微生物学：病毒.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,项目二 病毒,（,Viruses,）,一、大小与形态,个体小,（测量单位：纳米）,电镜观察,不同病毒的毒粒大小差别很大,（如,痘病毒颗粒直径约为,300nm,，口蹄疫病毒颗粒直径,10-22nm,）,形态大致可分球形、杆形和其他形状,（如蝌蚪状，,卵圆形,丝状、砖形、子弹形等）,植物病毒多呈杆形或丝状，少数呈球状。,噬菌体多呈蝌蚪状，也有球状和丝状。,大都病毒可通过细菌滤器。,动物病毒多呈球形、卵圆形或砖形。,几种病毒的形态和大小,采用各种电镜技术观察毒粒的形态,口疮病毒,(,接触性脓疱皮炎病毒,),（负染）,埃博拉病毒（正染）,痘病毒（投影）,二、毒粒的化学组成,脂类,基本化学组成,碳水化合物,核酸,蛋白质,病毒颗粒在化学上表现为,核蛋白,位于毒粒中心，构成其基因组。,一种病毒只有一种类型的核酸：,RNA,或,DNA,。,可能单股或双股；可能线状或环状；可能分节段或不分节段。,核酸,无衣壳的病毒核酸仍具有感染性，且感染范围更广，但感染力较弱。,围绕病毒核酸并与之紧密相连，由许多,壳粒,组成,。壳粒是指在电子显微镜下可认辩的组成衣壳的亚单位，由一个或多个多肽分子组成,。,衣壳,两种基本对称形式：,螺旋对称,和,二十面体对称,二十面体对称,螺旋对称,衣壳的功能,保护病毒核酸,免受核酸酶及其它理化因子的破坏。,决定病毒感染的特异性,，,与易感细胞表面存在的受体具特异性亲和力，促使病毒粒子的吸附和入侵。,决定病毒的抗原性,，,能刺激机体产生相应的抗体。,是某些病毒核衣壳外的一层包膜，含有脂类、蛋白质和糖类，,基本结构与生物膜相似。,对脂溶剂敏感,具多种生物学功能（,保护核衣壳，决定病毒的宿主嗜性,），是启动病毒感染所必需的。,囊膜,某些病毒囊膜表面所具有的放射状排列的突起物，与病毒的抗原性，致病性和宿主特异性有关。,纤突,毒粒,宿主细胞,有繁殖性的病毒基因组,病毒基因组复制、表达,病毒核酸和蛋白质,装配成具感染性的毒粒,释放至细胞外,提供原料，能量及生物合成场所,三、病毒增殖,（一）核酸复制,具有感染性的毒粒消失,吸附,侵入,脱壳,生物合成,装配与释放,（二）、增殖过程,复制周期：,自病毒吸附于细胞开始，到子代病毒从感染细胞内释放到细胞外的过程。,1,、吸附,毒粒,易感细胞,静电吸引,无特异性，可逆吸附,病毒表面蛋白与细胞受体结合,特异性，不可逆吸附,2,、侵入,囊膜与细胞膜融合,胞饮作用,直接侵入,有囊膜病毒,无囊膜病毒,侵入方式,3,、脱壳,病毒侵入细胞后，,囊膜和,/,或衣壳除去,而,释放出核酸,的过程。,毒粒消失，失去原有的感染性，进入,隐蔽期,。,脱壳是病毒基因组进行功能表达所必需的。,隐蔽期,自毒粒在受染细胞内消失到细胞内出现新的感染性毒粒的时间。,不同病毒的隐蔽期长短不同,如：,DNA,动物病毒的隐蔽期为,5,20h,RNA,动物病毒为,2,10h,（四）动物病毒的繁殖特点,完整病毒穿过细胞膜的移位方式；,细胞的内吞功能；,毒粒包膜与细胞质,膜的融合；,1、侵入,4,、生物合成,病毒利用宿主细胞作为生物合成机构，使病毒核酸表达和复制,产生大量的,病毒蛋白质和核酸,。,mRNA,的合成,早期：特异性酶的合成,核酸复制,结构蛋白质合成,5,、装配与释放,新合成的毒粒结构组分组装成完整的病毒颗粒，称做,病毒的装配,亦称,成熟,。,成熟的子代病毒颗粒依一定的,途径,释放到细胞外。,有囊膜病毒,在,出芽释放,过程中获得囊膜。,出芽,细胞溶解,装配与释放,有包膜病毒的装配与释放有时,也是同时完成的,四、干扰现象和干扰素,两种病毒感染同一种细胞或机体时，常常发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象，称为,干扰现象。,干扰素,：活细胞受到病毒等诱导物作用后产生的一种低分子糖蛋白。,抗病毒,抗肿瘤,调节免疫,功能,病毒的实验室检查,一、病料的采集,防止病料污染,注意问题,采集适宜的病料：含毒量最多,注意采集病料的时间,低温保存与运送,高速离心,采集时无菌操作,病料处理,抗生素,细菌滤器过滤,除菌,二、病毒学检查,（一）病毒的分离培养,动物病毒,动物,：,健康、易感、体内无相应抗体,禽胚,（,最常用鸡胚）,：,易感,SPF,胚或非免疫胚,细胞,：,易感,几乎所有的禽源病毒都能在禽胚上增殖,常用接种途径,羊膜腔接种,绒毛尿囊腔接种,绒毛尿囊膜接种,卵黄囊接种,细胞类型,原代细胞,传代细胞系,二倍体细胞株,将新鲜动物组织经胰酶等消化获得的单个细胞,染色体数目异常，可在体外无限分裂增殖,将原代细胞连续传代后获得，染色体数目不变,（二）病毒的鉴定,1,、电镜（,EM,）形态观察：一般不用,2,、,包涵体,检查,3,、细胞病变效应,（,CPE,）,4,、免疫学试验,血清学试验：,HA,及,HI,试验、琼扩试验、中和试验等,免疫标记技术：荧光抗体、酶标抗体等,病毒的检查可从两方面进行,采集血清，检测相应抗体,分离鉴定病毒,包涵体,病毒感染细胞后，于细胞内形成的一种特殊结构，染色后可用光学显微镜观察到,.,特殊名称：,天花病毒包涵体,称为顾氏小体（,Guarnier,），,狂犬病毒包涵体,称为内基氏小体（,Negri,），,烟草花叶病毒包涵体,称为,X,体,包涵体是某些病毒对敏感机体或细胞的病理学特征，其,位置、数量、大小、形态、染色特性,等可作为病毒鉴定的依据,包涵体可在细胞核或细胞浆内；可一个或多个；有的较大，有的较小；或圆形或无规律形态；可嗜酸（伊红染成粉红色），可嗜碱（苏木精染成蓝色）,病毒的,包涵体,图,病毒蚀斑（,plaque,）：又称空斑，是病毒 在表面覆盖有营养琼脂的细胞单层上形成肉 眼可见的局部病损区域。,是多数动物病毒经敏感细胞培养引起的细胞显微表现的改变,CPE,是病毒在细胞内增殖的重要指标，具有种的特征。,病毒的纯化及量的测定,CPE,类型：,细胞聚集、圆缩、脱落，形成合胞体,细胞病变效应（,cytopathic effect,CPE,）,通常认为一颗病毒形成一个蚀斑,第四节 常见的动物病毒,重点：病毒的致病性,微生物学检验：主要采用,免疫学方法,口蹄疫病毒,（微,RNA,病毒科 口疮病毒属）,血清型（,7,个）：,A,型、,0,型、,C,型、,SAT,（,1,型、,2,型、,3,型）、亚洲,I,型,不耐酸,肉品自然酸化去毒,致病性,自然条件下，,偶蹄兽,最易感,猪、牛、羊等的口蹄疫（口腔黏膜，舌，蹄，间或乳房部位皮肤发生水疱）,实验室检查,动物接种,血清定型,病料,乳鼠（,3d,、,9d,）,皮下或腹腔注射,均死亡,区别于,猪水疱病病毒（,3d,死、,9d,不死,）,中和试验,狂犬病病毒,（弹状病毒科 弹状病毒属）,从自然病例分离到的病毒,街毒,家兔,毒力减弱,固定毒,形成胞浆包涵体（内基氏小体）：位于脑组织,致病性,脑内接种,连续传代,可感染各种温血动物；犬、猫及食肉动物最易感,狂犬病（神经症状）,带毒动物咬伤,麻痹型,兴奋型,实验室检查,包涵体检查,荧光抗体检查,脑组织,切片或触片,Seller,氏染色,镜检,胞浆内基氏小体：鲜红色（间质呈粉红色；红细胞呈橘红色）,脑组织或唾液腺,切片或触片,荧光抗体染色,荧光显微镜观察：荧光,犬细小病毒,（细小病毒科 细小病毒属）,血凝性：凝集猪、猴红细胞,致病性,主要感染犬、以断奶幼犬最易感,肠炎型,心肌炎型,实验室检查,免疫试纸条,猪瘟病毒,（黄病毒科 瘟病毒属）,致病性,只感染猪,典型猪瘟（急性型）,非典型猪瘟（亚急性型及慢性型）,实验室检查,典型病例：病毒鉴定（荧光抗体或酶标抗体等）,非典型病例：血清抗体检查,猪传染性胃肠炎病毒,（冠状病毒科 冠状病毒属）,致病性,只感染猪，,10d,以内仔猪高发病率和高致死率,表现呕吐、腹泻,实验室检查,病毒分离鉴定,血清抗体检查,采集发病期及康复期双份血清,中和试验或,ELISA,检测抗体,病料,荧光抗体或,ELISA,快速检测,细胞培养,中和试验或荧光抗体鉴定,新城疫病毒,（副粘病毒科 副粘病毒属）,血凝性,凝集多种禽类及哺乳动物红细胞,培养,致病性,鸡胚（,10,日龄）：尿囊腔接种,侵害鸡、火鸡、鹅等,病毒毒力型,中毒型,弱毒型,强毒型,表现有呼吸道、消化道、神经症状，产蛋下降,实验室检查,病毒分离鉴定,血清抗体监测,病料,鸡胚培养,收集尿囊液,HA,及,HI,试验,毒力测定）,（,HI,试验,小鹅瘟病毒,（细小病毒科 细小病毒属）,培养,初分离,番鸭胚,鹅胚,12,14,日龄 尿囊腔接种,致病性,侵害,1m,以内雏鹅，雏番鸭也可感染发病,特征病变：回肠部位形成肠栓,实验室检查,病毒分离鉴定,病料,鹅胚,中和试验,阳性血清,死亡率,大于,50%,小于,10%,鸭瘟病毒,（疱疹病毒科）,培养,初分离：鸭胚（,9,12,日龄）绒毛尿囊接种,膜上白色痘斑，胚体食死亡，肝有坏死灶,形成核内包涵体,致病性,主要侵害鸭，鹅也可感染发病,腹泻、流泪、两腿麻痹、部分鸭头肿大,（病变：消化道充血出血，后期食道、泄殖腔覆盖黄绿色假膜）,实验室检查,病毒分离鉴定,病料,鸭胚培养,荧光抗体染色或检查包涵体,鉴定（中和试验或荧光抗体染色等）,兔出血症病毒,（嵌杯病毒科嵌杯病毒属）,血凝性,凝集人,“,O,”,型红细胞,致病性,主要侵害,2m,以上兔，长毛兔最易感，膘情好易发病,肝脏及肺的严重病变,实验室检查,病料,HA,及,HI,试验,