DB44∕T 1731-2015 坛紫菜自由丝状体扩繁技术规程(广东省).pdf

ICS 65. 150 B 51 备案号52348-2017DB44 广东省由巳E宁，方标准D844月1731-2015坛紫菜自由丝状体扩繁技术规程Technical standard of pyro，/注haitanensi.注free-livingconchocelis am plification 2015-12-16发布2016-04-16实施广东省质量技术监督局发布1 二DB44/ T 1731-2015 同IJ本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准由广东衍海洋与渔业局提出.本标准由广东省水产标准化技术委员会CGD/CT37)归口。本标准起草悦位:汕头市海洋与水产研究所.本标准主要起草人:杨晓、李春晓、许晓能、林泊、廖烈金、杨文君.2 1 范围2 规范性引用文件海水水质1、3. 2 消毒小时静置后，怯(25mg 使用。4 培养用具4. 1 用具坛紫菜自由丝状体扩繁技术规程主要用具有三角烧瓶、细口玻璃瓶、透明塑料瓶等。4. 2 消毒用具使用前必须届IJ洗干净，并根据其大小和材质等条件选择不同的消毒方法.4.2. 1 高温消毒4.2.1. 1 煮沸消毒D844/ T 1731-2015 3 4 DB44/ T 1731-2015 把容器、工具放入锅中.tm水煮沸5min，冷却至室温后备用.4. 2. 1. 2 烘箱干燥消毒将玻硝容器、金属工具放入下燥箱，温度刃至120C恒温下燥1h.待温度降至室温后备用。4. 2. 2 化学药品消毒4. 2. 2. 1 次氯酸纳消毒用次氯酸纳配成有效氯浓度为100mg/L(j(J溶液，将容器、工具在溶液中没泡0.5h.然后取出，用经过t肖奇的自来水冲洗3次4次。4. 2. 2. 2 高锺酸何消毒将容器、工具在浓度为300mg/L的新配高健仰溶液中浸泡5min，然后取出，用经过消毒的自来水冲洗3次4次。5 培养液5. 1 常用培养液配方n用tiE养浓配方参见附录A.5. 2 配制要求与方法5. 2. 1 培养液中添加的各种营养元兹的质ii1:rZ达到.e.lt高于化学纯。容il应经过消说。5. 2. 2 各种营养元东单独或分组配制成/ij:液，浓度以每升培养液加入1mL时液为宜.I号液用消毒后的然饱水配制.5. 2. 3 町液保存在4C冰箱中备用.5. 2. 4 IV液应摇匀后使用，如发现沉淀或被污染则不能使用。5. 2. 5 H液力n入境养液一般先!JnN.再!JnP、后力IFe 等。每加入一种或一组营养元素，使之均匀后再加入下一种。6 培养生态条件6. 1水iE远直;).温15C23C.最适水温17C21C.6. 2 光照适宜光照强度1000 lx2 000 Ix. 适光照强度1500 lx.光照、周期12L: 12D14 L: IOD. 6. 3 盐度适宜盐皮2532.敲适盐度2629.6. 4 pH值适宜pllili7.58. 5.最适pH值8.08. 1. 2 D644/T 1731-2015 7 j辈革申丝状体要求7. 1 形态t主紫红色，谍丝舒展，细胞细长.7. 2 长度自由丝状体月1向速粉碎机切碎，切段的氏度在O.2 ,-0. 5 mm之间为宜。7. 3 接种密度1 g! L- 2 g! L. 8 多级扩增8.1 一级扩增8. 1. 1 培养装置以500mL的三角烧瓶为宜。8. 1. 2 培养方法用消毒的过滤纸包扎瓶口，在室内静置培养，每天轻轻撼动4次-6次.每周更快培养液l次.8. 1.3 培养时间与密度培养时间以4周-6周为宜。当丝状体密度达到l接利:密度的4倍以上后，使nJ继续扩增或移植贝壳-8. 2 二级扩增8. 2. 1 培养装置以1L- 2 L的三角烧瓶为宜-8. 2. 2 培养方法用消说的过滤纸包扎瓶口，在室内静置培养，每天撼动4次-6次。或者采用室内充气培养.Jil入的空气需要经过过滤。一般每周豆换培养液1次，视丝状体的生长状况而定.8. 2. 3 培养时间与密度培养时间以4周-6周为宜.当丝状体毡度达到接种密度的4倍以上后，便可继续扩增或移植贝壳。8. 3 三级扩增8. 3. 1 培养装置以10L-20 L的细口玻璃瓶或透明塑料瓶为直.8.3.2 培养方法采用室内充气培养，通入的空气简要经过过滤。-般每周更换培养液l次，视丝状体的生长状况而3 .5 6 DB44/T 1731-2015 定。8. 3. 3 培养时间与密度培养时问以3周-5周为宜。当丝状体密度达到接种密度的5倍以上后，便可移植贝壳。9 日常管理9. 1 保持适宜的培养条件保持水温、光照、盐度、pH值在适宜的范围内，以最适宜范围为佳。9. 2 观察9. 2. 1 吕ilIJ观察每天观然自由丝状体的氏势、色泽、状态以及受污染情况等。正常的丝状体为浅紫红色，M.分散主主浮状。若丝状体辰1戊小绒球或棉絮状，应切碎再扩I曾培养。9. 2. 2 显微镜检查检查自由丝状体的l势、细胞形态、是否形成壳袍子囊枝等。生l是正常的生生状体部丝舒展，细胞纽l长，没有先于包于裳枝形成。4 A. 1 F1培养液配方FI培养液配方表A.10 A. 2 实验室3实验室3A .3 MES培养液配方维生素，维生素B，i由海海水A. 3. 1 MP 11原液配方MP II原液配方见表A.3.附录A(资料性附录常用坛紫菜自由丝状体培养液配方5z 0.:;g I 000 mL DB44/T 1731-2015 5 7 D944/ T 1731一-2015表A.3MPlIJ累;在配方成分用盘Na,.EDTA 3 000 mg H,BO, 2 500 mg IInC I, . 4H,0 350 mg FeC1, .6H.o 125 mg ZnCl, 25 mg CoCl, .6H.o 10 mg FeCJl;(), 60 mg A在f留水定容宦1000 mL 注:配制后加热宅沸腾使J1;部解.A. 3. 2 MES enrichment原液配方MES enrichment原液配方见表A.40表A.4MES enrichment原液配方成分用f注NaN3 2.8 g 甘Ii磷陪纳(Na:_Glycerophosphate) 0.4 g MP JI 200 mL Tris 4 g 蒸饱水700 mL j主用1mol/L的HCI训pH值至7.6.再用蒸俯水定容至1000 mLo A. 3. 3 MES培养液配方MES培养液配方见友A.50表A.5MES培养液配方成分m一川-肌MES cnrichment尿液捎带海水8 6 的FON-Fnh二产叮叮。广东行地方标准坛紫菜自由丝状体扩繁技术规程DB44/T 1731-2015 * 广东1标准化研究院组织印刷l广州市海区1暂囚路563 ) 104空邮政编问510220间111: 帆附bz360.org电话[phone]南方医科大学广州广v印刷厂9