微生物学弧菌.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第十章 弧菌属检查,第一节 弧菌属,弧菌科,弧菌属,异单胞菌属,发光杆菌属等共8个属,O1,群霍乱弧菌,非,O1,群霍乱弧菌,副溶血弧菌,拟态弧菌,分类,等,3,6个种,弧菌属,（,Vibrio,）的共同生物学特性:,除麦氏弧菌外，氧化酶阳性、还原硝酸盐,发酵葡萄糖产酸罕见产气,对O/129敏感（近年出现抗性株）,钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐,兼性厌氧，营养规定不高,耐碱怕酸,革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（）,弧菌属的致病性：,（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）,肠道内感染（霍乱、胃肠炎）,肠道外感染（伤口感染、败血症等）,致病性弧菌所引起的疾病,种 所致疾病 临床意义 标本来源,O1群霍乱弧菌 霍乱 重要致病菌 粪便,O139群霍乱弧菌 霍乱 重要致病菌 粪便,O2-O138群霍乱弧菌 胃肠炎 重要致病菌 粪便、血,副溶血弧菌 胃肠炎 重要致病菌 粪便、伤口,创伤弧菌 败血症、伤口感染 重要致病菌 粪便、伤口,少女弧菌 伤口感染 散发感染 伤口,溶藻弧菌 伤口感染 散发感染 耳、伤,霍利斯弧菌 胃肠炎 散发感染 粪便,拟态弧菌 胃肠炎 散发感染 粪便,河弧菌 胃肠炎 罕见感染 粪便,麦氏弧菌 胃肠炎 罕见感染 粪便,氟尼斯弧菌 胃肠炎 罕见感染,辛辛那提弧菌 菌血症、脑炎 罕见感染,鲨鱼弧菌 伤口感染 罕见感染,霍 乱 弧 菌,Vibrio cholerae,O1 and O139,霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，为我国法定传染病（甲类），俗称2号病。（1号病为鼠疫）。,霍乱的流行史,1,817-1923,共6次 印度恒河三角洲,古典生物型,1961 第7次,印度尼西亚,Eltor,生物型,1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉,O139,生物分型：,O1,群霍乱弧菌,古典生物型,El-Tor,生物型,血清学分群（型）,抗原,H 抗原：共同抗原，特异性低,O 抗原（A、B、C)：是分群和分型的基础。,1.根据O抗原不一样分155个血清群（O1群、O139群、非O1群霍乱弧菌）,2.O1群有三个血清型,AB构成小川型（Ogawa),AC构成稻叶型（Inaba）,ABC构成彦岛型(Hikojima）,临床意义 (致病原因),进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，,O139,群有荚膜,穿过小肠黏膜表面黏液层,黏附于小肠黏膜上皮细胞刷状缘的微绒毛上大量繁殖,1.侵袭力,霍乱弧菌肠毒素（,CE,cholera enterotoxin）,A1:,活性亚单位 21812,A2:,连接亚单位 5000,B：,结合亚单位,MW：80000-90000,临床意义 (致病原因),2.霍乱肠毒素,演示,感染途径,临床意义,传播途径：粪,口,传染源：病人和带菌者、污染的水源或食物,所致疾病：霍乱（,2,号病）,血容量减少性休克,酸中毒,呕吐,剧烈腹泻：米泔水样便,肌肉痉挛,霍乱弧菌的致病,（严重时液体丢失量达,500,1000ml/h,）,临床体现,临床意义,剧烈上吐下泻，严重脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡。,临床分期,临床意义,2.吐泻期 持续23天，因剧烈吐泻导致大量水分和电解质丧失，大便呈米泔样。,3.脱水虚脱期,4.恢复期 多种症状趋于缓和，但可出现发热,1,.,前驱期,无明显前驱症状，,或轻度腹鸣、腹胀和不适。,霍乱弧菌的革兰染色成果,生物学特性,描述：革兰阴性，弯曲弧形或逗点状，粪便标本中可首尾相接鱼群样平行排列,鱼群样排列,霍乱弧菌形态（电镜）,霍乱弧菌的扫描电镜图,（金属镀膜）,生物学特性,(纯培养扫描电镜),描述：,弯曲弧形或逗点状,霍乱弧菌的运动模式图,生物学特性：,(米泔水样便),描述：,穿梭或,流星样,动力,霍乱弧菌的鞭毛,生物学特性,(电镜),生物学特性,(培养特性培养条件),需氧或兼性厌氧，营养规定不高，TCBS上黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素平板上黑色中心菌落。,最适生长温度37,最适pH8.89.0(耐碱怕酸),初次分离常用碱性蛋白胨水增菌,无盐环境中可生长，触酶氧化酶均阳性,发酵多种糖类产酸不产气，对O/129敏感,生物学特性 (重要的生化反应),除霍乱和拟态弧菌外，其他弧菌在不含盐的培养基上不生长,霍乱弧菌,拟态弧菌,副溶血弧菌,耐盐试验(%,NaCl),0%6%7%10%,氧化酶、吲哚、枸橼酸盐运用、明胶试验（）,赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶（）、精氨酸双水解（）、动力（）,发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇，乳糖（v）,生物学特性,（重要的生化反应）,生物学特性(生物型的辨别：根据生化反应分型),生物学性状,(血清型：根据抗原分型),用小川型和稻叶型单价诊断血清作玻片凝集。与小川型血清凝集而与稻叶型血清不凝集者为小川型，反之为稻叶型。在两个单价血清中均有明显凝集者为彦岛型。,生物学性状 (抵御力),河水中：20天 蔬菜水果上：1周 冰内：4天,耐碱怕酸：胃酸中存活4分钟 pH10.2仍能生长,对庆大霉素耐药：用于制作选择性培养基,多粘菌素B(50u/ml)：Eltro biotype耐药，,Classic biotype敏感，可作为分型根据,对热、干燥、日光和常用消毒剂敏感，,10012min即可杀死,标,本,的,采,集,微生物学检查,患者的米泔水样便、呕吐物、尸检肠内容物或携带有病原菌的海产品和污染的水源等,一、标本直接检查,（1）涂片染色镜检：取标本涂片2张，乙醇或甲醇固定，革兰染色，油镜观测。,微生物学检查,（2）动力和制动试验：水样便，悬滴（压滴）、高倍镜、暗视野观测动力：穿梭似流星状。同法制备另一标本，加入1滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价1:64）；可见运动活泼的细菌运动停止并发生凝集，为制动试验阳性。,（3）迅速诊断：O1和O139抗体做玻片凝集,（4）霍乱毒素的测定,初次分离用,pH8.5,碱性蛋白胨水，经4,6,小时液体表面大量繁殖，形成菌膜。,二 分离培养和鉴定,二 分离培养和鉴定,TCBS（,硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板）,霍乱弧菌在,TCBS,琼脂平板上形成,发酵蔗糖的较大的黄色菌落,含亚碲酸钾的培养基：,4,号琼脂 庆大霉素琼脂,霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落,检查措施,l）初步鉴定：与01群和O139群抗血清(多价和单,价）凝集试验，菌落和菌体形态、氧化酶试验等,作出初步汇报。,2）最终鉴定：根据纯培养后全面生化反应、血清学,分群及分型、生物型。,微生物学检查,检查措施,鉴定试验,(1)霍乱红试验,(2)O/129敏感试验,(3)黏丝试验,(4)耐盐试验,微生物学检查,3.,鉴别试验,霍乱弧菌,与,拟态弧菌,鉴别：蔗糖发酵,（）,（）,霍乱弧菌,和气单胞菌和邻单胞菌,鉴别：黏丝试验,（）,（）,鉴定要点：,确诊霍乱弧菌必须具有的条件：,1、涂片为革兰氏阴性弧菌或杆菌；,2、TCBS等选择培养基上经典的菌落特性；,3、动力阳性、制动试验阳性；,4、霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。,防 治 原 则,保护水源、做好粪便的管理、食品卫生工作。,接种疫苗：霍乱弧菌死菌苗、类毒素、新疫苗（减毒重组活疫苗、菌苗加类毒素混合苗、霍乱-伤寒杂交菌苗等）。,及时和合适的补充液体和电解质，应用抗菌药物（链霉素、氯霉素、强力霉素、磺胺类药物等）,副溶血性弧菌（V。parahemolyticus）存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。根据菌体O抗原不一样，现已经有13个血清群。重要引起食物中毒，尤以日本、东南亚、美国及我国台北地区多见，也是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌。,V.parahemolyticus,副溶血性弧菌,临床意义,致病物质,所致疾病：食物中毒、创伤感染、败血症,传染源：海产品或盐腌渍品,传播途径：经口,临床症状：腹痛、腹泻、呕吐与发热、水样便,耐热性溶血毒素：与动物红细胞膜表面的神经节脂受体,结合而致溶血。,不耐热溶血毒素,生物学特性（培养特性）,需氧或兼性厌氧,营养规定不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度3%）,血平板上不溶血或只产生溶血，但在我萋培养基上呈溶血，这种现象称为“神奈川现象”。,生物学特性（生化特性）,氧化酶,+,蔗糖发酵,-,葡萄糖发酵,+,NaCl,生长试验,0%NaCl -,3%NaCl +,7%NaCl +,10%NaCl -,脲酶,+/-,(,临床分离菌株常阳性）,标本,3%NaCl,碱性蛋白胨水培养基,TCBS,分离培养,可疑菌落（绿色）,纯培养,菌种鉴定,毒素测定,微生物学检查程序,生物学特性（培养特性）,需氧或兼性厌氧,营养规定不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度3%）,TCBS上形成绿色菌落,副溶血弧菌在,TCBS,上菌落,鉴定特性,革兰阴性弧菌或杆菌，动力（）,氧化酶（），临床分离株脲酶常（）,TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验,神奈川现象(+),多种生化试验,TDH和TRH的检测：毒素和基因检测,第十一章 弯曲菌属、螺杆菌属,第一节 弯曲菌属,分类,弯曲菌属原属于弧菌属，现属于弯曲杆菌科，1973年正式命名为弯曲菌属。,的伯杰手册中将其分为30个种(亚种),临床意义,分布：,广泛分布于温血动物,自然界的任何水中都也许具有弯曲菌,空肠弯曲菌：,感染来源：,感染动物的粪便、未经处理的,水和牛乳等。,传播途径：,以食物和水的传播为多见。,传播方式：,经口摄入。,所致病：,空肠弯曲菌重要引起肠道感染,胎儿弯曲菌重要引起肠外感染。,生物学特性,形态染色,革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、螺旋形或经典的海鸥展翅形，陈旧培养物可呈球形或长丝状。,无芽胞、无荚膜、一端或两端有单鞭毛，运动非常活泼。,空肠弯曲菌革兰染色,电镜下的弯曲菌属细菌,生物学特性,抗原：,菌体,(O),抗原：血清分型的基础,热不稳定抗原,(heatlabile antigen),鞭毛,(H),抗原,生物学特性,培养特性：,微需氧菌，最佳气体环境为5%O2,10%CO2和85%N2,最适生长温度因菌种而异,-空肠/大肠弯曲菌最适生长温度43，25不生长,-胎儿弯曲菌于25和37均可生长，43不生长,营养规定高：常用布氏肉体增菌，布氏血平板培养,菌落特性：有两种,灰白色扁平湿润边缘不整洁蔓延生长的菌落（迁徙生长）,无色半透明圆形凸起有光泽的小菌落,空肠弯曲菌在巧克力平板上的菌落,生物学特性,生化反应：,生化反应不活泼，不能运用糖类，以氨基酸为能量来源。,氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（+）,尿素（-）、硫化氢（-）。,抵御力：,对外环境抵御力不强；,不耐干燥，对热和巴氏消毒敏感；,对酸性环境和消毒剂敏感,对氧也非常敏感。,血液、脑脊液 粪便、肛拭子 直接检测,增菌,（,布氏肉汤,）,动力检查 直接镜检,7,天不生长 生长 分离培养（,布氏平板,）,（多块选择平板）,弃去 微需氧环境,25,、,37,、,42,24,72h,可疑菌落,涂片染色镜检 纯培养（布氏血琼脂）,鉴定,检查程序,微生物检查,标本采集,采用新鲜粪便与肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。,如不能及时送检应种入Cary-Blair运送培养基，放4冰箱保留。,标本直接检查,直接显微镜检查,粪便与肛拭子可直接镜检：特殊形态和运动。,核酸检测,PCR措施直接检测粪便标本中的弯曲菌,分离培养与鉴定,分离培养,粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-BAP选择平板,血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培养基,微氧环境培养,不一样细菌培养温度不一样,Key Points,革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼,微需氧：最佳生长环境为含5%O2、10%CO2、85%N2,最适生长温度因菌种而异,营养规定高,氧化酶、触酶阳性，不能运用、不发酵多种糖类，硝酸盐还原（+），脲酶（-）,重要通过食物和水经口传播。,第四节、螺杆菌属,licobacter,）,诺贝尔生理学和医学奖,1983年Marshall和Warren首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃黏膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，由此获得了诺贝尔生理学和医学奖。,一、分类,弯曲菌目（,Campylobacterale,）,螺杆菌科（,Helicobacteraceae,）,螺杆菌属（,Helicobacter,）,幽门螺杆菌,(,Helicobacter pylori,Hp),曾命名为,幽门弯曲菌,(,campylobacter pylori,),临床意义,高度适应或只能生活于胃黏膜的细菌,胃窦为其定植的最佳部位。,菌体周围微环境的pH值为7.0。,HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎有关。,胃癌发病率在某些Hp感染率高的人群中较高。,生物学特性,形态构造：,革兰染色阴性。,菌体细长弯曲呈弧形、S形和螺旋状。,陈旧培养物或固体培养基上生长时，除经典形态外，有时可出现杆状或圆球状。,菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼，无芽孢。,幽门螺杆菌革兰染色,幽门螺杆菌端鞭毛（示意图）,培养特性：,微需氧：5%O2、10%CO2、85%N2,最适生长温度：3537,高湿度环境：湿度不小于98%,营养规定高：特殊血平板生长,菌落特性：,无色半透明、圆形、“露滴样”小菌落，轻度溶血,扁平、融合成片，沿穿刺线扩散生长,生化反应,不活跃，不能运用糖类、马尿酸水解（-）,脲酶强（+）、氧化酶和触酶（+）,幽门螺杆菌在血平板上菌落,胃、十二指肠活检标本 血清,胃液,显微镜 PCR 分离培养 血清检测,检查 迅速脲,酶试验 微需氧,高湿度,革 病理 免疫 25、35,42 IgG SIgA,兰 切片 组化 37天,染 特殊,色 染色,25 不生长 35生长 42不生长,初报,可疑菌落,革兰染色、氧化酶（+）触酶（+）,动力（+）生化反应,汇报,微生物检查,标本采集,经胃镜活检胃部病变组织,床边接种或放入转运培养基内，4中保留不超过24h,受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周,1.直接显微镜检查,涂片或悬滴观测,直接涂片染色镜检,2.迅速脲酶试验,尿素培养基检测,3.核酸检测,4.粪便标本Hp抗原检测,分离培养与鉴定,分离培养,宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种,将接种后的平板放入微需氧和,98%,以上湿度的环境培养,72-96,小时候可见较小、圆形、半透明菌落。,鉴定,形态和染色性,菌落特性，35生长,氧化酶和触酶（+）、脲酶强（+）萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感,在1%甘油和1%胆盐中均不生长,Key Points,革兰阴性弯曲菌，动力（+）,微氧高湿度培养环境，营养规定较高,氧化酶和触酶（+）、脲酶强（+）,思索题,根据O抗原不一样，霍乱弧菌是怎么分型的？,怎样检查怀疑霍乱的粪便标本？,什么是神奈川现象？,霍乱红试验?,