无菌和环氧乙烷残留量检测.pptx

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,提要,1.惯用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检验,2.环氧乙烷残留量,无菌和环氧乙烷残留量检测,第1页,惯用灭菌方法,灭菌方法：,物理方法,干热灭菌,湿热灭菌,射线灭菌,滤过灭菌,化学方法,气体灭菌,药液灭菌,无菌和环氧乙烷残留量检测,第2页,干热灭菌法,干热灭菌法可用于能耐受较高温度，却不宜被蒸汽穿透、或者易被湿热破坏物品灭菌。,分类：,火焰灭菌法：,是将待灭菌物品直接置于火焰中烧灼进行灭菌方法，灭菌快速、可靠、简便。,适合用于：耐火焰材质物品如金属、玻璃用具或容器及瓷器等灭菌,干热空气灭菌法：,是将待灭菌物品置于高温干热空气中灭菌方法，需要长时间高热环境才能到达灭菌效果。,适合用于：耐高温材质物品（玻璃、金属制品等）及耐高温、不允许湿气穿透油脂类和粉末化学药品。,干热空气灭菌惯用：135145灭菌35h；160170灭菌24h；180200灭菌0.51h。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第3页,湿热灭菌法,湿热灭菌法是经过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物方法,。,分类:,煮沸灭菌,流通蒸汽灭菌,热压灭菌,适合用于：耐高温、耐高压蒸气物品。金属或玻璃容器及用具、瓷器、橡胶塞、膜滤器等均能采取此法。,惯用条件（温度、蒸气表压与时间）为：115（67kPa），30min；121（97kPa），20min；126（139 kPa），15min。,影响湿热灭菌原因有：,细菌种类与数量,器械（被灭菌物）性质,灭菌温度、压力与时间,无菌和环氧乙烷残留量检测,第4页,射线灭菌法,惯用有：,辐射灭菌法：,原理是射线可直接破坏细菌DNA，造成微生物死亡。辐射灭菌特点是不升高灭菌产品温度，穿透性强。,适合用于：羊肠线、高分子材料等医疗器械灭菌。,紫外线灭菌法：,是利用紫外线作用于菌体核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。紫外光波长190-350nm之间，其中波长为260nm左右，对微生物生物效应最大。,适合用于：无菌室、一些工作区空气灭菌、物体表面灭菌。,微波灭菌法：,采取频率300MHz300kMHz电磁波照射产生热能杀灭微生物方法。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第5页,紫外线照射灭菌时注意问题,紫外线杀菌力，随使用时间增加而减退，普通使用时间到达额定时间70时应更换紫外线灯管，以确保杀菌效果。紫外线灯平均寿命普通为h。,紫外线杀菌作用随菌种不一样而不一样，杀霉菌照射量要比杀杆菌大40 50倍。,紫外线照射通常按相对湿度为60基础设计，室内湿度增加时，照射量应对应增加。,紫外线灭菌效果与照射时间长短相关，这需要经过验证来确定照射时间。,紫外照射灯安装形式及高度，应依据实际情况，参考使用说明决定,无菌和环氧乙烷残留量检测,第6页,滤过除菌法,滤过除菌法：,指用滤过方法除去活或死微生物方法，是一个机械除菌方法，供除菌用滤器，要求能有效地从溶液中除净微生物，溶液能顺畅地经过，轻易清洗，操作简便。,适合用于：,对热不稳定药品溶液、气体、水等除菌。,惯用除菌滤器,（应在无菌操条件下进行）,：,0.22m或0.3m微孔滤膜,G6垂熔玻璃滤器,无菌和环氧乙烷残留量检测,第7页,化学灭菌法,气体灭菌法：,指用化学药品气体或蒸气杀灭微生物方法。,惯用气态杀菌剂：为环氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、过氧,乙酸等。,药液灭菌法:,药液灭菌法利用药液杀灭微生物方法。,惯用有0.1%0.2%苯扎溴铵溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚维,酮碘溶液等。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第8页,小结,高压蒸汽灭菌:,工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，普通采取121灭菌半小时,不一样培养基有不一样要求,应分别处理,。,火焰灭菌：,接种针、接种环等可直接火焰灭菌。,高温干燥灭菌：,各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160灭菌2小时。,普通消毒:,无菌室内凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其它方法进行消毒处理，可采取适当消毒液擦拭消毒，工作人员手也用此法进行消毒。,空气消毒：,开启紫外灯照射3060分钟即可。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第9页,提要,1.惯用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检验,2.环氧乙烷残留量,无菌和环氧乙烷残留量检测,第10页,环氧乙烷灭菌相关知识,环氧乙烷灭菌利用环氧乙烷在常温下为气态，蒸汽压较大，对灭菌物品穿透性强，能够穿透微孔而到达物品深部，环氧乙烷是一个非常活泼灭菌剂，杀菌能力强且广泛，有很强穿透能力，适合于包装物品灭菌，对物品损坏轻微，且费用较低。现大部分医疗器械生产企业采取此种方法灭菌。,环氧乙烷能够高效地对医疗产品进行灭菌，在杀灭微生物同时医疗产品上环氧乙烷残留也会对使用者和患者身体带来一定毒害。其毒性包含两个方面：,一为环氧乙烷本身毒性。经过呼吸器官吸入体内刺激呼吸道，引发恶心、呕吐、头昏、头痛、嗜睡等症状。严重者可引发肺水肿；经过皮肤、粘膜接触后，引发红肿、水泡及血泡，严重者可出现局部皮肤烧伤及粘膜组织灼伤，造成毛发脱落；超量进入人体血液内，可致红细胞溶解，补体灭活和凝血酶破坏引发全身性溶血。,二是灭菌后生成物毒性。环氧乙烷与氯元素接触产生毒性很大氯醇，与水接触形成乙二醇，对环境和种植物生产起到很大破坏作用。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第11页,环氧乙烷灭菌相关知识,医疗器械产品如采取环氧乙烷灭菌，应由有资格人员负责设备维护灭菌确实认和常规控制及产品放行工作。应不停提升各类人员对环氧乙烷残留量造成健康风险意识，,首先经环氧乙烷灭菌医疗器械必须按要求进行解析，即纸塑包装灭菌后解析7天，全塑包装灭菌后解析14天，并经检测确定器械上环氧乙烷残留量小于10g/g后出厂；,其次经环氧乙烷灭菌医疗器械应采取透气性好，有利于消除残留环氧乙烷纸塑包装，以最大程度地降低环氧乙烷残留，降低器械使用风险；,第三体积越大，环氧乙烷含量绝对就越高；对于医用敷料、无纺布、合成医用乳胶手套等对环氧乙烷气体有很强吸附性，吸附在这类产品上残留量极难彻底解析，所以对这类产品，不应选取环氧乙烷灭菌。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第12页,环氧乙烷残留量测定方法,气相色谱法,比色分析法,原理：,环氧乙烷在酸性条件下水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成,甲醛，甲醛与品红-亚硫酸试液反应产生紫红色化合物，经过比色法分析,可求得环氧乙烷含量。,所用试剂：,高碘酸，硫代硫酸钠，无水亚硫酸钠，碱性品红，盐酸，乙二醇等,浸提方法：,分模拟使用浸提法和极限浸提法。,模拟使用浸提法：,用0.1mol/L盐酸作为浸提介质,整个或部分与人体接触器械在37(人体温度)浸提,不直接与人体接触器械在25(室温)浸提.浸提时间应考虑在推荐或预期使用最为严格时间条件下进行,但不短于1h.浸提表面为器械与药液或血液接触表面.,极限浸提法:,取样品上有代表性部位,截为5mm长碎块,称取2.0g置于容器中,加0.1mol/L盐酸10ml,室温放置1h,作为供试液;对于容器类样品,可加0.1mol/L盐酸至公称容量,在371下恒温1h.,无菌和环氧乙烷残留量检测,第13页,环氧乙烷残留量,试验步骤,绘制标准曲线：取5支纳氏比色管，分别准确加入0.1mol/L盐酸2ml,再准确加入0.5m、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇标准溶液。另取一支纳氏比色管，准确加入0.1mol/L盐酸2ml作为空白对照。于上述各管中分别加入高碘酸溶液（5g/L)0.4ml，摇匀，放1h，然后分别滴加硫代硫酸钠溶液（10g/L）至出现黄色恰好消失。再分别加入品红-亚硫酸试液0.2ml，用蒸馏水稀释到10ml，摇匀，35 37 条件下放置1h,于560nm波优点以空白液作参比，测定吸光度。绘制吸光度-体积标准曲线。,试验方法：准确量取供试液2.0ml于纳氏比色管中，按上面步骤操作，以测得吸光度从标准曲线上查得试液对应体积。,、,无菌和环氧乙烷残留量检测,第14页,提要,1.惯用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检验,2.环氧乙烷残留量,无菌和环氧乙烷残留量检测,第15页,微生物检验基础知识,无菌技术：,是指在微生物试验工作中，控制或预防各类微生物污染及,其干扰一系列操作方法和相关办法，其中包含无菌环境设施、无菌试,验器材以及无菌操作。,无菌环境设施,无菌室使用与管理要求,超净工作台使用与管理要求,生物安全柜,无菌试验器材,无菌操作：,概念：,是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械进行检验过程中，能预防微生物污染与干扰一个常规操作方法。,注意事项,。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第16页,提要,1.惯用灭菌方法,2.环氧乙烷残留量,4.医疗器械无菌检验,3.微生物检验基础知识,无菌和环氧乙烷残留量检测,第17页,医疗器械无菌检验引用标准,中华人民共和国药典版,/医用输液输血注射器具检验方法第部分：生物学试验方法,无菌和环氧乙烷残留量检测,第18页,无菌检验法定义,中华人民共和国药典版：,无菌检验法系用于检验药典要求无菌药品，医疗器具，原料，辅料及其它品种是否无菌一个方法,/：,本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染,无菌和环氧乙烷残留量检测,第19页,无菌检验方式,直接接种法,薄膜过滤法,无菌和环氧乙烷残留量检测,第20页,主要设备,超净工作台,恒温培养箱,恒温水浴箱,压力蒸汽灭菌器,电热干燥箱,光学显微镜,无菌和环氧乙烷残留量检测,第21页,主要器具,试管及试管架,酒精灯,75乙醇棉,灭菌刻度吸管(1ml),灭菌平皿（9cm）,锥形瓶,三角烧瓶,灭菌剪刀、镊子等,无菌和环氧乙烷残留量检测,第22页,主要培养基,流体硫乙醇酸盐培养基,改良马丁培养基,营养琼脂培养基,无菌和环氧乙烷残留量检测,第23页,稀释液、冲洗液及其制备方法,无菌氯化钠溶液：,质量浓度为9g/L无菌氯化钠溶液,蛋白胨水溶液（0.1）,制备方法：,取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调整pH值至7.10.2，分装，灭菌。,pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液,制备方法：,取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌,无菌和环氧乙烷残留量检测,第24页,培养基要求,用于培养需（厌）气菌和真菌培养基制备、培养基灵敏度检验及其它各项要求应符合中国药典（二部）附录中无菌检验法要求。,培养基可按药典处方制备，也可使用按该处方生产符合要求脱水培养基。制备后应采取验证合格灭菌程序灭菌。制备好培养基应保留在225、避光环境。培养基若保留于非密闭容器中，普通在三周内使用;若保留于密闭容器中，普通可在一年内使用。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第25页,培养基,无菌和环氧乙烷残留量检测,第26页,灵敏度试验菌种,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌,生孢梭菌,白色念珠菌,黑曲霉,:中国医学细菌保藏管理中心,无菌和环氧乙烷残留量检测,第27页,器具灭菌,与供试液接触全部器具应采取可靠方法灭菌，通常置压力蒸气灭菌器内12130min，或置电热干燥箱内1602h。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第28页,无菌室菌落数要求,无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求。,无菌室在消毒处理完成后，应检验空气中菌落数。,方法,：取直径约90mm培养皿，无菌操作注入融化营养琼脂培养基约20mL，在3035培养48h证实无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置3035培养48h后取出检验，3只双碟上生长菌落数平均不得超出1个.,无菌试验过程中应检验空气中菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，应符合上述要求。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第29页,阳性对照,应依据供试品特征选择阳性对照菌：,无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；,抗革兰阴性菌为主供试品以大肠埃希氏菌为对照菌；,抗厌氧菌供试品，以生孢梭菌为对照菌；,抗真菌供试品，以白色念珠菌为对照菌。,阳性对照试验菌液制备同培养基灵敏度检验（大肠埃希氏菌液制备同培养基灵敏度检验中金黄色葡萄球菌）加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检验每份培养基接种样品量。阳性对照管培养4872小时应生长良好。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第30页,供试品数量,同一批号最少3个11个单位供试品。,批出厂产品最少检验数量：,个：,或个（取较大者）,：,或件（取较少者）,无菌和环氧乙烷残留量检测,第31页,上市抽验样品（液体制剂）最少检验量,1,全量,20,1V5,半量,10,5V20,2ml,10,20V50,5ml,10,50V100,10ml,10,50V100（静脉给药）,半量,10,100V500,半量,6,V500,500ml,6,无菌和环氧乙烷残留量检测,第32页,上市抽验样品（固体制剂）最少检验量,M50mg 全量 20,50mgM300mg 半量 10,300mgM5g 150mg 10,M5g 500mg 10,外科用敷料棉花及纱布取100mg或1cm3cm 10,缝合线、一次性医用材料整个材料 20,带导管一次性医疗器具（如输液袋）10,其它医疗器具整个器具（切碎或拆散开）20,无菌和环氧乙烷残留量检测,第33页,备注,每种培养基各接种10支供试品。,假如医用器械体积过大，培养基用量可在ml以上，将其完全浸没。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第34页,供试液制备及接种,制备及接种优先采取将供试品或其有代表性各部分直接投放入培养基内培养。,如供试品不宜直接投放，可按以下方法制备供试液，应使介质充分洗提供试品浸提表面。,管类器具：,按管内表面积每10cm2流过管内腔1mL浸提介质，流量约为10ml/min;,容器类器具：,容器内已装有液体或直接抽取容器内液体为供试液;空容器按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml，振摇数次。,实体类器具：,实体类器具按表面积每10cm2加入加入浸提介质1ml，振摇数次。,供试液制备应按无菌操作法进行，在制备后2h内使用。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第35页,接种后培养基,无菌和环氧乙烷残留量检测,第36页,培养基装量,直接接种法即每支供试品按要求量分别接种到各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基容器中。,除另有要求外，每个容器中培养基用量应符合接种供试品体积不得大于培养基体积10，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。,每种培养基接种管数同供试品检验数量。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第37页,培养及观察,上述含培养基容器按要求温度培养14天。培养期间应逐日观察并统计是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有没有微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察接种同种新鲜培养基是否再出现浑浊或斜面是否有菌生长;或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第38页,结果判断,若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合要求;若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合要求，除非能充分证实试验结果无效，即生长微生物非供试品所含。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第39页,有以下最少一个条件时，试验结果无效,无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果不符合无菌检验法要求;,回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污染原因;,阴性对照管有菌生长;,供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。,试验若经确认无效，应重试。,重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合要求;若有菌生长，判供试品不符合要求。,无菌和环氧乙烷残留量检测,第40页,