生物选修3----基因工程.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,主干梳理,自测感悟,菜 单,经典例题,考向导航,核心考点,精讲精析,隐 藏,山东金太阳书业有限公司,典题演练,知能提升,2013,新课标高考总复习,配浙科生物,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,选修,3,现代生物科技专题,第一章基因工程生物技术的安全性和伦理问题,考,纲,展,示,考,情,分,析,基因工程的诞生,(,),基因工程的理论基础与技术支持，基因工程的三大基本工具的特点及作用,基因工程的原理及技术,(,),基因工程的操作步骤及原理，有关概念的考查；设计某一转基因生物的培育过程，具体到目的基因的获取方式、表达载体的构建方法、基因检测鉴定的方法,基因工程的应用,(,),基因工程的成果及应用实例：农业、畜牧业以及生物制药,生物技术的安全性和伦理问题,(,),转基因生物的安全性、生物武器对人类的威胁和生物技术中的伦理问题三方面内容，正确对待生物工程技术带来的生物安全隐患,一、工具酶的发现和基因工程的诞生,四、生物技术的安全性和伦理问题,1,下图为,DNA,分子的某一片段，其中,分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是,(,),A,DNA,连接酶、限制性内切酶、解旋酶,B,限制性内切酶、解旋酶、,DNA,连接酶,C,解旋酶、限制性内切酶、,DNA,连接酶,D,限制性内切酶、,DNA,连接酶、解旋酶,解析：,能使,DNA,分子中氢键断裂的是解旋酶；限制性核酸内切酶能把相邻两个脱氧核苷酸的磷酸二酯键断裂；,DNA,连接酶能把两个,DNA,片段连接起来，作用于两条脱氧核苷酸链上，形成磷酸二酯键。,答案：,C,2,下表为常用的限制性核酸内切酶,(,限制酶,),及其识别序列和切割位点，由此推断的以下说法正确的是,(,),Bam,H,G,GATCC,Kpn,GGTAC,C,Eco,R,C,AATTC,Sau,3A,GATC,Hind,GTY,RAC,Sma,CCC,GGG,(,注：,Y,C,或,T,，,R,A,或,C),A,限制酶切割后不一定形成粘性末端,B,限制酶的切割位点一定在识别序列的内部,C,不同限制酶切割后一定形成不同的粘性末端,D,一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列,解析：,从表格中可以看出，,Hind,和,Sma,两种限制酶切割后并没有形成粘性末端，而是形成平末端，,A,对。,Sau,3A,酶的切割位点不在识别序列内部。不同酶切割后也可能形成相同的粘性末端，如,Bam,H,和,Sau,3A,切割后形成相同的粘性末端,GATC,。,Sau,3A,可以识别,GGATCC,和,GATC,序列。,答案：,A,3.,下图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因,(kan,R,),常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是,(,),A,构建重组质粒过程中需要限制性内切酶和,DNA,连接酶,B,愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株,C,卡那霉素抗性基因,(kan,R,),中有该过程所利用的限制性内切酶的识别位点,D,抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传,解析：,质粒与目的基因结合时需要用同一种限制性内切酶切割，切出的黏性末端相同，可用,DNA,连接酶连接；愈伤组织由相同的细胞分裂形成，分化后产生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作为标记基因不能有限制性内切酶的切割位点，标记基因被切断后就不能再表达，从而失去作用；抗虫棉为杂合子，其有性生殖后代可能会发生性状分离，抗虫性状不一定能稳定遗传。,答案：,A,4,某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶,(Amy),基因,a,，通过基因工程的方法，将,a,转到马铃薯植株中，经检测发现,Amy,在成熟块茎细胞中存在，下列说法正确的是,(,),A,基因,a,只有导入到马铃薯受精卵中才能表达,B,目的基因来自细菌，可以不需要运载体直接导入受体细胞,C,基因,a,导入成功后，将抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径,D,目的基因进入受体细胞后，可随着马铃薯的,DNA,分子的复制而复制，传给子代细胞并表达,解析：,基因,a,也可以导入到马铃薯的体细胞内，并经植物组织培养得到转基因植株；目的基因必须和运载体结合形成重组,DNA,才能导入受体细胞；基因,a,导入成功后，不一定抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径；目的基因进入受体细胞后，可整合到马铃薯染色体的,DNA,上，随着马铃薯的,DNA,分子的复制而复制，传给子代细胞并表达。,答案：,D,5,在,1990,年医生对一位因缺乏腺苷酸脱氨酶基因而患先天性体液免疫缺陷病的美国女孩进行治疗。采用的方法是首先将患者的白细胞取出进行体外培养，然后用某种病毒将正常腺苷酸脱氨酶基因转入人工培养的白细胞中，再将这些转基因白细胞回输到患者的体内，经过多次治疗，患者的免疫功能趋于正常。,(1),该病治疗运用了基因工程技术，在这个实例中运载体是,_,，目的基因是,_,，目的基因的受体细胞是,_,。,(2),将转基因白细胞多次回输到患者体内后，免疫能力趋于正常是由于产生了,_,，产生这种物质的两个基本步骤是,_,和,_,。,(3),人的腺苷酸脱氨酶基因与胰岛素基因相比，其主要差别是,_,；与大肠杆菌基因相比，其转录而来的,RNA,产物经,_,才能成为成熟的,mRNA,。,(4),该病的治疗方法属于基因工程应用中的,_,，这种治疗方法的原理是,_,。,解析：,本题以一个实际生活问题为线索，全方位的考查基因工程。该基因工程的运载体是病毒，目的基因是腺苷酸脱氨酶基因，受体细胞是白细胞，将转基因白细胞输入患者体内，目的基因会得到表达，产生相应的抗体，从而使患者免疫力恢复正常。其治疗的原理是将正常的外源基因导入到有缺陷的细胞中，并使之表达，达到基因治疗的目的。人的腺苷酸脱氨酶基因与胰岛素基因相比，其差别是碱基排列顺序的不同，与大肠杆菌的区别是基因转录形成,mRNA,过程的不同。,答案：,(1),某种病毒腺苷酸脱氨酶基因白细胞,(2),腺苷酸脱氨酶,(,或抗体,),转录翻译,(3),脱氧核苷酸排列顺序不同,(,或遗传信息不同，或碱基的数目和排列顺序不同,),加工,(4),基因治疗把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞内，从而达到治疗的目的,基因工程的三大操作工具,1,限制酶,(1),限制性核酸内切酶,(,限制酶,),的作用,限制酶切割时断开的是,DNA,分子中的磷酸二酯键,(,即相邻脱氧核苷酸间的键,),，而不是两条链之间的氢键。,(2),限制酶具有专一性，表现在两个方面,识别双链,DNA,分子中特定的核苷酸序列。,切割特定序列中的特定位点。如图：,2,DNA,连接酶,(1)DNA,连接酶的作用,两种来源不同的,DNA,用相同的限制性核酸内切酶切割，形成相同的粘性末端。,DNA,连接酶能催化磷酸与脱氧核糖之间化学键的形成，将两,DNA,末端的缝隙“缝合”起来。,特别提醒,限制性核酸内切酶与,DNA,连接酶的比较,比较,项目,限制性核酸内切酶,(,简称限制酶,),DNA,连接酶,化学本质,蛋白质,作用,识别和切割,DNA,分子内的特殊核苷酸序列,将末端碱基互补的,2,个,DNA,片段连接在一起,作用部位,磷酸二酯键,结果,能把,DNA,分子切割成具有末端碱基互补的,DNA,片段,形成重组,DNA,分子,模板,不需要,对基因工,程的意义,切割,DNA,分子的手术刀，使,DNA,重组成为可能,可将,DNA,与载体,DNA,连接在一起,3.,载体的种类及作用,(1),载体应具备的特征,能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。,有,1,个或多个限制性核酸内切酶切点，以便与外源基因连接。,具有某些标记基因，以便进行筛选。,(2),载体的种类,细菌质粒，最常用大肠杆菌质粒。,噬菌体和某些动植物病毒。一般来说天然的载体往往不能满足人们的所有要求，因此人们根据不同目的和需求，对某些天然的载体进行人工改建。,(3),作用,一是用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。,1,对下图所示粘性末端的说法错误的是,(,),A,甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的,B,甲、乙具相同的粘性末端可形成重组,DNA,分子，但甲、丙之间不能,C,DNA,连接酶作用位点在,b,处，催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键,D,切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组,DNA,分子,解析：,b,处表示的是,DNA,两条链之间的氢键，解旋酶作用于此处。,答案：,C,基因工程基本操作步骤,1,基本操作步骤示意图,2,基因工程基本操作五步曲,(1),获得目的基因,序列未知：建立一个包括目的基因在内的基因文库，再从基因文库中获取。,序列已知：化学方法,(,如逆转录法,),合成或者用,PCR,扩增目的基因。,PCR,技术与,DNA,复制的比较,PCR,技术,DNA,复制,相,同,点,原理,DNA,双链复制,(,碱基互补配对,),原料,四种游离的脱氧核苷酸,条件,模板、酶、能量等,不同点,解旋方式,DNA,在高温下变性解旋,解旋酶催化,场所,体外复制,主要在细胞核内,酶,热稳定的,DNA,聚合酶,细胞内含有的,DNA,聚合酶,结果,在短时间内形成大量的,DNA,片段,形成整个,DNA,分子,(2),形成重组,DNA,分子,一般采用同一种限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因，以获得相同的粘性末端，以利于形成重组,DNA,分子；但用不同的限制性核酸内切酶处理也可以获得相同的粘性末端。,目的基因的插入可能会破坏转基因生物原有基因的结构，影响转基因生物的正常生长，甚至致死。,限制性核酸内切酶主要切割外源,DNA,，对自身的,DNA,不起作用，具有自身保护的特点。,限制性核酸内切酶只识别双链,DNA,分子中特定核苷酸序列，对,RNA,不起作用。,用,DNA,连接酶连接时，可形成,3,种不同的连接物：目的基因,载体连接物、载体,载体连接物、目的基因,目的基因连接物，导入受体细胞后，可利用抗性基因的差异进行筛选。,(3),将重组,DNA,分子导入受体细胞,生物,种类,植物细胞,动物细胞,微生物细胞,常用,方法,农杆菌转化法其次还有基因枪法和花粉管通道法,显微注射技术,Ca,2,处理法,受体,细胞,体细胞受精卵,受精卵,原核细胞,转化,过程,将重组,DNA,分子,农杆菌,导入植物细胞,融合到受体细胞的,DNA,中得以表达,将重组,DNA,分子提纯,取卵,(,受精卵,),显微注射,受精卵发育,获得具有新性状的动物,Ca,2,处理细胞,感受态细胞,重组,DNA,分子与感受态细胞混合,感受态细胞吸收,DNA,分子,(4),筛选含有目的基因的受体细胞,原理：质粒上有抗生素抗性基因等标记基因。,方法：利用选择培养基筛选。,举例：,在实际应用中还有,a,检测是否插入目的基因，利用,DNA,分子杂交技术，目的基因,DNA,一条链,(,作探针,),与受体细胞中提取的,DNA,杂交，看是否有杂交带。,b,检测是否转录出了,mRNA,，利用,DNA,分子杂交技术，目的基因,DNA,一条链,(,作探针,),与受体细胞中提取的,mRNA,杂交，看是否有杂交带。,(5),目的基因的表达：看到目的性状或分离到目的基因表达产物,检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原,抗体杂交。,个体生物学水平的鉴定：如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。,3,有关基因工程操作步骤易错分析,(1),基因文库中不是直接保管相应基因，基因文库中的基因保存在受体菌中。,(2),只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余几个步骤都涉及碱基互补配对。,(3),原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，有利于目的基因的复制与表达，因此常采用大肠杆菌等原核生物作为受体细胞。,(4),植物细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程成为完整植物体，因此受体细胞可以是受精卵也可以是体细胞；动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。,(5),操作工具有三种，但工具酶只有两种，载体不是酶；在基因工程操作步骤“获得目的基因”和“形成重组,DNA,分子”两个过程中通常用同一种限制酶，目的是产生相同的粘性末端；,DNA,连接酶只在“形成重组,DNA,分子”操作中用到。,特别提醒,基因工程中的三个疑难问题,(1),限制性核酸内切酶和质粒不是只存在于细菌中,细菌中存在限制性核酸内切酶和质粒，在酵母菌中也有限制性核酸内切酶和质粒，而酵母菌是真核生物。,(2),微生物中的限制性核酸内切酶不切割自身的,DNA,微生物中限制性核酸内切酶之所以不切割自身,DNA,，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的,DNA,可以被降解掉。,微生物在长期演化过程中，含有某种限制性核酸内切酶的细胞，其,DNA,分子中或者不具备这种限制性核酸内切酶的识别切割序列,(,类似于人体的凝集原与抗凝集素的关系,),，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制性核酸内切酶不能将其切开。这样，尽管微生物中含有某种限制性核酸内切酶也不会使自身的,DNA,被切断，并且可以防止外源,DNA,的入侵。,(3),基因工程中为生产糖蛋白，选酵母菌为受体细胞，而不选大肠杆菌为受体细胞的原因,糖蛋白是蛋白质肽链上由共价结合的糖链，这些糖链是在内质网上加工完成的。内质网存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这种细胞器，因此，由大肠杆菌生产糖蛋白是不可能的。由此可解释基因工程中为何大肠杆菌生产的人胰岛素原无活性、用酵母菌生产干扰素等。,2,下图为利用生物技术获得生物新品种的过程示意图。据图回答：,(1),随着科技发展，获取目的基因的方法也越来越多，若乙图中的,“,抗虫基因,”,是利用甲图中的方法获取的，该方法称为,_,。图中,过程与细胞中,DNA,复制过程相比，该过程不需要,_,酶。,是在,_(,填,“,酶的名称,”,),作用下进行延伸的。,(2),在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因,(kan),常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。乙图为获得抗虫棉技术的流程。,A,过程需要的酶有,_,、,_,。图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是,_,。,C,过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入,_,。,(3),离体棉花叶片组织经,C,、,D,、,E,成功地培育出了转基因抗虫植株，此过程涉及的细胞工程技术是,_,，该技术的原理是,_,。,(4),检测目的基因是否转录出,mRNA,的具体方法是使用,_,与提取出的,_,做分子杂交。,(5),科学家将植物细胞培养到,_,，包上人工种皮，制成了神奇的人工种子，以便更好地大面积推广培养。,解析：,(1),图甲是利用目的基因作为模板的基因体外扩增过程，即利用了,PCR,技术扩增目的基因。图甲中,过程利用高温使,DNA,双链解旋，因,过程是在高温环境下合成,DNA,，故所需的,DNA,聚合酶是热稳定性较高的,Taq,酶。,(2),图乙中,A,过程是获得重组质粒的过程，该过程需要用限制性内切酶对质粒、目的基因进行切割，再在,DNA,连接酶的催化作用下形成重组质粒。因土壤农杆菌易侵染植物细胞，故一般用土壤农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞。培养基中加入卡那霉素是为了筛选导入重组质粒的受体细胞。,(3),利用植物组织培养技术可以将带有目的基因的植物细胞培育成转基因植株，该技术利用了植物细胞全能性原理。,(4),因,mRNA,碱基可以与目的基因模板链碱基互补配对，故可用标记的目的基因作探针对细胞中的,mRNA,进行检测，以确定目的基因是否转录。,(5),将培养到分化出不定芽的胚状体包上人工种皮，可以获得人工种子。,答案：,(1),利用,PCR,技术扩增目的基因解旋 热稳定,DNA,聚合酶,(,Taq,酶,),(2),限制性核酸内切酶,DNA,连接酶农杆菌转化法 卡那霉素,(3),植物组织培养细胞全能性,(4),标记的目的基因,mRNA,分子,(5),胚状体,(,或答“不定芽”“顶芽”“腋芽”也可,),基因工程的应用,一、转基因动、植物的区别与联系,比较项目,转基因植物,转基因动物,区,别,受体细胞,受精卵或体细胞,一般为受精卵,目的基因常用的导入方法,土壤农杆菌转化法,显微注射法,获得个体,常用方法,植物组织培养,胚胎移植,目的,为了获得具有抗逆性、抗病虫害的植物,为了获得生长速度快、有抗病能力的动物,联系,培育的流程和技术环节基本一致；所用的工具和操作原理基本相同；,都能加快育种的过程，缩短育种时间，克服远缘杂交不亲和的障碍；,都能获得一些具有优良性状的个体,特别提醒,(1),筛选含目的基因的受体细胞时，根据载体上的标记基因进行筛选。,(2),动物基因工程主要是为了改善畜产品的品质，而不是为了产生体型巨大的个体。,二、基因诊断与基因治疗,1,基因诊断,(1),方法：,DNA,分子杂交法,(,即,DNA,探针法,),，该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链,DNA,解开，把单链的,DNA,小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的,DNA,中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的,DNA,或基因。,(2),步骤：抽取病人的组织或体液作为化验样品；将样品中的,DNA,分离出来；用化学法或热处理法使样品,DNA,解旋；将事先制作好的,DNA,探针引入化验样品中。这些已知的经过标记的探针能够在化验样品中找到互补链，并与之结合,(,杂交,),在一起，找不到互补链的,DNA,探针，则可以被洗脱。这样通过对遗留在样品中的标记过的,DNA,探针进行基因分析，就能检出病人所得的病。,2,基因治疗,(1),原理：利用正常基因纠正或补偿基因的缺陷的方案，即把正常基因导入患者体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，而原有缺陷基因一般不作处理。,(2),方法：有体外基因治疗和体内基因治疗，体外基因治疗方法疗效较好。如重度免疫缺陷症的体外基因治疗方法：,体内基因治疗：用基因工程的方法，直接向人体组织细胞中转移基因。,3,科学家通过基因工程，成功培育出能抗棉铃虫的棉花植株,抗虫棉，其过程大致如下图所示：,(1),细菌的基因之所以能在棉花细胞内表达，产生抗性，其原因是,_,。,(2),上述过程中，将目的基因导入棉花细胞内使用的方法是,_,，这种导入方法较经济、有效。目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体,DNA,上，这需要通过检测才能知道，检测采用的最好方法是,_,。,(3),科学家预言，此种,“,转基因抗虫棉,”,独立种植若干代以后，将出现不抗虫的植株，此现象来源于,_,。,(4),利用基因工程技术培育抗虫棉，相比诱变育种和杂交育种方法，具有目的性强和,_,等突出的优点。,解析：,(1),遗传密码是指在翻译形成蛋白质时所用的一套,“,密码子,”,，所有生物在经过转录、翻译形成蛋白质时，所用的都是这套密码子，基于生物在这方面的共性，在不同物种之间目的基因转移后，才可能表达成功。,(2),将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力，棉花属于双子叶植物，用这种方法最合适；检测目的基因是否插入到受体细胞染色体,DNA,上，属于分子水平检测，应采用,DNA,分子杂交技术。,(3),转基因抗虫棉生长发育过程中，细胞增殖中,DNA,复制时，会出现基因突变，改变生物的性状。,(4),基因工程能按照人们的意愿，定向改造生物，因生物共用一套生物遗传密码，因此可以在不同物种之间进行，克服了远缘杂交不亲和的障碍。这是诱变育种和杂交育种无法做到的。,答案：,(1),它们共用一套遗传密码,(2),农杆菌转化法,DNA,分子杂交技术,(3),基因突变,(4),克服远缘杂交不亲和性,(,或能有效地打破物种的生殖隔离界限,),目的基因的获取方法,例,1,下列获取目的基因的方法中需要模板链的是,(,),从基因文库中获取目的基因利用,PCR,技术扩增目的基因,反转录法通过,DNA,合成仪利用化学方法人工合成,A,B,C,D,听课记录,本题考查基因获取方法及,PCR,扩增目的基因原理的知识。基因文库中获得的目的基因是完整的,DNA,分子；化学法合成的,DNA,是脱氧核苷酸合成单链后再按碱基互补配对原则形成双链,DNA,，不需要模板；而,PCR,技术和逆转录合成,DNA,都需提供携带信息来源的模板。,答案,D,例,2如图所示，限制性核酸内切酶的识别序列和切点是G,GATCC,，据图回答。,(1),限制性核酸内切酶的作用是将,_(,或或,),处的,_,键切断。限制性核酸内切酶的作用特点是先,_,，然后在,_,(2),限制性核酸内切酶作用后形成的两个,DNA,分子片段在,DNA,连接酶的作用下可相互连接，,DNA,连接酶催化,_(,或,或,),处化学键的形成。,听课记录,基因工程中，限制性核酸内切酶的作用是使两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，不能作用于一个脱氧核苷酸内磷酸与脱氧核糖之间的键，也不能作用于,DNA,分子两条链碱基对之间的氢键。限制性核酸内切酶的作用特点是能识别,DNA,分子上特定的核苷酸序列，并作用于特定的切点；,DNA,连接酶的作用部位是连接两个,DNA,片段之间的磷酸二酯键，不能用于碱基对之间氢键的形成。,答案,特定的,(1),磷酸二酯识别,DNA,分子上特定的核苷酸序列位点上切割,(2),基因工程的操作步骤,例,3,如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程，请据图作答。,(1),图中基因工程的基本过程可以概括为,“,五步曲,”,：,_,；,_,；,_,；,_,；,_,。,(2),能否利用人的皮肤细胞来完成,过程？为什么？,(3),过程,必需的酶是,_,酶，过程,必需的酶是,_,酶。,(4),若,A,中共有,a,个碱基对，其中鸟嘌呤有,b,个，则,过程连续进行,4,次，至少需提供胸腺嘧啶,_,个。,(5),在利用,A,、,B,获得,C,的过程中，必须用,_,酶切割,A,和,B,，使它们产生,_,，再加入,_,才可形成,C,。,(6),为使过程更易进行，可用,_(,药剂,),处理,D,。,听课记录,本题考查基因工程的基本操作与识图。,(1),基因工程的操作程序是获取目的基因、形成重组,DNA,分子、将重组,DNA,分子导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞、目的基因的表达。,(2),图中,过程是从细胞中获取相应的,mRNA,，由于基因的选择性表达，人的皮肤细胞中的胰岛素基因不表达、不转录，因此不能形成胰岛素,mRNA,。,(3),从,mRNA,DNA,是逆转录的过程，需要逆转录酶。过程,DNA,分子的扩增需用解旋酶将双链,DNA,分解为单链。,(4),一个,DNA,分子中的鸟嘌呤,(b,个,),和胸腺嘧啶之和占碱基总数,(2a,个,),的一半，所以该一个,DNA,分子片段中胸腺嘧啶数为,(a,b),个。连续复制,4,次，共产生,DNA,分子,2,4,16,个，由于,DNA,为半保留复制，故需要提供的胸腺嘧啶数量为,(a,b),(16,1),15(a,b),。,(5),构建基因表达载体时需将目的基因与运载体用同一种限制性核酸内切酶切割，产生相同的粘性末端，才可以在,DNA,连接酶的作用下连接形成基因表达载体。,(6),将目的基因导入细菌，常用,Ca,2,处理细菌细胞，使其变为感受态细胞，以便吸收含目的基因的运载体进入细菌细胞内。,答案,(1),获得目的基因形成重组,DNA,分子将重组,DNA,分子导入受体细胞筛选含有目的基因的受体细胞目的基因的表达,(2),不能，皮肤细胞中的胰岛素基因未表达,(,或未转录,),，不能形成胰岛素,mRNA,。,(3),逆转录解旋,(4)15(a,b),(5),限制性核酸内切酶相同的粘性末端,DNA,连接酶,(6)CaCl,2,(,或,Ca,2,),本小节结束,请按,ESC,键返回,