222公开课动物细胞融合与单克隆抗体.pptx

2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体的制备动物细胞融合和单克隆抗体的制备 海拉尔实验高中海拉尔实验高中 生物组生物组 张英张英(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图A细胞细胞B细胞细胞人工诱导人工诱导（一）（一）.动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指是指两个或多个细胞两个或多个细胞融合形成一融合形成一个细胞的过程，融合后形成的具个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息有原来两个或多个细胞遗传信息的的单核细胞单核细胞，称为，称为杂交细胞杂交细胞。一、动物细胞融合一、动物细胞融合阅读课本阅读课本P52P52及识图及识图2-232-23，并完成如下内容：，并完成如下内容：1.1.1.1.动物细胞融合的原理？动物细胞融合的原理？动物细胞融合的原理？动物细胞融合的原理？2.2.2.2.诱导融合的手段？诱导融合的手段？诱导融合的手段？诱导融合的手段？3.3.3.3.融合后的细胞类型（两两融合）有哪几种融合后的细胞类型（两两融合）有哪几种融合后的细胞类型（两两融合）有哪几种融合后的细胞类型（两两融合）有哪几种?4.4.4.4.杂交细胞遗传物质上的特点是杂交细胞遗传物质上的特点是杂交细胞遗传物质上的特点是杂交细胞遗传物质上的特点是?（二）动物细胞融合的过程（二）动物细胞融合的过程 细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分融合后的细胞进行有丝分裂，形成两个完整的杂交裂，形成两个完整的杂交细胞细胞2.2.诱导的手段？诱导的手段？3.3.融合后细胞的类型（两融合后细胞的类型（两 两融合）？两融合）？4.AB4.AB杂交细胞遗传物质有杂交细胞遗传物质有 什么特点？什么特点？三种三种AAAA、ABAB、BBBB含两种细胞的遗传物质含两种细胞的遗传物质1.1.原理？原理？（三）（三）.动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目比较项目比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合原原原原 理理理理融合前处理融合前处理融合前处理融合前处理诱诱诱诱 导导导导 方方方方 法法法法用用用用 途途途途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散使细胞分散使细胞分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法生物方法生物方法获得部分获得部分获得部分获得部分或完整植株或完整植株或完整植株或完整植株主要用于制备主要用于制备主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体抗体：能够与抗原发抗体：能够与抗原发生特异性结合的生特异性结合的免疫免疫球蛋白球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细胞或称效应浆细胞或称效应B细胞。细胞。二、单克隆抗体二、单克隆抗体抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的血清从动物的血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。的特异性差、灵敏度低。想一想：想一想：想一想：想一想：怎样解决这一问题？怎样解决这一问题？怎样解决这一问题？怎样解决这一问题？读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。（一）（一）.单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单克隆单克隆抗体：单个抗体：单个B B细胞克隆产生的化学性质单细胞克隆产生的化学性质单 一、特异性强的抗体一、特异性强的抗体提示提示1 1：对产生抗体的：对产生抗体的B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？想一想：想一想：如何如何大量大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。（二）（二）.单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备1975197519751975年英国科学家年英国科学家年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦和和和和柯勒柯勒柯勒柯勒的实验的实验的实验的实验一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆 抗体抗体既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞为什么给小鼠注射特 定的抗原蛋白？会有几种融合方式？杂交瘤细胞是如何筛 选出来的？有何特点？是否所有的杂交瘤细 胞都能产生专一性抗 体？如何大规模进行培养 得到大量的单克隆抗 体？讨论：讨论：BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量增殖体，又能大量增殖。（三）（三）.单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用1.1.诊断试剂（最广泛的应用）诊断试剂（最广泛的应用）具准确、高效、简易、快速的优点准确、高效、简易、快速的优点单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。特异性强，灵敏度高，并能大量制备。2.2.2.2.治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物主要用于主要用于癌症治疗癌症治疗，单克隆抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，体作为载体，运载抗癌药物，形成形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤准确杀伤癌变细胞。癌变细胞。两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势小结小结 1.1.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （）A.A.离心离心 B.B.灭活的病毒灭活的病毒 C.C.电刺激电刺激 D.D.振动振动 2.2.融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.B.能无限增殖能无限增殖 C.C.可形成新个体可形成新个体 D.D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁BA练一练练一练3.3.动物细胞融合的作用中最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.C.培育新物种培育新物种 D.D.生产杂种细胞生产杂种细胞 4.4.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B A.B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞BD(1)(1)若若B B细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则A A细胞是取自细胞是取自 小鼠体内的小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取细胞，从小鼠体内提取 分离该细胞之前，应给小鼠注射分离该细胞之前，应给小鼠注射_类类 物质。物质。（2 2）d d过程是一个过程是一个_过程，该过程过程，该过程 的进行常用的进行常用_或或_的的 诱导。诱导。效应效应B 抗原抗原 细胞融合细胞融合 聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒 5.5.5.5.据图回答以下问题据图回答以下问题据图回答以下问题据图回答以下问题(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量增殖。分裂方式大量增殖。(5)(5)单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 有丝有丝有丝有丝(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成_ 种类型的种类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛培养基筛选出选出D D细胞用于培养，细胞用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是_ ，其特点是，其特点是_。杂交瘤细胞杂交瘤细胞3既能迅速大量增殖又能产生特异性抗体既能迅速大量增殖又能产生特异性抗体 选择性选择性选择性选择性