GB 5009.265-2016 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 6食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3发布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 61 食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定1 范围本标准规定了食品中多环芳烃( 萘、 苊、 芴、 菲、 蒽、 荧蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 荧蒽、 苯并k 荧蒽、 苯并a 芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝的液相色谱测定方法和食品中多环芳烃( 萘、 苊烯、 苊、 芴、 菲、 蒽、 荧蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 荧蒽、 苯并k 荧蒽、 苯并a 芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于食品中多环芳烃含量的测定。第一法 高效液相色谱法2 原理试样中的多环芳烃用有机溶剂提取, 提取液浓缩至近干, 溶剂溶解, 用P S A(N-丙基乙二胺) 和C1 8固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化。经浓缩定容后, 通过高效液相色谱分离, 测定各种多环芳烃在不同激发波长和发射波长处的荧光强度, 外标法定量。3 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 乙腈(CH3C N) : 色谱纯。3.1.2 正己烷(C6H1 4) : 色谱纯。3.1.3 二氯甲烷(CH2C l2) : 色谱纯。3.1.4 硅藻土: 色谱纯。3.1.5 硫酸镁(M g S O4) : 优级纯。3.1.6 N-丙基乙二胺(P S A) : 粒径4 0m。3.1.7 封尾C1 8固相萃取填料: 粒径4 0m6 3m。3.1.8 弗罗里硅土固相萃取柱:5 0 0m g,3m L。3.1.9 有机相型微孔滤膜:0.2 2m。3.2 试剂配制3.2.1 正己烷-二氯甲烷混合溶液(1+1) : 量取5 0 0m L正己烷, 加入二氯甲烷5 0 0m L, 混匀。3.2.2 乙腈饱和的正己烷: 量取8 0 0m L正己烷, 加入2 0 0m L乙腈, 振摇混匀后, 静置分层, 上层正己烷层即为乙腈饱和的正己烷。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 62 3.3 标准品多环芳烃( 萘、 苊烯、 苊、 芴、 菲、 蒽、 荧蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 荧蒽、 苯并k 荧蒽、 苯并a芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝有证标准溶液(2 0 0g/m L) , 于-1 8 下保存。警告 多环芳烃是已知的致癌、 致畸、 致突变的物质, 并且致癌性随着苯环数的增加而增加, 测定时应特别注意安全防护。测定应在通风柜中进行并戴手套, 尽量减少暴露。3.4 标准溶液配制3.4.1 多环芳烃标准中间液(10 0 0n g/m L) : 吸取多环芳烃标准溶液0.5m L, 用乙腈定容至1 0 0m L。在-1 8下保存。3.4.2 多环芳烃标准系列工作液: 分别吸取多环芳烃标准中间液0.1 0m L、0.5 0m L、1.0m L、2.0m L、5.0m L、1 0.0m L, 用乙腈定容至1 0 0m L, 得到质量浓度为1n g/m L、5n g/m L、1 0n g/m L、2 0n g/m L、5 0n g/m L、1 0 0n g/m L的标准系列工作液。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪, 带荧光检测器。4.2 电子天平: 感量为0.0 1g。4.3 冷冻离心机: 转速45 0 0r/m i n。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波振荡器。4.6 粉碎机。4.7 均质器。4.8 氮吹仪。4.9 旋转蒸发仪。5 分析步骤5.1 试样制备5.1.1 干样: 取样品约5 0 0g, 经粉碎机粉碎、 混匀, 分装于洁净盛样袋中, 密封标识后于-1 8 冷冻保存。5.1.2 湿样: 取样品约5 0 0g, 将其可食部分先切碎, 经均质器充分搅碎均匀, 分装于洁净盛样袋中, 密封标识后于-1 8冷冻保存。5.2 试样提取5.2.1 粮谷或水分少的食品称取2g 5g( 精确至0.0 1g) 试样于5 0m L具塞玻璃离心管A中, 按以下步骤处理:a) 加入1 0m L正己烷, 涡旋振荡3 0s后, 放入4 0水浴超声3 0m i n; 以45 0 0r/m i n离心5m i n,吸取上清液于玻璃离心管B中; 离心管A下层用1 0m L正己烷重复提取1次, 提取液合并于离心管B中, 氮吹( 温度控制在3 5以下) 除去溶剂, 吹至近干。b) 在离心管B中, 加入4m L乙腈, 涡旋混合3 0s, 再加入9 0 0m g硫酸镁、1 0 0m gP S A和1 0 0m gG B5 0 0 9.2 6 52 0 1 63 C1 8填料, 涡旋混合3 0s, 以45 0 0r/m i n离心3m i n, 取上清液于1 0m L玻璃刻度离心管C中,离心管B下层再用2m L乙腈重复提取1遍, 合并提取液于离心管C中, 氮吹蒸发溶剂至近1m L, 用乙腈定容至1m L, 混匀后, 过0.2 2m有机相型微孔滤膜, 制得试样待测液。5.2.2 水产品、 肉类和蔬菜等食品称取2g 5g( 精确至0.0 1g) 试样于5 0m L具塞玻璃离心管A中, 加1g5g硅藻土, 用玻棒搅匀,以下按5.2.1中a) 、b) 步骤处理, 制得试样待测液。5.2.3 含油脂高的食品或动植物油脂称取1g 4g( 精确至0.0 1g) 试样于5 0m L具塞玻璃离心管A中, 按以下步骤处理:a) 加入2 0m L乙腈和1 0m L乙腈饱和的正己烷, 涡旋振荡3 0s后, 放入4 0水浴超声3 0m i n;摇匀后, 以45 0 0r/m i n冷冻(-4) 离心5m i n, 吸取下层乙腈层于1 0 0m L鸡心瓶中, 离心管A中溶液用2 0m L乙腈重复提取1次, 提取液合并于鸡心瓶中,3 5 减压旋转蒸发至近干。加入5m L正己烷, 涡旋振荡3 0s溶解。b) 依次用5m L二氯甲烷和1 0m L正己烷活化弗罗里硅土固相萃取柱, 将a) 获得的5m L提取样液全部移入弗罗里硅土固相萃取柱, 再用5m L正己烷洗涤鸡心瓶并入柱中, 用8m L正己烷-二氯甲烷混合溶液洗脱, 收集所有流出物于2 0m L玻璃离心管B中。氮吹( 温度控制在3 5以下) 除去溶剂, 吹至近干, 加入0.5m L乙腈涡旋振荡1 0s, 继续氮吹至除尽正己烷-二氯甲烷, 用乙腈定容至1m L, 混匀后, 过0.2 2m有机相型微孔滤膜, 制得试样待测液。5.3 液相色谱参考条件a) 色谱柱:P AHC1 8反相键合固定相色谱柱, 柱长2 5 0mm, 内径4.6mm, 粒径5m, 或同等性能的色谱柱。b) 检测器: 荧光检测器。c) 流动相: 乙腈和水; 梯度洗脱程序见表1, 溶剂A为乙腈, 溶剂B为水。表1 反相C1 8柱梯度洗脱程序色谱时间m i n溶剂A%溶剂B%05 05 055 05 02 01 0 002 81 0 003 25 05 0 d) 流速:1.5m L/m i n。e) 检测波长: 激发和发射波长见表2。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 64 表2 多环芳烃的激发波长、 发射波长及其切换色谱时间检测参数序号化合物名称时间m i n激发波长n m发射波长n m1萘苊芴02 7 03 2 42菲蒽1 2.0 42 4 83 7 53荧蒽1 4.0 02 8 04 6 24芘苯并a 蒽1 4.8 52 7 03 8 55苯并b 荧蒽1 8.9 32 5 64 4 66苯并k 荧蒽苯并a 芘二苯并a,h 蒽苯并g,h,i 苝2 0.2 22 9 24 1 07茚并1,2,3 -c,d 芘2 3.3 32 7 45 0 7 f) 柱温:3 0。g) 进样量:2 0L。5.4 标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中, 测得相应的峰面积, 以标准工作液的质量浓度为横坐标、 以峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见图A.1。5.5 试样溶液的测定将试样待测液注入液相色谱仪中, 以保留时间定性, 测得相应的峰面积, 根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围, 可适当稀释后测定。5.6 空白试验空白试验除不加试样外, 采用与试样完全相同的分析步骤。6 分析结果的表述试样中多环芳烃的含量Xi按式(1) 计算:Xi=iV10 0 0m10 0 0(1) 式中:Xi 试样中多环芳烃的含量, 单位为微克每千克(g/k g) ;G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 65 i 依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃i的浓度, 单位为纳克每毫升(n g/m L) ;V 试样待测液最终定容体积, 单位为毫升(m L) ;10 0 0 单位转换;m 试样质量, 单位为克(g) 。含量大于等于1 0g/k g时, 保留三位有效数字; 含量小于1 0g/k g时, 保留两位有效数字。注:计算结果应扣除空白值。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2 0%。8 其他当试样取4g, 定容体积为1m L时, 本方法的检出限和定量限见表3。表3 液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限单位为微克每千克化合物蒽、 苯并a 蒽、 、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 苯并b 荧蒽、苯并k 荧蒽、 苯并a芘、 二苯并a,h 蒽、苯并g,h,i 苝菲萘荧蒽苊、 芴、 芘检出限0.3 32.03.30.50.6 5定量限1.06.01 01.52.0第二法 气相色谱-质谱法9 原理试样中的多环芳烃用有机溶剂提取, 提取液浓缩至近干, 用P S A(N-丙基乙二胺) 和C1 8固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化, 经浓缩定容后, 用气相色谱-质谱联用仪进行测定, 外标法定量。1 0 试剂和材料同第3章。1 1 仪器和设备1 1.1 气相色谱-质谱联用仪。1 1.2 其余同4.24.9。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 66 1 2 分析步骤1 2.1 试样制备同5.1。1 2.2 试样提取同5.2。1 2.3 空白试验空白试验除不加试样外, 采用与试验完全相同的分析步骤。1 2.4 气相色谱-质谱参考条件a) 色谱柱:D B - 5M S, 柱长3 0m, 内径0.2 5mm, 膜厚0.2 5m, 或同等性能的色谱柱。b) 柱温度程序: 初始温度9 0,以2 0/m i n升温至2 2 0, 再以5/m i n升温至3 2 0, 保持2m i n;c) 进样口温度:2 5 0;d) 色谱-质谱接口温度:2 8 0;e) 离子源温度:2 3 0;f) 载气: 氦气, 纯度9 9.9 9 9%,1.0m L/m i n;g) 电离方式:E I;h) 电离能量:7 0e V;i) 质量扫描范围:5 0a m u 4 5 0a m u;j) 测定方式: 选择离子监测方式;k) 进样方式: 不分流进样,2.0m i n后开阀;l) 进样量:1.0L;m) 溶剂延迟:3m i n。1 2.5 标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱-质谱仪中, 测得相应的峰面积, 以标准工作液的质量浓度为横坐标、 以峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。1 2.6 试样溶液的测定将试样待测液注入气相色谱-质谱仪中, 测得相应的峰面积, 根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围, 可适当稀释后测定。1 2.7 定性如果试样待测液中检出的色谱峰保留时间与标准工作溶液相一致, 且选择离子的相对丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差不大于允许相对偏差( 相对丰度5 0%, 允许1 0%偏差;5 0%相对丰度2 0%, 允许1 5%偏差;1 0%相对丰度2 0%, 允许2 0%偏差; 相对丰度1 0%, 允许5 0%偏差) , 则可判断试样中存在对应的被测物。在上述色谱条件下, 总离子流图参见图B.1。参考保留时间和特征离子见表4。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 67 表4 多环芳烃的参考保留时间和特征离子序号化合物名称保留时间m i n选择离子定量离子定性离子丰度比1萘4.0 11 2 86 4,1 0 21 0 0682苊烯5.8 21 5 26 3,7 61 0 051 73苊6.0 41 5 31 5 4,7 61 0 09 42 04芴6.6 61 6 61 6 5,8 21 0 09 295菲7.9 81 7 88 9,1 5 21 0 0996蒽8.0 51 7 88 9,1 5 21 0 01 077荧蒽1 0.3 12 0 21 0 1,2 0 01 0 01 32 28芘1 0.8 52 0 21 0 1,2 0 01 0 01 62 49苯并a 蒽1 4.5 02 2 81 1 4,2 2 61 0 01 22 31 01 4.6 42 2 81 1 4,2 2 61 0 01 03 61 1苯并b 荧蒽1 8.3 82 5 21 2 6,2 5 01 0 01 51 61 2苯并k 荧蒽1 8.4 82 5 21 2 6,2 5 01 0 01 62 01 3苯并a 芘1 9.5 12 5 21 2 6,2 5 01 0 01 62 21 4茚苯1,2,3 -c,d 芘2 3.3 52 7 61 3 8,2 7 71 0 01 92 21 5二苯并a,h 蒽2 3.4 72 7 81 3 8,2 7 61 0 01 23 01 6苯并g,h,i 苝2 4.1 42 7 61 3 8,2 7 71 0 02 42 31 3 分析结果的表述试样中多环芳烃的含量Xi按式(2) 计算:Xi=iV10 0 0m10 0 0(2) 式中:Xi 试样中多环芳烃的含量, 单位为微克每千克(g/k g) ;i 依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃i的浓度, 单位为纳克每毫升(n g/m L) ;V 试样待测液最终定容体积, 单位为毫升(m L) ;10 0 0 单位转换;m 试样质量, 单位为克(g) 。含量大于等于1 0g/k g时, 保留三位有效数字; 含量小于1 0g/k g时, 保留两位有效数字。注:计算结果应扣除空白值。1 4 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2 0%。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 68 1 5 其他当试样取4g, 定容体积为1m L时, 本方法的检出限和定量限见表5。表5 气相色谱-质谱法的多环芳烃检出限和定量限单位为微克每千克化合物名称苊、 苊烯、 蒽、 荧蒽、 、苯并b 荧蒽、 苯并k 荧蒽苯并a 蒽、苯并a芘、 苯并g,h,i 苝菲、 芘萘芴、 茚并1,2,3 -c,d芘、 二苯并a,h 蒽检出限0.8 50.61.56.71.1定量限2.61.84.52 03.3G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 69 附 录 A多环芳烃标准溶液的液相色谱图 多环芳烃标准溶液的液相色谱图见图A.1。 说明:1 萘; 2 苊; 3 芴; 4 菲;5 蒽;6 荧蒽;7 芘;8 苯并a 蒽;9 ;1 0 苯并b 荧蒽;1 1 苯并k 荧蒽;1 2 苯并a 芘;1 3 二苯并a,h 蒽;1 4 苯并g,h,i 苝;1 5 茚并1,2,3 -c,d 芘;1 6 波长改变。图A.1 多环芳烃标准溶液的液相色谱图G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 61 0 附 录 B多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图 多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图见图B.1。 说明:1 萘; 2 苊烯; 3 苊; 4 芴;5 菲; 6 蒽; 7 荧蒽; 8 芘;9 苯并a 蒽; 1 0 ; 1 1 苯并b 荧蒽;1 2 苯并k 荧蒽;1 3 苯并a 芘; 1 4 茚并1,2,3 -c,d 芘;1 5 二苯并a,h 蒽;1 6 苯并g,h,i 苝。图B.1 多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图