TORCH操作.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,美德声,TORCH,试剂盒操作演示,1.IgM,试验操作,1.,试剂盒从冰箱取出，室温下放置,20-30,分钟，恢复到常温。,2.,稀释样本,10,微升血清加入到,1ml,样本稀释液（,DILSPE,）中，稀释比例,1,：,101.,我是样本稀释液,3.,配制抗原抗体酶复合物,1.9ml,抗原稀释液,冻干抗原粉,抗原稀释液,酶结合物,100,微升酶结合物,混匀,混匀,复合物配制好要一个小时后才能用哦！最好在加样前配好,配好后没用完的复合物要放在,-20,保存,4.,制备洗涤液,我是洗液，根据用量把我进行,20,倍稀释就好了,5.,加样,按以下表格加入样本、阴阳性对照及标准品,1,2,3,4,A,空白,样本,3,样本,11,B,阴性对照,样本,4,C,阴性对照,样本,5,D,标准品,样本,6,E,标准品,样本,7,F,阳性对照,样本,8,G,样本,1,样本,9,H,样本,2,样本,10,不要把我们弄错哦,注：标准品用瓶身上标记的量的蒸馏水溶解，阴阳性对照不用稀释，直接可用,黄色的是阴性对照,标准品,绿色的是阳性对照,6.,第一次孵育,37,，孵育,60min,7.,洗 板,每个微孔用,350,洗液，洗,5,次,8.,加入抗原抗体酶结合物,除了空白孔外，,每个微孔内加入,100,微升之前配制的抗原抗体酶结合物。,9,第二次孵育,跟第一次孵育一样，还是,37,，孵育,60,分钟,10.,洗板,跟第一次洗板一样，还是每个微孔用,350,洗液，洗,5,次,11.,加入色原,/,底物,每一个微孔内加入,100,微升，室温下避光孵育,20,分钟,。,注：计时要从加第一个孔时开始哦！,12.,加入终止液,也是每孔加,100,微升,终止液可是硫酸哦，使用时要小心！,13.,酶标仪读数,在,450nm,和,620-630nm,波长处判读结果，阳性结果可做确认实验进行确认。,结果判读,质控组判断：符合以下判断表示试验过程可靠：,A1,为空白孔，其,OD,值,0.05,B1,C1,孔阴性对照,OD,平均值小于,0.15,；,CV,值,30%,标准品,S/Co,1.5,阳性对照,OD,值,0.75,结果判断：,Cut-off,值,=,阴性对照平均值,+0.25,S/Co,1.0,阴性结果,1.0,S/Co,1.2,灰区,S/Co,1.2,阳性结果,二、确认试验,1.,样本稀释、抗原抗体酶复合物（以下称,A,液）配制跟刚才是一样的。,唯一不同的是,酶复合物,的配制（以下称,B,液）,用抗原稀释液对酶结合物进行,20,倍稀释就行。,不需要再加入任何抗原物质！,2.,按下表加样,1,2,3,4,A,空白,样本,3,样本,7,B,阴性对照,样本,4,C,阴性对照,样本,4,D,样本,1,样本,5,E,样本,1,样本,5,F,样本,2,样本,6,G,样本,2,样本,6,H,样本,3,样本,7,3.,孵育、洗板,37,孵育,60,分钟，然后洗板。（同刚才的试验是一样的）,4.,按下表加入酶复合物,1,2,3,4,A,空白,样本,3,（加,B,液）,样本,7,（加,B,液）,B,阴性对照,(,加,A,液,),样本,4,（加,A,液）,C,阴性对照,(,加,A,液,),样本,4,（加,B,液）,D,样本,1,（加,A,液）,样本,5,（加,A,液）,E,样本,1,（加,B,液）,样本,5,（加,B,液）,F,样本,2,（加,A,液）,样本,6,（加,A,液）,G,样本,2,（加,B,液）,样本,6,（加,B,液）,H,样本,3,（加,A,液）,样本,7,（加,A,液）,剩下操作和刚才的试验一样,孵育,60min,洗板 加入底物,20min,加入终止液 酶标仪读数,结果解释,结果阴阳性判断同刚才试验也一样,样本,(,加,A,液,),样本,（加,B,液）,结果解释,+,+,假阳性,+,-,真阳性,-,-,（,+,）,检查实验步骤,三,IgG,试剂盒的操作,1.,试剂盒从冰箱取出，室温下放置,20-30,分钟，恢复到常温。,2.,稀释样本,10,微升血清加入到,1ml,样本稀释液（,DILSPE,）中，稀释比例,1,：,101.,我是样本稀释液,3.,加样,按下表加样 ，都为,100,微升（定性实验）,1,2,3,4,A,空白,样本,3,样本,11,B,CAL1,样本,4,C,CAL1,样本,5,D,CAL2,样本,6,E,CAL2,样本,7,F,CAL6,样本,8,G,样本,1,样本,9,H,样本,2,样本,10,六瓶不同浓度的标准品，无需稀释，直接可用。,定性试验只用,1,、,2,和,6,号标准品就行,4.,孵育,37,，孵育,60min,5.,洗板,每个微孔用,350,洗液，洗,5,次,6.,加入酶标二抗,除了空白孔外，其他孔内都加入,100,微升,直接可用，不需要任何稀释,7.,孵育,37,，孵育,60min,8.,洗板,每个微孔用,350,洗液，洗,5,次,9.,加入色原,/,底物,每一个微孔内加入,100,微升，室温下避光孵育,20,分钟,。,注：计时要从加第一个孔时开始哦！,10.,加入终止液,也是每孔加,100,微升,终止液可是硫酸哦，使用时要小心！,11.,酶标仪读数,在,450nm,和,620-630nm,波长处判读结果,12.,结果判读,质控组判断：符合以下判断表示试验过程可靠,：,A1,孔为空白孔，其,450nm,处,OD,值,0.100(,弓形体、巨细胞、风疹,),；单疱,1,、单疱,2,、单疱,1+2,试剂盒,A1,孔,0D,值,0.05,标准品,1,经空白校正后，,OD,值,0.15;CV,值,标准品,1,的,OD,值,+0.100,标准品,6,的,OD,值,1.000,结果判断：,定性检测：样本中抗体吸光度低于标准品,2,的吸光度时，为阴性结果；反之，为阳性结果。标准品,2,（,50IU/ML,）被美国国家临床实验标准委员会（,NCCLS,）认为该浓度是,IgG,抗体提供有效保护防止病毒二次感染的最低浓度。,大功告成！,谢谢,