DB21∕T 2598-2016 褐藻酸寡糖含量的检测.pdf

ICS 71.040.01 A 43 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 25982016 褐藻酸寡糖含量的检测 Determination of the content of alginate oligosaccharides 2016 - 03 - 28 发布 2016 - 05 - 28 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 25982016 I 前 言 本标准是依据 GB/T 1.1-2009标准化工作导则第 1 部分：标准的结构和编写给出的规则起草的。 本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。 本标准由大连市质量技术监督局归口。 本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。 本标准主要起草人：赵勇、尹恒、陈玮。 DB21/T 25982016 1 褐藻酸寡糖含量的检测 1 范围 本标准规定了褐藻酸寡糖含量的检测的术语和定义、原理、仪器、试剂、操作步骤和重复性。 本标准适用于从海带、马尾藻、巨藻、泡叶藻等褐藻类植物中提取的褐藻酸盐，经过加工制成的褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖含量的测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 2.1 褐藻酸寡糖 Alginate Oligosaccharides, AOS 褐藻酸在酸水解或生物酶降解条件下转变为聚合度为220的线性低聚糖。 2.2 褐藻酸寡糖的含量 Content of AOS 褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖占褐藻酸寡糖产品的质量百分比。 3 原理 在沸水浴条件下，利用含四硼酸钠的硫酸溶液将待测样品中的褐藻酸寡糖彻底水解，生成糖醛酸。糖醛酸可与间羟联苯试剂发生反应，生成紫红色物质，在波长为525 nm处有吸收。在吸收值为01.0的范围内， 该紫红色物质的吸收值与糖醛酸浓度呈线性关系， 通过计算可得到待测样品中糖醛酸的浓度和总质量。利用糖醛酸的总质量除以待测样品的总质量，计算得出褐藻酸寡糖的含量。 4 仪器 4.1 分光光度计。 4.2 分析天平：感应量为 0.0001 g。 4.3 电子天平：感应量为 0.01 g。 4.4 水浴锅。 4.5 漩涡混合振荡器。 4.6 恒温干燥箱。 5 试剂 5.1 去离子水。 DB21/T 25982016 2 5.2 浓硫酸：分析纯。 5.3 半乳糖醛酸：色谱纯，纯度98%。 5.4 氢氧化钠：分析纯。 5.5 十水合四硼酸钠：分析纯。 5.6 间羟联苯：优级纯，纯度98%。 5.7 0.1 g/L 半乳糖醛酸标准溶液：将 0.10 g 半乳糖醛酸用 200 mL300 mL 去离子水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入 1 L 容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。 5.8 120 mM 四硼酸钠-硫酸溶液： 将 4.576 g 十水合四硼酸钠用 50 mL60 mL 浓硫酸在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入 100 mL 容量瓶中，加浓硫酸至容量瓶刻度线。 5.9 0.5%（w/v）氢氧化钠溶液：将 0.50 g 氢氧化钠用 50 mL60 mL 去离子水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入 100 mL 容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。 5.10 0.15%（w/v）间羟联苯试剂：将 0.15 g 间羟联苯用 50 mL60 mL 上述氢氧化钠溶液在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入 100 mL 容量瓶中，加上述氢氧化钠溶液至容量瓶刻度线，置于棕色瓶中，阴暗处保存。 6 操作步骤 6.1 待测样品的预处理 待测样品为固体，按下述步骤直接检测样品中褐藻酸寡糖的含量。待测样品为液体，需先利用恒温干燥箱将液体进行干燥处理，然后再按下述步骤对样品中褐藻酸寡糖的含量进行检测。 6.2 标准曲线制作 6.2.1 取 10 mL 带塞试管， 分别加入 0 mL， 0.1 mL， 0.2 mL， 0.3 mL， 0.4 mL 半乳糖醛酸标准溶液 （5.7） ，利用去离子水将每个试管中溶液的总体积定容为 0.4 mL，置于漩涡混合振荡器上振荡 30 s，得到浓度分别为 0 g/mL，25 g/mL，50 g/mL，75 g/mL，100 g/mL 的半乳糖醛酸梯度溶液。 6.2.2 将上述试管置于冰水浴中预冷 3 min5 min，然后在每个试管中缓慢加入 2.4 mL 四硼酸钠-硫酸溶液（5.8），加盖后置于漩涡混合振荡器上振荡 30 s。随后将试管置于沸水浴中反应 20 min，反应结束后将试管冷却至室温。 6.2.3 在每个试管中分别加入 80 L 间羟联苯试剂（5.10），置于漩涡混合振荡器上振荡 30 s，室温放置 10 min。 6.2.4 利用分光光度计测量 525 nm 波长下的吸收值（A525nm）。 6.2.5 以半乳糖醛酸的浓度为横坐标，以 A525nm为纵坐标，制作标准曲线。 6.3 待测样品中褐藻酸寡糖含量的测定 6.3.1 准确称取 0.050 g 待测样品，用 25 mL 蒸馏水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液转移到 1 L 的容量瓶中，用蒸馏水定容到 1 L，配成 0.05 g/L 的样品溶液。 6.3.2 取 0.4 mL 样品溶液，加入到 10 mL 带塞试管中，置于冰水浴中预冷 3 min5 min，随后缓慢加入2.4 mL 四硼酸钠-硫酸溶液（5.8），加盖后置于漩涡混合振荡器上振荡 30 s。随后将试管置于沸水浴中反应 20 min，反应结束后将试管冷却至室温。 6.3.3 在每个试管中分别加入 80 L 间羟联苯试剂（5.10），置于漩涡混合振荡器上振荡 30 s，室温放置 10 min。利用分光光度计测量待测样品的 A525nm。 DB21/T 25982016 3 6.3.4 如果测得的 A525nm不在标准曲线范围内，需提高或稀释待测样品的浓度，使其测得的 A525nm在标准曲线范围内。 6.3.5 通过标准曲线，计算得出待测样品中糖醛酸的浓度。 6.3.6 待测样品中褐藻酸寡糖的含量按式（1）进行计算： 式中： CAOS待测样品中褐藻酸寡糖的含量，%； C1样品溶液中糖醛酸质量浓度，g/L； V样品溶液的体积，L； W待测样品的质量，g。 7 重复性 在同一实验室由同一操作人员完成的三个平行测定结果，对质量分数大于10%的组分，相对标准偏差不大于5%；对质量分数小于10%的组分，相对标准偏差不大于10%；以三次平行测定结果的算术平均值为测定结果。 _