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,*,培养,考纲,题组1,2,3,4,分离,计数,考 纲 原 生 态,1.微生物分离和培养,2.某种微生物数量测定,3.培养基对微生物选择作用,1,1/30,考点一微生物试验室培养,1培养基,(1)概念：人们按照微生物对_不一样需求，配制出供其生长繁殖_。,营养物质,营养物质,水、碳源、氮源、无机盐,pH,氧气,固体培养基,2,2/30,分类,标准,培养基种类,特点,用途,依据,物理,性质,液体培养基,不加凝固剂,工业生产,半固体,培养基,加凝固剂，如琼脂,观察微生物运动、分类、判定,固体培养基,加凝固剂，如琼脂,微生物分离、判定、活菌计数,依据,用途,选择培养基,培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长,培养、,分离出特定微生物,判别培养基,依据微生物代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品,判别不一样种类微生物,微生物试验室培养基础知识 1培养基,3,3/30,【练习巩固】(全国卷改造)某细菌固体培养基组成成份是KH,2,PO,4,、Na,2,HPO,4,、MgSO,4,、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是_，碳源是_，氮源是_。已知只有能合成脲酶细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于_培养基。从同化作用类型角度看，用该培养基培养细菌属于_。,异养型,琼脂,葡萄糖,尿素,选择,4,4/30,煮沸消毒法,灼烧灭菌,条件,结果,惯用方法,消毒,灭菌,较为温和物理或化学方法,仅杀死,物体表面或内部对人体有害,部分微生物,(,不包含芽孢和孢子,),煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药品消毒法,强烈理化原因,杀死,物体内外,全部微生物,，,包含芽孢和孢子,灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,2无菌技术,5,5/30,考点一微生物试验室培养,6,6/30,考点一微生物试验室培养,3纯化大肠杆菌原理与方法,(1)原理：,在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，,使其长成单个菌落，,这个菌落就是纯化细菌菌落。,7,7/30,比较,平板划线法,稀释涂布平板法,原理,优点,缺点,适用范围,考点一微生物试验室培养,经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基上。在数次划线后培养，能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体，即菌落,将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不一样稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落,能够观察菌落特征，对混合菌进行分离,能够计数，能够观察菌落特征,不能计数,吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，轻易蔓延,适合用于好氧菌,适合用于厌氧菌和兼性厌氧菌,(2)纯化微生物接种方法：,8,8/30,考点一微生物试验室培养,平板划线法纯化大肠杆菌时不一样阶段灼烧接种环目标不一样,(1)第一次操作：,杀死接种环上原有微生物。,(2)每次划线之前：,杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线菌种直接起源于上次划线末端。,(3)划线结束后：,杀死接种环上残余菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,9,9/30,考点一微生物试验室培养,(1)培养基分装到培养皿后进行灭菌。(江苏)(),(2)转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线。(江苏)(),(3)接种后培养皿须放在光照培养箱中培养。(江苏)(),(4)培养过程中每隔一周观察一次。(江苏)(),(5)在琼脂固体培养基上长出单个菌落含有各种细菌。,(重庆)(),(6)在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长，向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌生长。(重庆)(),(7)对新配制培养基灭菌时所用设备是高压蒸汽灭菌锅。试验前需对超净工作台进行消毒处理。(山东)(),(8)用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板。(安徽)(),10,10/30,D,题组一微生物培养,1(北京市东城区联考)细菌需要从外界吸收营养物质并经过代谢来维持正常生长和繁殖。以下与此相关说法正确是 (),A乳酸菌与硝化细菌所利用碳源是相同,B氮源不可能作为细菌能源物质,C琼脂是细菌生长和繁殖中不可缺乏一个物质,D以尿素为唯一氮源培养基上长出不都是尿素分解菌,11,11/30,题组一微生物培养,2伴随科技发展，微生物在生产活动中得到了广泛应用。以下关于微生物培养叙述，正确是(),A青霉素就是抗生素，在青霉菌培养过程中不用严格灭菌,B培养基中加入琼脂能够作为微生物碳源,C为了防止污染，在微生物培养过程中，操作人员手必须经过严格灭菌,D在菌种选育过程中能够利用人工诱变等伎俩,D,12,12/30,成份,含量,成份,含量,NaNO,3,3 g,FeSO,4,0.01 g,K,2,HPO,4,1 g,(CH,2,O),30 g,琼脂,15 g,H,2,O,1 000 mL,MgSO,4,7H,2,O,0.5 g,青霉素,0.1万单位,题组一微生物培养,3下表所表示为某微生物培养基配方，相关叙述错误是,A.依物理性质划分，该培养基属于固体培养基；依用途划分，该培养基属于选择培养基,B由培养基原料可知，所培养微生物同化作用类型是异养型，培养微生物能够是酵母菌或毛霉,C本培养基中青霉素添加满足了微生物生长对特殊营养物质要求,D若用该培养基分离能分解尿素细菌，应除去青霉素和NaNO,3,，并应加入尿素,13,13/30,题组一微生物培养,1筛选微生物原理,人为提供有利于目标菌株生长条件(包含营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其它微生物生长。,所以，能够经过配制选择培养基、控制培养条件等选择目标微生物。,2选择培养基设计原理和功效,依据某种微生物特殊营养要求或其对一些物理、化学原因(如温度、pH等)抗性而设计培养基为选择培养基。,这类培养基能使混合菌株中目标菌株变为优势菌，从而提升该菌筛选效率。,14,14/30,题组一微生物培养,3选择培养基应用实例,序号,改变条件,分离目标菌,1,2,3,4,5,加入青霉素,加入高浓度食盐,缺乏氮源,石油作为唯一碳源,高温环境,酵母菌和霉菌,金黄色葡萄球菌,固氮微生物,分解石油微生物,耐高温微生物,15,15/30,题组二微生物纯化方法分析,4相关平板划线操作正确是 (),A使用已灭菌接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌,B打开含菌种试管后要经过火焰灭菌，取出菌种后要马上塞上棉塞,C将沾有菌种接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线即可,D最终将平板倒置，放入培养箱中培养,D,16,16/30,题组二微生物纯化方法分析,5苯酚是工业生产排放有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚微生物。某工厂产生废水中含有苯酚，为了降解废水中苯酚，研究人员从土壤中筛选取得了能降解利用苯酚细菌菌株筛选主要步骤以下列图所表示，为土壤样品。以下相关叙述错误是(),A图中,培养目标菌株选择培养基中应加入苯酚作为碳源,B假如要测定中活细菌数量，常采取稀释涂布平板法,C若图中为对照试验，则其中应以苯酚作为唯一碳源,D使用平板划线法能够在上取得单菌落,17,17/30,题组二微生物纯化方法分析,微生物纯化三种路径,(1)单菌落挑取法：,利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体,平板培养基表面，直接依据微生物菌落特征利用单菌落挑取方法取得目标微生物。,(2)选择培养法：,利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获,得目标微生物。,(3)判定培养法：,利用判别培养基使目标微生物菌落展现特有特,征，然后筛选目标微生物。,18,18/30,考点二微生物分离与数量测定,1土壤中分解尿素细菌分离与计数,(1)分离原理,土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_，这种物质在把尿素分解成无机物过程中起到_作用。,(2)统计菌落数目,统计样品中活菌普通用_法。,(3)试验流程,土壤取样,_微生物培养与观察细菌_。,脲酶,催化,稀释涂布平板,样品稀释,计数,19,19/30,考点二微生物分离与数量测定,2分解纤维素微生物分离,(1)纤维素酶,组成：纤维素酶是一个_，普通认为它最少包含三种组分，即_。,作用：,葡萄糖,复合酶,C,1,酶、C,X,酶和葡萄糖苷酶,20,20/30,(2)纤维素分解菌筛选,原理：,纤维素分解菌,筛选方法：_染色法，即经过是否产生_来筛选纤维素分解菌。,培养基：以_为唯一碳源选择培养基。,红色复合物,透明圈,刚果红,透明圈,纤维素,考点二微生物分离与数量测定,21,21/30,试验流程：,土壤取样：富含_环境,选择培养：,用_培养，以增加纤维素分解菌浓度,_：制备系列稀释液,涂布平板：将样品涂布到判别纤维素分解菌培养基上,挑选产生_菌落,纤维素,选择培养基,梯度稀释,透明圈,考点二微生物分离与数量测定,22,22/30,考点二微生物分离与数量测定,(1)分离微生物所用选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。,(2)平板划线法只适适用于微生物提纯，不适合进行计数，而且在最终一次划线末端处菌种最纯。,23,23/30,考点二微生物分离与数量测定,(1)要从土壤中分离获取纤维素分解菌，应选取以纤维素为唯一碳源选择培养基。(太原五中月考)(),(2)在纤维素分解菌培养过程中，对培养基和接种环常采取灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌。,(许昌二次调研)(),(3)透明圈是刚果红与纤维素形成复合物，可依据是否出现透明圈来判断有没有纤维素分解菌。(山东改编)(),(4)测定培养液中微生物数量，可选取显微镜直接计数法。(山东)(),(5)在,“检测土壤中细菌总数”试验中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上试验组平板进行计数。(安徽)(),(6)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌个数，要想使所得预计值更靠近实际值，除应严格操作、屡次重复外，还应确保待测样品稀释百分比适当。(高考宁夏卷)(),24,24/30,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌筛选分析,1欲从土壤中分离出能分解尿素细菌，以下试验操作中，不正确是 (),A将土壤用无菌水进行一系列梯度稀释,B同一浓度土壤稀释液应最少涂布三个平板,C可将未接种培养基在相同条件下培养作为对照,D用加入刚果红指示剂培养基可筛选出分解尿素细菌,D,25,25/30,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌筛选分析,2(泰州质检)利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，生产过程中可采取微生物将秸秆水解或用酶水解，其主要技术流程以下列图所表示，以下相关说法错误是,A可用刚果红染色法筛选过程,所需纤维素分解菌,B过程加入纤维素酶是葡萄糖苷酶,C酒精发酵接种酵母菌需在无氧条件下发酵,D酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌,26,26/30,项目,土壤中分解尿素细菌分离,分解纤维素微生物分离,方法,使用以尿素为唯一氮源选择培养基进行培养,利用富含纤维素选择培养基进行培养,原理,土壤中不能分解尿素微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用,因为培养基中含有丰富纤维素，所以能够分解纤维素微生物含有更多生存机会而大量繁殖,特有代谢过程,题组三对分离分解尿素细菌及纤维素分解菌筛选分析,筛选微生物两种方法比较,27,27/30,题组四微生物计数分析,D,3(北京市海淀区高三期中)以下关于,“检测土壤中细菌总数”试验操作叙述中，不正确是 (),A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板,B取10,4,、10,5,、10,6,倍土壤稀释液和无菌水各0.1 ml涂布不一样平板,C将试验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时,D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上平板进行计数,28,28/30,题组四微生物计数分析,4(高考新课标全国卷)为了调查某河流水质情况，某研究小组测定了该河流水样中细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答以下问题：,(1)该小组采取稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后空白平板先行培养了一段时间，这么做目标是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中活菌数为_。,(2)该小组采取平板划线法分离水样中细菌。操作时，接种环经过_灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线末端开始划线。这么做目标是_。,检测培养基平板灭菌是否合格,3.810,7,灼烧,将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落,29,29/30,题组四微生物计数分析,(3)示意图A和图B中，_表示是用稀释涂布平板法接种培养后得到结果。,(4)该小组将得到菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发觉：振荡培养细菌比静置培养细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提升培养液中_含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提升_利用率。,B,溶解氧,营养物质,30,30/30,
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