细胞生物学第2次实验.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,医学细胞生物学实验,细胞生物学与遗传学教研室,遵义医学院,2009,年,9,月研制,第二次实验,细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示,细胞内,DNA,和,RNA,的原位显示,实验目的,1.,掌握酸、碱性蛋白以及,DNA,和,RNA,在细胞内的分布情况；,2.,了解酸、碱性蛋白以及,DNA,和,RNA,显色反应的原理和方法。,实验原理,由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性,基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质,带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则,为碱性蛋白。可用不同,pH,值的固绿染色，,即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。,核酸的存在会影响实验结果,用三氯醋酸处理,甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内,DNA,和,RNA,的分布部位。,实验用品,95%,乙醇,三氯醋酸,甲基绿,-,派洛宁,0.1%,酸性固绿,0.1%,碱性固绿,操作流程,暴露,胸腔,双毁髓法,处死,取心脏血,晾干,制,血涂片,固定,10min,90,25min,洗涤,1,min,反复冲洗,三氯醋酸,95%,乙醇,0.1%,酸性固绿,5min,0.1%,碱性固绿,30min,晾干,镜检,冲洗,5,秒,晾,干,洗,涤,甲基绿派洛宁,5min,染,色,冲洗,5,秒,结果观察,酸性蛋白,碱性蛋白,DNA,和,RNA,的显示,使用三氯醋酸处理的目的,两人一组，每组制三张血涂片,注意事项,请回答细胞化学法在本次实验中的应用。,通过本次实验学到哪些基本操作技能？,请描述本次实验的显微观察结果。,作业,小结,评价本次实验的得失,本次实验需要巩固的概念,细胞化学法,本次实验需要掌握的实验技能,1.,双毁髓处死蟾蜍的方法,2.,血涂片制作方法,3.,染色的规范操作方法,4.,洗涤方法（流水冲洗）,5.,正确的镜检方法（显微观察技术）,欢迎同学们提问！,