T∕JAASS 39-2022 优质动物源性肥料质量检测技术规范.pdf

ICS 65.080CCS B 10团体标准T/JAASS 39-2022优质动物源性肥料质量检测技术规范Technical specification on quality detection of animal-derived manure of highquality20220318 发布20220318 实施江苏省农学会江苏省农学会发 布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/JAASS 39-2022I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 评价指标.24.1 基本技术指标.24.2 限量指标.25 评价方法.35.1 抽样工具.35.2 抽样方法和数量.35.3 感官评价.35.4 有机质和总养分的测定.45.5 水分测定.45.6 pH 值测定.45.7 机械杂质含量的测定.45.8 粪大肠菌群数的测定.45.9 蛔虫卵死亡率的测定.45.10 As、Cd、Pb、Cr、Hg 的测定.45.11 抗生素的测定.45.12 农药的测定.45.13 结果判断.4附录 A. 5全国团体标准信息平台T/JAASS 39-2022II前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则编写。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农学会提出并归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所、南京禄口禽业发展有限公司。本文件主要起草人：何涛、魏瑞成、王冉、龚兰、李俊、陈明、朱磊、陈贤华、刘黑头。全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20221优质动物源性肥料质量检测技术规范1范围本文件规定了动物源性肥料的定义、评价指标和评价方法。本文件适用于以畜禽粪便、 动物残体和以加工用动物产品所产生的下脚料为原料， 并经发酵腐熟后制成的有机肥料。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 15618土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准GB 38400肥料中有毒有害物质的限量要求GB/T 19524.1肥料中粪大肠菌群的测定GB/T 19524.2肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T 8576复混肥料中游离水含量的测定 真空烘箱法GB/T 32951有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力霉素的含量测定GB/T 40462有机肥料中19种兽药残留量的测定 液相色谱串联质谱法NY 884生物有机肥NY/T 525有机肥料NY/T 798复合微生物肥料NY/T 1978肥料汞、砷、镉、铅、铬含量的测定3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1动物源性肥料animal-derived manure指主要以畜禽粪便、 动物残体和以加工用动物产品所产生的下脚料为原料， 经发酵腐熟后生产的有机肥料。3.2优质动物源性肥料animal-derived manure of high quality全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20222指产品的基本技术指标符合甚至高于要求，同时不超过限量指标规定的动物源性肥料。4评价指标4.1基本技术指标感观评价：产品剂型包括粉剂和颗粒剂两种。粉剂产品应松散、无恶臭味；颗粒剂产品应无明显机械杂质、大小均匀、无腐败味。技术指标：如表 1 所示。表1 产品技术指标要求项目技术指标有效活菌数（cfu）/（亿/g）（可选项）0.20有机质（以干基计）/ %35.0总养分（氮+五氧化二磷+氧化钾，以干基计）/ %5.0水分/ %30.0pH 值=5.58.5机械杂质的质量分数0.54.2限量指标4.2.1微生物限量指标有机肥产品微生物限量技术要求应符合 NY/T 525 的要求，见表 2。表2 产品微生物限量指标要求项目限量指标粪大肠菌群数/（个/g ）100蛔虫卵死亡率/ %954.2.2重金属限量指标有机肥产品 5 种重金属限量技术要求应符合 NY/T 525 的要求，见表 3。表3 产品重金属限量指标要求项 目限量指标总砷（As）（以烘干基计）/（mg/kg）15总汞（Hg）（以烘干基计）/（mg/kg）2全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20223总铅（Pb）（以烘干基计）/（mg/kg）50总镉（Cd）（以烘干基计）/（mg/kg）3总铬（Cr）（以烘干基计）/（mg/kg）1504.2.3抗生素限量指标有机肥产品抗生素限量技术指标符合表 4 的要求。表4 产品抗生素限量指标要求项目限量指标四环素类（以烘干基计）/（mg/kg）1磺胺类（以烘干基计）/（mg/kg）1喹诺酮类（以烘干基计）/（mg/kg）1大环内酯类（以烘干基计）/（mg/kg）1酰胺醇类（以烘干基计）/（mg/kg）14.2.4有机肥产品农药限量技术指标有机肥产品农药限量技术指标符合表5的要求。表5. 产品农药限量指标要求项目限量指标六六六总量不得检出滴滴涕总量不得检出5评价方法5.1抽样工具按照 NY 884 规定，抽样前预先备好无菌塑料袋（瓶）、金属勺、剪刀、抽样器、封样袋、封条等工具。5.2抽样方法和数量按照 NY 884 规定，在产品库中抽样，采用随机法抽取。抽样以袋为单位，随机抽取 510 袋。在无菌条件下，从每袋中取样 300500 g，然后将所有样品混匀，按四分法分装 3 份，每份不少于 500 g。5.3感官评价全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20224用目测法测定：取少量样品放在白色搪瓷盘（或白色塑料调色板）中，仔细观察样品的颜色、形状和质地，辨别气味，应符合 4.1 的规定。5.4有机质和总养分的测定分别按照NY/T 525中附录C和附录D规定的方法测定。5.5水分测定按照GB/T 8576中规定的方法测定。5.6pH 值测定按照NY/T 525中附录E规定的方法测定。5.7机械杂质含量的测定按照NY/T 525中附录G规定的方法测定。5.8粪大肠菌群数的测定按照GB/T 19524.1中规定的方法测定。5.9蛔虫卵死亡率的测定按照GB/T 19524.2中规定的方法测定。5.10As、Cd、Pb、Cr、Hg 的测定按照NY/T 1978中规定的方法测定。5.11抗生素的测定四环素类药物的检测按照GB/T 32951规定的方法测定。磺胺类和喹诺酮类药物的检测按照GB/T 40462规定的方法测定。大环内酯类和酰胺醇类药物的检测参考附录A推荐的方法测定。5.12农药的测定六六六总量和滴滴涕总量测定按照 GB15618 中规定的方法测定。5.13结果判断对肥料产品的基本技术指标和限量指标进行综合评价， 对于基本技术指标符合甚至高于要求， 同时不超过限量指标规定的肥料产品，可以认定为优质动物源性肥料。全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20225附录A（资料性）有机肥中喹诺酮类和酰胺醇类兽药残留的测定 液相色谱-串联质谱法A.1 原理样品采用甲醇、乙腈、Na2EDTA-mcllvaine缓冲液等组合提取试样中的待测物，用水稀释后过滤，滤液过固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。A.2 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。对照品纯度均 97%。乙腈：色谱纯。甲醇：色谱纯。甲酸：色谱纯。0.1 mol/L柠檬酸溶液：取柠檬酸21.01 g，用水溶解并稀释至1000 mL。0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠28.41 g，用水溶解并稀释至1000 mL。Mcllvaine缓冲溶液：取0.1 mol/L柠檬酸溶液1 000 mL、0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液625 mL，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至4.00.05。0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液： 取乙二胺四乙酸二钠60.5 g， 加Mcllvaine缓冲溶液1625 mL，溶解，混匀，根据需要用NaOH或HCl调pH值4.0和6.0备用。10%乙腈水溶液：取乙腈10 mL，加水90 mL，混匀。0.1%甲酸水溶液：取500 L甲酸，加水500 mL，混匀。标准储备液（1.0 mg/mL）：分别精密称取药物对照品适量，置容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别配制成1 mg/mL的标准储备液。于-20下避光保存，有效期6个月。混合标准中间工作液（10.0 g/mL）：分别准确吸取标准储备液各100 L，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成10 g/mL的混合标准中间工作液。于28避光保存，有效期1个月。亲水-亲酯固相萃取柱，200 mg/6 mL，或相当者。A.3 仪器和设备液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源）、离心机、超声波清洗器、固相萃取装置、氮吹仪。A.4 样品的制备与保存A.4.1 样品制备取适量空白或供试粪便样品，冷冻干燥后研磨，过0.45 mm孔径的分析筛。全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20226取研磨的供试样品，作为供试试料。取研磨的空白样品，作为空白试料。取研磨的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。A.4.2 试料的保存粪便样品-20以下保存。A.5 分析步骤A.5.1 提取准确称取试样3.0 g于50 mL离心管中，加入15.0 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（pH=4.0），涡旋30 s，振荡10 min，超声20 min，8000 r/min离心5 min。移取上清液至另一离心管中，重复提取两次，合并上清液。加入10 mL 正己烷，振荡5min，10000 r/min离心5 min，移取下层溶液备用。A.5.2 净化固相萃取柱依次用6 mL甲醇、6 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（pH=4.0）活化，移取全部备用液过柱，控制流速3 mL/min，水10 mL淋洗，抽干。甲醇8 mL洗脱，收集洗脱液，于40下氮气吹干，加入流动相1.0 mL溶解残余物，超声2 min，过0.22 m滤器供液相色谱-串联质谱仪测定。A.5.3 基质匹配标准曲线的制备取各空白试料，按上述方法处理得到空白样品基质溶液。精密量取适量混合标准工作液，用空白基质溶液稀释，制备5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL和800 ng/mL的基质匹配标准浓度系列，现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算回归方程和相关系数。A.5.4 测定A.5.4.1 液相色谱参考条件色谱柱：C18柱，柱长100 mm，柱内径2.1 mm，粒度1.7 m，或相当的分析柱。柱温：40 。流速：0.30 mL/min。进样量：10 L。流动相系统1：A相：甲醇、B相：0.1%甲酸溶液，梯度洗脱，梯度见表1。表1 流动相、流速及梯度洗脱条件1时间A相（%）B相（%）/2980.5298全国团体标准信息平台T/JAASS 39-202274.025757.060407.19558.095510.0298流动相系统2：A相：甲醇、B相：0.1%甲酸溶液，梯度洗脱，梯度见表2。表2 流动相、流速及梯度洗脱条件2时间A相（%）B相（%）/10903.590105.090107.01090A.5.4.2 质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI+/ESI-）。检测方式：多反应监测（MRM）。喷雾电压：()5500 V。雾化温度：550 。气帘气：30 psi。雾化气：65 psi。定性离子对、定量离子对和碰撞电压参考值见表3。表3 定性离子对、定量离子对和碰撞电压化合物扫描模式流动相系统定性离子对m/z去簇电压V碰撞电压eV泰乐菌素ESI+1916.5 174.1*916.5 772.3874940替米考星ESI+1869.5 174.3*869.5 696.3385859罗红霉素ESI+1837.4 158.2*837.4 679.4744330阿奇霉素ESI+1749.6 116.3749.6 591.4*1007028全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20228红霉素ESI+1734.3 158.0734.3 576.3*763727氟苯尼考ESI-2356.3 185.0*356.3 336.1-56-25-12氯霉素ESI-2321 152.0*321 257.1-42-22-15甲砜霉素ESI-2354 185.0*354 289.9-60-27-16A.5.4.3 定性测定在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质匹配标准溶液中对应的保留时间偏差在2.5%之内，且样品中目标化合物两个子离子的相对丰度与浓度接近的基质匹配标准溶液相对丰度进行比较，偏差不超过表4规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度(%)502050102010允许的最大偏差(%)20253050A.5.4.4 定量测定取试样溶液和基质匹配标准溶液上机分析，得到色谱峰面积响应值，作单点或多点校准，用外标法定量。试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。若试样溶液浓度超过线性范围时，稀释后重新测定。标准溶液的特征离子色谱图见附录A。A.6 结果计算与表示试样中待测物的含量以质量分数X表示，单位为微克每千克（g/kg），按下列公式进行计算。X=nVmAsVVCsA12公式中：X试样中待测物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；A试样溶液中待测物的峰面积；As标准溶液中待测物峰面积；Cs标准溶液中待测物浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；m样品的质量，单位为克（g）；V溶解残余物的体积，单位为毫升（mL）；V1过固相萃取柱的提取液体积，单位为毫升（mL）；V2总提取液体积，单位为毫升（mL）；n 稀释倍数。全国团体标准信息平台T/JAASS 39-20229A.7 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对偏差不大于20%。全国团体标准信息平台