。登录中药材D、A条 形码数据库或 Gen Bank 数据库 BLAST 鉴定系统(http: blast, ncbi. nlm. nih. gov/Blast. cgi)进行序 列比对。9SI/T 5 4 692022附录 E （资料性） 铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列见表E. 1。表E. 1铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列学名中文名数据库登陆号凭证标本序列D. catena turn铁皮石斛KC331002. KC331001.KC331000.KC330999、KC330998、KC330996.KC330993、KC330994、KC330993.HM39O367、EUOO3U3、AF5 21617、KF263970.EF22185 4 .HAP00321.TS10、TS09、TS08、TS06、TS 3、TP01,T8ATTTTATCTCTCCGTGCCTA-ATCTCCCATCCATGGATGTGT-TACTAAGGCTCGGATGTGCATG-GTGGCTCCTCGTGCCCCTTGGT-GCGGCGGGCTGAAGGGCGGGT-CATCTTCTCGTTGGTTGCCAA-CAATAAGGGGTGGATTA-AAAAAGGCCTATGCTATTGT-GATAAGCGCGCCCGAGAGATGAT-CATACTTTTTAGGTGATC-CCAATCCATGCGCTAATCCATG-GATGGCGTATCGAATD. inoniliforme细茎石斛KF263971、KF14 34 89、HQ114 24 6、GU339111.AF314 136.ATTTTATCACTCCGTGC-CTACTCTCCCATCCATGGATGTGT-TGCTAAGGCTCGGATGTGCACG-GTGGCTCGTCGTGCCCCTTGGT-GCGGCGGGCTGAAGGGCGGGT-CATCTTCTCGTTGGCTGCCAA-CAATAAGGGGTGGATTAAATA-AGGCCTATGCTATTGTGT-CAAGCGCGCCCGAGAGATGGT-CATACTTTTTAGGTGATCCCAAT-TCATGCGTTGATCCATGGATG-GCGTATCGAATD. scoria ruin广西石斛KF14 35 08ATTTTATCTCTCCGTGCCTA-ATCTCCCATCCATGGATGTGT-TACTAAGGCTCGGATGTTCATG-GTGGCTCCTCGTGCCCCTTGGT-GCGGCGGGCTGAAGGGCGGGT-CATCTTCTCGTTGGTTGCCAA-CAATAAGGGGTGGATTA-AAAAAGGCCTATGCTATTGT-GATAAGCGCGCCCGAGAGATGAT-CATACTTTTTAGGTGATC-CAAATCCATGCGCTAATCCATG-GATGGCGTATCGAAT10SN/T 5 4 692022表E. 1铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列（续）学名中文名数据库登陆号凭证标本序列D. flexica ule曲茎石斛AF35 5 5 7OATTTTATCTCTCCGTGCCTA-ATCTCCCATCCATGGATGTGTT- GCTAAGGCTCGGATGTGCATGGT- GGCTCCTCGTGCCCCTTGGTGCG- GCGGGCTGAAGGGCGGGTCATCT- TCTCGTTGGTTGCCAACAATA- AGGGGTGGATTAAAAAAGGTC- TATGCGATTGTGATAAGCGCGC- CCGTGAGATGATCATACTTTT- TAGGTGAGCCCAATTCAT- GCGCTAATCCAGGAGGCG-TATCGAATD. loddigesii美在石斛KF14 34 81、JN3885 69、HM5 9O374、EU5 92O16,EU1214 18.AF314 134ATTTTATCGCTCTGTGCCAAGC-TACCCATCGATTGATGTGTTG-GCGAAGGCTTGGATGTGCATTAT-GGCTCATCGTGCCCCTGGGCGCG-GCGGGCTGAAGAGCGGGTCAT-CATCTCGTTGGCTGCGAACAATA-AGGGGTGGACTGAAGGGAGAC-CTATGCTATTGTGTCGTGCATGC-CTAAGAGTTGATCATACCTTT-GAGGAGATCCCAAATCAT-GCGTCGATCTATGGACG-GCGCTTTGAATD. nobile金钗石斛JN3885 79 HQ114 219 HQ114 218.HQ114 217 . HM5 9O382. FJ8O4 14 6.FJ804 14 5、 FJ804 14 4 . FJ8O4 14 3.FJ804 14 2、 FJ804 14 1. FJ8O4 139、FJ804 138 FJ8O4 137.FJ8O4 136.FJ8O4 135ATTTTATCGCTCCGTGC- CTAGTCTCCCATCCATGGATGT- GTTGCCAAGGCTCGGATGTG- CACGGTGGCTCGTCGTGCCCCTTG- GTGCGGCGGGCTGAAGGGCGGGT- CATCTTCTCGTTGGCTGCCAA- CAATAAGGGGTGGATTAAATA- AGGCCTATGCTATTGTGT- CAAGCGCGCCTGAGAGATGGT- CATACTTATTAGGTGATCCCAAT- TCATGCGTCGATCCATGGATG- GCGTATCGAAT11SN/T 5 4 692022表E. 1铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列（续）学名中文名数据库登陆号凭证标本序列D. devonianiun齿瓣石斛KC34 6888.HQU4 24 4 .FJ384 735ATTTAGATGCTCCGTGCCTTGT- CATCAATTTATGGAAGTGTTGGT- GAAGGCTCGGATGTGCATGGTG- GCTCGTCGTGCTCCTCGGCACG- GCGGGCTGAAGAGCGGGGCAT- CATCTCGTTGGCTGCGTACAATA- AGTGGTGGATAAAGGATAAGGC- CTATTGTATTGTGCGTGCATGC- CCGAGAGATGATCATATTATTTT- GGTGATCCCAAATCATGCGTC- CATCCTTAGATGACGTTTTGAATD. a phyllum兜唇石斛KF14 34 30. JN3885 71s HQ114 24 8、 HQ114 24 7、HM5 9O384、FJ4 28219、 HMO5 4 5 5 6 EU84 O691. AF35 5 5 73ATTTTATCGCTCCATGCCTAGC-CACACATCGATGGATGTATTG-GCAAAGGCTCGGATGTGCACGGT-GGCTCGTCGTGCCCCTCGGCACG-GCGGGCTGAAGAGCGGGTCAT-CATCTCGTTGGCTGCGAACAAT-ACGTGGTGGATTAAAGCAAGGC-CGATGCTATTGTGTCGTGCATGC-CTAAGAGATGATCATACCTTT-GAGGTGATCCCAAATCATGCGTT-GATCCATGGATGGCGCTTTGAATD. den si flo-runi Lindl.密花石斛JF713O97、HMO34 626、AF314 129、HMO5 4 627GTTATGTCGCTCCGTGTTAACTC- CATCCCATCGATGTATGGGCTG- GCGAAGGCTCGGATGTGCAGTGT- GGCTCGTCGTGCCCCTTGGTGCG- GCGAGCTGAAAAGCGGGTAAT- CATCTCGTTGGCTGCGAACGATA- AGGGGTGGATTAAAGCGAGAC- CTATGTTATTGTGTCGTGTATGC- CCGAGAGAAGATTATACATACT- CAGGTGATCCTGAATCAT-GCGTCGATCAAAGGACGGCGCTT- GGAAT12SN/T 5 4 692022表E. 1铁皮石斛及近似种内转录间隔区（ITS2）序列（续）学名中文名数据库登陆号凭证标本序列D. fimbrial tun流苏石斛EUOO3116ATTACGTCGCTCCATGCCAAGT-CACCCATCGATGGATGGGCCG-GCGTAGGCTCGGATGTGCACAGT-GGCTCGCCGTGCCCCTCGGTGCG-GCGGGCTGAAGAGCGGGTCAT-TATCTTGTTGGCTGCAGGCAATA-ATGGGTGGATAAATGCGAGGC-CTATGTTATTGTGTCGTGCATGC-CTAAGATATGATTAAACTTTT-TAGGTGATCCCAAATCAT-GCGTCGATCCACGGATG-GCGTTTTGAAT13SN/T 5 4 692022参 考 文 献1国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015版)M.北京：中国医药科技出版社.2015.2陈士林.中药DNA条形码分子鉴定M.北京：人民卫生出版社.2012.3陈士林.中国药典中药材DNA条形码标准序列M.北京:科学出版社.2015.4 吉占和.中国植物志：第19卷M.北京：科学出版社，1999.5 刘仲健.张玉婷王玉等.铁皮石斛(De小。历z cafe必快速繁殖的研究进展一兼论其 学名与中名的正误口.植物科学学报,2011 ,29(6):763-772.6 Zhu G. 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