萼脊兰EF1α基因的克隆及序列分析论文答辩.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Company Logo,LOGO,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Company Logo,萼脊兰,EF1,基因的克隆及序列分析,答辩人,:,学号,:,指导老师：,日期：,2015.05.12,主要内容,研究背景及意义,材料与方法,结果与分析,讨论,致谢,研究背景及意义,萼脊兰,(,Sedirea japonica,),是兰科,(Orchidaceae),萼脊兰属,(Sedirea),植物，,附生草本，茎短，具数枚叶，叶二列，稍肉质或厚革质，总状花序，疏生数朵花。,萼脊兰,的,花小而素雅，其花色典雅且具有迷人的芳香，观赏期较长，养护简单，且耐寒，故深受人们的喜爱。因此，萼脊兰越来越受到大家的关注，成为了大家研究的热点,。,研究背景及意义,材料与方法,按照,NCBI,中登录的植物翻译延长因子同源核苷酸保守序列设计简,并,引物，,EF1aF:ACATCAACATCGTGGTCATTGG,，,EF1aR:GCCCTTGTACCAGTCAAGGTTG,。,以萼脊兰叶片,作,为实验,材,料，采用,Trizol,法提取,萼脊兰总,RNA,并,利,用,RT-PCR,技术克隆翻译延伸因子,EF1,。,运用,DNAMAN,、,Primer5.0,对,EF1,基因进行剪切和简单,分析，,利用,在线网站,NCBI,、,ExPaSy-Protparam,、,nps,、,SWISS-MODEL,等,对,EF1,编码的蛋白进行同源序列的比对和结构域以及,模,体的分析、理,化,性质的分析、二级结构的分析、三级结构的构建,，,利用,CLUSTAL X 1,81,和,MEGA4,0,软件进行进化树分析，,采,用邻接算法进行。,结果与分析,1.,萼脊兰总,RNA,提取结果,RNA,条带清晰，且,28S,条带的亮度大约是,18S,的两倍，表明,RNA,无明显降解，,可用于逆转录,cDNA,结果与分析,2.PCR,产物鉴定,结果显示条带清晰无拖尾现象，在,500bp-750bp,之间，推测所克隆的基因为所需基因,结果与分析,4.,菌液阳性克隆鉴定,有条带且亮度清晰无拖尾现象，大小约,620bp,可以送去测序,结果与分析,5.,测序结果,结果与分析,7.,蛋白三级结构,利用,SWISS-MODEL,对,EF1,编码的蛋白进行三级结构的预测，与,ELONGATION FACTOR 1-ALPHA 2,的相似性最高达,81.07%,，以,ELONGATION FACTOR 1-ALPHA 2,（,4c0s.1.A,）为模型构建。,结果与分析,9.,进化树,由于延伸因,子,表达比较稳定，近几年来在许多文献中都有以,EF1,作,为植物重要的内参基因,来研究，而在萼脊兰相关基因的研究中，还没有对萼脊兰内参基因的研究，本文研究克隆了萼脊兰的,EF1,片段填补了这一空缺，为对萼脊兰内参基因的筛选奠定了基础。,本,文,并没有,对延伸因子,EF1,是否能够成为萼脊兰生长发育和生,理过,程的内参标准进行研究，这是我们应该进行更深一步研究的内容。,讨论,