体外抗体形成细胞的检测.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,体外抗体形成细胞的检测,SRBC免疫小鼠,获取小鼠脾细胞,SRBC,(Ag)+,spleen cell,(Ab)+,Complement,MAC,裂解SRBC,释放出血红蛋白,分光光度计定量测定,Principle,SRBC,B,anti-SRBC Ab,IMMUNIZE MOUSE,SRBC,COMPLEMENT,SRBC制备,以NS洗涤防凝SRBC两次,以,NS,稀释成,1.510,8,/ml,Complement制备,豚鼠血清(5)+SRBC(1),4吸收 30 min,3000rpm离心,15min，上清,1:10 稀释备用,脾细胞制备,210,7,/ml 脾细胞(见环节,),Procedure,脾细胞旳制备,SRBC免疫小鼠,4天后拉颈处死，取脾,200目铜网上研磨脾脏，搜集脾细胞悬液,2023rpm离心5min，弃上清,加4.5 ml DDW，振荡45秒,加入0.5ml,9%NaCL,2023rpm 离心 5min,弃上清,（加5,ml Hanks 液，混匀,2023rpm 离心 5min，弃上清）,加 1 ml Hanks 液,(计数，调整细胞浓度为210,7,/ml),Procedure,混匀，37 孵育 1 h,3000rpm 离心 5 min，取上清,721分光光度计测413nm处OD值（Hb量）,Procedure,试验管,对照管,脾细胞,1 ml,1 ml Hanks 液,SRBC,1 ml,1 ml,Complement,1 ml,1 ml,抗体形成细胞检测,W,W,W,W,1mm,1mm1mm0.1mm=0.1mm,3,=0.110,-3,ml=10,-4,ml,细胞浓度:,细胞数/ml=5个中格旳细胞数 x 5x 10,4,（RBC计数法）,细胞数/ml=4个大格旳细胞总数/4 x10,4,（WBC计数法）,W,W,W,W,1mm,