ABO从细胞到分子-打印版.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,ABO,血型系统,从血清到分子,1818,年英国妇产科医生布伦德尔成功地用输血救活了一名产后大出血的产妇，成为人类历史上成功输血的第一例。,血型抗原能够激活免疫系统,：,母胎不相容,输血不相容,自身溶血性贫血,ABO,血型的发现,1900,年奥地利,Landsteiner,1907,年捷克人,Jansky,1910,年美国人,Moss,Landsteiner,（,1868,1943,）获得,1930,年诺贝尔奖金,Landsteiner,一生发现了,ABO,、,MN,、,P,、,RH,等许多血型。,ABO,血型的配合性是输血前试验的重要基础,ABO,血型系统的独特特点,A,和,B,抗原的免疫源性强,血清中规律性存在抗,-A,和,/,或抗,-B,抗体,分泌型个体的血浆、唾液、组织细胞等处存在,A,、,B,、,H,血型物质,ABO,血型,主要抗原和抗体,ABO,系统概述,A,和,B,抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子中的糖类决定簇。,二者之间的区别在于免疫结构域末端单糖性质不同。,A,抗原末端糖基是,N-,乙酰氨基半乳糖,B,抗原末端糖基是,D-,半乳糖。,ABO,系统概述,ABO,抗原不是,ABO,基因的直接产物,A,和,B,基因编码不同的糖基转移酶，催化不同的糖基转移到,H,抗原末端半乳糖基上，形成相应的,A,或,B,抗原,O,基因的产物是一种无活性的转移酶，不能转移任何糖基到,H,抗原上，因此,O,型个体的抗原就是,H,抗原。,ABO,血型的遗传,复等位基因 共显性遗传,显性基因：,A,、,B,隐性基因：,O,A,型：,AA AO,B,型,:BB BO,AB,型,:AB,O,型,:OO,根据孟德尔遗传定律,不同婚配类型子女可能的血型,A*O,A O,B*O,B O,A*B,A B AB O,AB*O,A B,A*AB,A B AB,B*AB,B A AB,A*A,A O,HAB,物质生物合成,ABO,基因 特异性糖基转移酶,ABO,抗原,血型前身物质,L,岩藻糖,N,乙酰氨基半乳糖,D,半乳糖,ABO,基因糖基转移酶结构模式图（,1,）,ABO,基因糖基转移酶结构模式图（,2,）,ABO,基因糖基转移酶结构模式图（,3,）,ABO,抗原形成的基础：,H,位点,H,基因：一个独立于,ABO,的基因,FUT1,编码岩藻糖基转移酶,转移一个岩藻糖到血型前身物质上形成,H,抗原。,极少数个体缺乏,H,基因，红细胞上无,H,抗原，既使编码,A,和,B,的糖基转移酶基因是正常的，也不能产生,A,或,B,抗原。,ABO,物质的生物合成,A,、,B,、,H,血型物质,1930,年,Lehrs,发现唾液中有,A,和,B,物质,1943,年,Wiener,发现分泌型占,80,AB,物质的量具有较显著的个体差异,血清中的血型物质较弱,唾液中的血型物质较容易测到,A,型,A,抗原，少量,H,抗原 血型物质：,A,，,H,B,型,B,抗原，少量,H,抗原 血型物质：,B,，,H,AB,型,A,，,B,抗原，很少的,H,抗原,血型物质：,A,，,B,，,H,O,型,H,抗原 血型物质：,H,H,抗原强弱：,OA,2,B A,2,B A,1,A,1,B,H,抗原在人群中 呈 减 低 趋 势,ABH,抗原决定族,新生儿正定型：,RBC,与血型试剂反应弱。,5,6,周的胚胎,RBC,就可检测出来。,出生时发育不完整。,2,4,岁红细胞发育完全。,新生儿通常不做反定型,1,新生儿免疫系统发育不成熟,2,血清抗体易受到母亲血清的干扰,成人与新生儿抗原数量比较,细胞,成人,新生儿,A1,810 000,1170 000,250 000,370 000,A2,240 000,290 000,140 000,B,610 000,830 000,200 000,320 000,抗,-A,、抗,-B,的特性,IgM,、,IgG,IgM,抗体可被,2,Me,（,2,巯基乙醇），,DTT(2,硫苏糖醇,),破坏,IgA,抗体经,2,Me,处理血清学活性下降，但抗体不破坏。,IgG,抗体分子量小，可以通过胎盘屏障,交叉反应性抗,-AB,：,来源于,O,型人血清,联合抗体：抗,-AB,不是抗,-A,和抗,-B,简单的混合，针对,A,和,B,抗原共同的决定簇。,A,细胞与,O,型血清吸收后放散液可以凝集,B,细胞，反之亦然。,与,ABO,密切相关的,H,及,Lewis,血型系统,ABH,和,Lewis,抗原被称作组织血型抗原,H,（,FUT1,）,抗原是,ABO,基因表达的基础；,ABH,的分泌型,Se,（,FUT2,）,在决定,Lewis,表现型中发挥重要作用,Lewis,（,FUT3,）抗原是从血浆吸附到红细胞膜上的血型抗原。,Lewis,血型系统,1946,年，,Mourant,最早描述了抗,Lewis,（,后来称之为抗,-Le,a,）,的两个例子，这些抗体凝集约,25,英国人的红细胞。,Andresen,发现一种抗体，后来被称作抗,Le,b,，,该抗体针对的决定簇仅仅出现于成人,Le,（,a,）,细胞。,Lewis,抗原的产生,Lewis,基因（,FUT3,）,编码一种岩藻糖基转移酶催化一个岩藻糖基到分泌物的,H,物质上，产生,Le,b,抗原。,当个体属非分泌型,（,sese,）,分泌物中,没有,H,物质时，则催化一个岩藻糖残基到,H,前体物质上，产生,Le,a,抗原。,Lewis,系统,当这些结构被从血浆吸附到红细胞膜上时：,多数,H,分泌型红细胞表现,Le,（,a-b,）,H,非分泌型则表现为,Le,（,a,b,）,约,6,的白人和,25,的黑人在,Lewis,位点是沉默因纯合子，他们不产生,Lewis,酶，其红细胞为,Le,（,a,b,），,其分泌物中缺乏,Lewis,物质。,在亚洲，表现型,Le,（,a,b,）,很常见，这是由于一个弱的分泌型等位基因,Se,w,所致。,Lewis,抗原,虽然,Le,a,和,Le,b,不是由红细胞合成的，而是从血浆中获得的，他们被当作血型抗原是因为它们首先从红细胞上发现的。,术语,Le,a,和,Le,b,容易使人们产生误解，因为这两种抗原不是一对等位基因决定的，但仍沿用。,Lewis,血型的基因型与表现型,ABO,、,H,及,Lewis,血型系统,ABO,基因：,9,号染色体,FUT1,（,H,）,FUT2,（,SE,）,FUT3,（,Lewis,）,19,号染色体,常见,ABO,亚型,判断,ABO,亚型,:,1,红细胞与抗,-A/,抗,-A1/,抗,-B,及抗,-AB,的凝集程度。,2,红细胞上,H,物质活性的强弱。,3,血清中是否存在抗,-A1,。,4,分泌型人的唾液中,A,、,B,和,H,物质,。,ABO,亚型,A,抗原中主要为,A1,和,A2,其它,A,亚型：,A3,、,Ax,、,Aend,、,Am,、,Ay,、和,Ael,B,亚型种类比,A,亚型更少：,B3,、,Bx,、,Bm,和,Bel,等,H,抗原强弱：,OA2 B A2B A1 A1B,O,型,A2,B,A2B,A1,A1B,各种弱,A,亚型的鉴别程序,红细胞,弱凝集,混合外观,(Mf,）,A60,A3,与抗,-A,A3 Ax,10,红细胞呈十分弱的,mf,凝集,Aend,及,/,或抗,-,Aend,只与抗,-AB,呈弱凝集,Ax,AB,反应,不凝集,容易吸附放散抗,-A,Am,能吸附,分泌型唾液中有一定量的,A,物质,及放散,不容易吸附放散抗,-A,Ay,抗,-A,分泌型唾液含少量的,A,物质,Am Ay,吸附放散抗,-A,Ael,Ael,分泌型唾液只含,H,物质无,A,物质,A2,与人源性抗,A,试剂的反应强度为,4,与抗,H+/2+,可能有不规则抗,A,1,存在,(sometimes),1-8%A,2,和,22-35%,的,A,2,B,存在抗,A,1,血型物质,A H,举例 抗,A,抗,B Ac,Bc,Oc,4+4+-,A1,和,A2,决定簇的区别,是仅存在量的差异还是抗原决定簇结构不同？,用,A2,细胞重复吸收来源于,B,型个体的抗,-A,血清可以移去所有抗体，表明二者之间仅是量的差别。,A2,和,A2B,个体常常产生抗,-A1,，说明,A2,细胞上缺乏,A1,细胞上的一种决定簇。,血型前体物质：,Type1 Gal,1,3GlcNAc,1,R,（血清）,Type2 Gal,1,4GlcNAc,1,R,（红细胞）,Type3 Gal,1,3GalNAc,1,R,（红细胞）,Type4 Gal,1,3GalNAc,1,R,（红细胞）,Type5 Gal,1,3Gal,1,R,（人工合成）,Type6 Gal,1,4Glc,1,R,2,型,H,与,3,型,H,的区别,A1,和,A2,同样存在质的区别,A1,细胞出现重复的,3,型,A,抗原结构，但,A2,细胞却没有。,抗,-A1,是,3,型或,4,型,A,特异性的，或者抗,-A1,可以优先与,3,型或,4,型,A,反应。,只有,A1,转移酶能够转化,3,型,H,加一个,N,乙酰氨基半乳糖基成为,3,型,A,因此,A2,细胞上可以检测到,3,型,H,而不是,3,型,A,抗原。,双花扁豆植物血凝素检测,N,乙酰氨基半乳糖胺，当过量的浓度下，它可以凝集,A2,细胞，因此将它用作,A,亚型分型试剂更多是依赖,A1,和,A2,表现型数量上的差异。,A3,最早由,Friedenreich,在,1936,年描述,与抗,-A,和抗,-AB,共同孵育时：“混合视野外观”（,mixed field agglutination,）。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。,与抗,-A,反应强度低于,A2,。,与抗,-AB,反应呈混合视野，但并不增强。,偶有抗,-A1(occasionally),血型物质,A H,A3,不像是,A2,和,O,细胞的嵌合体。,Aend,（,Afinn,，,Abantu,）,Aend,最早由,Weiner,等于,1959,年描述,类似于,A3,细胞：它们与一些抗,-A,和抗,-AB,表现很弱的混合视野外观。,Aend,分泌型的唾液中只有,H,物质，但是无,A,物质,抗,-A1,出现在部分,Aend,个体的血清中,10,细胞凝集（,Mf,）,Am,Am,细胞不能被抗,-A,和抗,-AB,凝集，或者仅能发生很弱的凝集。,Am,细胞可以吸附放散抗,-A,。,Am,分泌型的唾液中包含正常含量的,A,和,H,物质，,Am,血清中通常无抗,-A1,。,Am,作为,ABO,位点上一个稀有的等位基因遗传,Am,在法国献血者的频率是,150 000,中有,1,例。（,A,型人中占,0.0015%,），中国台湾的数据是,400 000,万人中,1,例。,Am,抗原性较弱 与抗,-A,反应,:-/w+,与抗,-H,反应：增强,无抗,-A1,产生，与抗,-AB,反应不增强,血型物质,:A H,Ax,Ax,表现型最初由,Fischer,和,Hahn,于,1935,年报道，它的主要血清学特点是：,红细胞与多数来源于,B,型血清的抗,A,不发生反应，但是可以被大多数来源于,O,型个体的抗,-AB,凝集，没有混合视野表现。,血清中含有抗,-A1,，后者有时候可以凝集,A1,和,A2,细胞。,除了,H,物质，,Ax,分泌型个体唾液中可以捡出痕量的,A,物质。,Ax,抗,A:-/w+,抗,H:,增强,血清中常有抗,-A1(Frequently),比,A2 A3,的几率都高。,抗,-AB,：反应比与抗,-A,明显增强,血型物质,H,，痕量,A,Ax,Ax,表现型具有很高的遗传异质性：,许多家系资料表明,Ax,以,ABO,位点上一种稀有的等位基因的方式遗传。,在一些家庭中遗传背景不清楚,在两项独立的研究中，法国,Ax,的频率为,1/77000(A,型人中的,0.003%),和,1/44000,Aint,Landsteiner,和,Levine,：有些,A,型个体的红细胞既不能定义为,A1,也不能定义为,A2,。,Aint,在黑人中较白人更为常见。,Aint,是作为,ABO,位点上的一个等位基因遗传的。,它的,H,抗原强度象,A2,一样强，甚至更强。,与抗,-A1,反应较弱,2+,与抗,-A,及抗,-H,反应较强,4+/3+,Ael,在通常的条件下，,Ael,细胞与抗,-A,和抗,-AB,不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体可以通过吸收放散技术检测到。,Ael,分泌型唾液中无,A,物质，仅有,H,物质，血清中常含有抗,-A1,，也可以含有能够凝集,A2,细胞的抗体。,Ael,在,Ael,血清和红细胞膜上不能检出,A,转移酶。,在法国,150000,例献血者中，没有检测到,Ael,表现型，在中国台湾,400000,人中检出,5,例,Ael,个体。,Ael,以,ABO,位点上的一种稀有的等位基因遗传的。,Aw,ML Olsson,等,对其它弱,A,亚型的,ABO,基因的外显子、剪切部位和启动子进行序列测定。,表现型不太容易被划分到任何现存的分类的异常基因被称作,Aw,（,1,5,）。,Subgroups of A,Pheno,-type,Red cells,tested,With anti-sera,Serum tested,with,Known red cells,Salivaof,secretors,Anti-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,A1,V,_,V,V,_,_,_,V,_,A and H,Aint,+,_,V,+,+,_,_,V,_,A and H,A2,+,_,V,_,+,Some-times.+,_,V,_,A and H,A3,+mf,_,+mf,_,+,Occa-sionally,.+,_,V,_,A and H,Am,-/w+,_,-/w+,_,V,_,_,V,_,A and H,Ax,-/W+,_,+/+,_,V,Fre-quently,+,_,V,_,H,B,亚型,弱的,B,变异型是相对较少的，可能是由于在许多群体中,B,基因的频率要相对低得多。,弱,B,亚型的分类，,Salmon,指出,B,亚型最好的分类应参照,A,变异型：,B3,、,Bx,、,Bm,和,Bel,，另外加上那些不符合其它,4,种类型的,Bw,。,B3,1972,年,Wiener,和,Cioffi,首先报道一例,ABH,非分泌型,B3,。,它被作为最稀少的一种,B,亚型,这种表现型以与抗,B,和抗,AB,呈现混合视野反应为特点,血清中缺乏抗,B,唾液中含有正常含量的,B,抗原,B3,通常是由于,ABO,位点上的稀有等位基因所致。,Bx,一种异质性的血型,典型的,Bx,红细胞与抗,B,和抗,AB,呈弱凝集。,血清中含有弱的抗,B,Bx,分泌型唾液中含有一些,B,物质，后者常常仅能通过,Bx,细胞与抗,B,的凝集抑制试验才能检测到,Bx,是,ABO,位点上的一种稀有的等位基因。,Bm,Bm,细胞不能被抗,B,或抗,AB,凝集,B,抗原仅能通过敏感的技术比如吸收放散抗,B,才能检测到。,Bm,分泌型唾液中,B,物质的含量接近正常,B,Bm,个体的血清中不含有抗,B,。,通常,Bm,是作为,ABO,位点上一个变异的基因来遗传的，但是有几个例外报道。,Bel,Bel,红细胞与抗,-B,和抗,-AB,不发生凝集反应，但是它们的确可以结合抗,-B,，抗体可以通过放散技术被检测到。,Bel,分泌型唾液中不出现,B,物质，血清中可能存在抗,B,抗体。,Bel,作为,ABO,位点上的稀有基因而遗传，,Bw,Olsson,等确认了,7,种新的等位基因，它们与正常,B,基因相比有,1,个核苷酸改变，导致一个氨基酸的取代（见表,2.19Bw,2,到,8,），所有这些等位基因与,B,的弱表达相关，但是没有做进一步分类。,分泌型与非分泌型,1930,年,Lehrs,发现唾液中有,A,和,B,物质,1943,年,Wiener,发现分泌型占,80,血型物质的量有显著个体差异,血清中的血型物质较弱,唾液中的血型物质较容易测到,分泌型：,产生可溶性,HAB,抗原的能力由分泌型基因座,SE,（,FUT2,）,决定，该位点由,Se,、,se,两个等位基因决定。,SeSe,或,Sese,个体表现为,HAB,分泌型,80,Sese,基因控制唾液中,H,物质的分泌，与红细胞上的,H,抗原表现型无关,Lewis,血型：,Le,（,a-b+,）,/Le,（,a-b-,）,非分泌型：,隐性,基因纯合子,sese,在人群中占,20,，产生非分泌型,唾液中缺乏,HAB,血型物质,Lewis,血型：,Le,（,a+b-,）,/Le,（,a-b-,）,孟买型与类孟买型,孟买型（,Oh,）和类孟买血型,(,A,m,h,/B,m,h,/AB,m,h,/O,m,h,),是人群中两种非常罕见的稀有血型,孟买型：,孟买型：,H,（,FUT1,）,基因的产物为,a,（,1,，,2,）,岩藻糖转移酶，但缺少,H,时，即,hh,时不能形成,H,抗原物质，尽管,ABO,基因存在，,A/B,抗原将不能形成。,红细胞缺乏,H,物质、,A,、,B,物质。,血清中有很强的抗,-H,，血清与所有,O,型人的红细胞反应都很强。,孟买型细胞与荆豆盐水提取液（抗,-H,）不发生反应。,类孟买型（,过去观点,）,带有正常的,H,基因和,A,基因，但因其调节,H,基因作用的一对基因是,zz,纯合，故使其,H,的作用部分地受到抑制，因而只能产生少量的,H,抗原，少量,的,H,抗原,在,A,基因的作用下全部转化,为,A,抗原。但红细胞上的,A,抗原是很弱的。,红细胞上缺少,H,物质，有少量,A,抗原。血清中有抗,B,，抗,HI,抗体。,唾液中含正常,A,、,H,物质，控制,HAB,物质分泌的调节基因,SeSe/Sese,，,因而能分泌正常的,A,、,H,物质。,孟买型与类孟买型,孟买型属,H,缺陷的非分泌型，其个体红细胞和分泌液中均检测不到,ABO,抗原。,hh/sese,Le(a+b,-),或,Le,（,a-b-,）,类孟买血型是,H,缺陷的分泌型，其特点是红细胞表面缺乏,ABH,抗原，而在唾液等分泌液中却可以找到,ABH,血型物质。,hh/Sese,；,hh/SeSe,Le(a-b,+),或,Le(a-b,-),H,基因的缺失,1,孟买型,hh,sese,血清和红细胞膜上均缺少,H,物质,抗,-A,抗,-B,强,抗,-H,(O,h,O,h,A,O,h,B,O,h,AB,),H,基因的缺失,2,类孟买型,hh,Se,红细胞膜上均缺少,H,物质,血清中有,1,型,H(A/B),物质,抗,-A,强,/,弱,抗,-B,强,/,弱,抗,-H,弱,少量吸附,(O,m,h,B,m,h,A,m,h,AB,m,h,),H,基因的缺失,3,类孟买型,hh,Se,w,红细胞膜上缺少,H,物质,血清中有少量,1,型,H(A/B),物质,抗,-A,强,/,弱,抗,-B,强,/,弱,抗,-H,较强,痕量吸附,(O,m,h,B,m,h,A,m,h,AB,m,h,),H,基因的减弱,弱,H,型,Hm,Se,红细胞膜上有少量,H,血清,H(A/B),物质含量正常,抗,-A,强,/,无,抗,-B,强,/,无,抗,-H,无,(,O,Hm,B,Hm,A,Hm,AB,Hm,),H,缺陷表现型总结,从血清学到分子生物学,1900,年,2008,年,1990,年,1985,年,ABO,血型系统遗传学基础,ABO,基因 9,q34.1,9q34.2,A,基因：,(1,3)N-,乙酰氨基半乳糖转移酶,B,基因：,D,半乳糖转移酶,O基因：无,有效的,基因产物,ABO,基因,7,个外显子，跨越基因组,DNA 18kb,外显子,1,7,，,28,bp,691bp,不等,编码顺序：,exon,6,和,exon,7,ABO,基因的核苷酸差异,在,A1,基因的基础上,核苷酸突变糖基转移酶改变影响催化活性抗原改变,ABO,系统,A1,等位基因,cDNA,全长序列,ABO,基因在,cDNA,和氨基酸上的差异,A1 allele(1),A1 allele(2)nt.467(CT)=aa156(proleu),B allele nt.291(AG),；,nt.526(CG)=aa176(ArgGly),；,nt657(CT),；,nt.703(GA)=aa235(glySer),；,nt.796(CA)=aa266(,leuMet,),；,nt.803(GC)=aa268(GlyAla),；,nt.930(GA),。,O allele(1)nt.261(Gdel)=,framshift,O allele(2)nt.261(Gdel)=,framshift,nt297(AG),nt646(TA),nt681(G A),nt771(CT),nt829(GA),ABO,基因亚型的分子基础,A2 allele nt.467(CT)=aa156(ProLeu)nt.1059-,1061(3Cs 2Cs)=,frameshift,A3 allele nt.871(GA)=aa291(AspAsn),Ax allele nt.646(TA)aa216(AspAsn),O allele(3)nt.297(AG)nt.526(CG)=aa176(,Arg,Gly,),nt.802(G A)=aa268(,Gly,Arg,),B3 allele nt.297(AG),nt526(CG)=aa176(Arg,Gly,)nt.657(CT),nt.703(GA)=aa235,(,GlySer,)nt.796(cA)=aa266(,Leu,Met),nt.803(GC)=aa268(GlyAla)nt.930 (G,A),nt.1054(CT)=aa353(ArgTrp),CisAB,nt.467(CT)=aa156(ProLeu),nt.803,(GC)=aa.268(GlyAla),常见,A,亚型的分子基础,常见,B,亚型的分子基础,ABO,基因等位基因举例,H,位点隐性基因在人群中的多态性,ABO,血型系统基因分型,1.,聚合酶链反应,polymerase chain reaction,PCR,聚合酶链反应是,DNA,分型的基础，在含有模板,DNA,的反应液中加入四种脱氧核糖核苷，耐热的,TaqDNA,聚合酶，经变性、复性和延伸三个不同温度时相的变化，大约,25,30,个循环后，,DNA,得到大量扩增。反应在热循环仪上自动进行，简便易行。序列特异的,PCR,可直接用于分型，或将,PCR,产物作进一步的分析。,2,序列特异性引物的,PCR,PCR-sequence specific primer,，,PCR-SSP,此技术采用序列特异性引物,(SSP),。,SSP,的,3,端具有独一无二的序列，在退火时只能与某特定等位基因结合，因此能够特异性地扩增,ABO,基因，然后通过凝胶电泳检测,PCR,产物。根据是否得到,PCR,产物，以及产物的片段大小来判断,ABO,基因型。,3,PCR,RFLP,（,PCR-restriction fragment length polymorphism,）,如果,ABO,的,SNP,序列改变涉及到限制性内切酶的识别位点，不同基因型个体的,DNA,被酶切后将得到长度不一的片段，这种,由限制性内切酶酶切片断大小揭示的多态性，,被称为限制性片段长度多态性,(RFLP),。,3,PCR,RFLP,（,PCR-restriction fragment length polymorphism,）,限制性内切酶只能对特定的核苷酸序列具有识别和切割的作用。如：,HpaII,识别,5ccgg 3,片断。,PCR,RFLP,需在内切酶消化后，由电泳鉴定限制片断大小，若因突变失去某个限制性位点，电泳格局将发生改变。,4,DNA,克隆和,DNA,序列测定,(DNA Cloning and Sequence analysis),由于多数个体在,ABO,位点的基因型呈杂合状态，而,O,基因在,nt261,处存在单碱基缺失，即,O,基因与,A,或,B,基因相比具有移码突变，因此许多研究对象在,nt261,后的序列为杂合状态。,研究,ABO,位点的基因时可以从,mRNA,入手，测定,cDNA,序列或者分别对其,ABO,基因的不同外显子的高保真扩增产物进行克隆测序。,ABO,基因分型及核苷酸序列分析,聚合酶链反应,PCR-RFLP,DNA,序列测定,血清学方法与,DNA,技术相互补充,一个,CisAB,核心家系,A,2,Bx,(,CisAB,/O),O,(OO),A2Bx,(,CisAB,/O,),A2Bx,(,CisAB,/O),O,(OO),家系来源：上海某医院孕妇,血清学：,A2Bx,基因分型：,A*102/O,序列测定：,nt.467(CT)=aa156(ProLeu),nt.803 (GC)=aa.268(GlyAla,）,结论：,CisAB,*01/O,抗,-A,抗,-B,抗,-AB Ac,Bc,Oc,A2c,I,单克隆 ,4,4,4,w,II,单克隆 ,4,4,4,人血清,1,4,4,与抗,H,反应：,Pc,：,4,w,Oc,：,4,Bc,：,A2c,：,2,w,血清学疑为,AwB,（,血清中包含抗,-A,）,初步基因分型：,BO,（,PCR,RFLP,）,PCR,产物克隆测序：,B,（,A,）,700/O,一例罕见的,B,（,A,）,血型,CisAB,与,B,（,A,）血型分子基础总结,