实验4 离体蛙心灌流.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,蟾蜍离体心脏灌流,实验四,学习离体蛙心灌流方法,观察,K,+,、,Ca,2+,及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。,实验目的,实验原理,心肌具有自动节律性、传导性和兴奋性。,离体和脱离神经支配的动物心脏,保持在适当的环境中,在一定的时间内,仍然能够有节律性地产生兴奋和收缩。,利用心肌细胞的这一特性,可用来制作离体心脏模型,来观察药物和电解质水平对心肌活动的影响。,离体蛙心循环回路,静脉插管,动脉插管,橡胶连接管,实验材料及仪器设备,蟾蜍,蛙用手术器械，蛙心套管，蛙心夹，张力换能器，受滴,-,刺激两用电极,RM6240,系统，任氏液，,2%CaCl,2,，,2%KCl,，,0.01%,肾上腺素，,0.01%,乙酰胆碱。,实验内容与操作步骤,（一）离体蛙心灌流制作,1.,破坏蟾蜍脑和脊髓，暴露心脏，,剪除心包膜和肝系膜（不要损伤血管）,2.,第,1,次结扎：双结扎右主动脉,第,1,次结扎：双结扎右主动脉,左主动脉,右主动脉,实验内容与操作步骤,3.,第,2,次结扎,：结扎左右肺静脉、前腔静脉,（关键步骤：结扎时远离静脉窦）,线头从左主动脉下面穿线，穿行于右主动脉下方；然后用眼科镊从右侧穿过左肝静脉、后腔静脉、右肝静脉下方，夹住右主动脉下方的线头拉出；然后,一个同学将心脏提起,，另一个同学进行结扎。,第,2,次结扎：结扎左右肺静脉、前腔静脉,4.,第三次结扎：,在左右肝静脉和后腔静脉下穿线在右肝静脉（或左肝静脉、或后腔静脉）上用眼科剪剪一斜口用加有任氏液的蛙心套管静脉插管插入剪口结扎固定（远离静脉窦）,然后马上用任氏液灌入静脉插管中，吸管吹吸，防止凝血，可见心脏膨大，然后红色逐渐变浅。,第,3,次结扎：左,右肝静脉,后腔静脉,5.,第四次结扎,：,在左主动脉下穿线在动脉上剪一斜口蛙心套管动脉插管插入动脉（不要插入动脉球内）结扎固定,在静脉插管中灌入任氏液，可见液体从动脉插管端泵出，,并且直至心脏颜色变成黄白浅色，血液全部泵出后进行离体。,6.,蛙心离体：,剪断右主动脉,剪断左主动脉,剪断静脉插管,再将多余的长线头剪断,提起第二次结扎的线头、,动脉插管、静脉插管及心脏 小心将蛙心离体。,将与蛙心套管静脉插管和动脉插管的离体蛙心固定在铁架台上,离体蛙心循环回路,静脉插管,动脉插管,橡胶连接管,实验步骤,7.,用蛙心夹在心室舒张时夹住心尖约,1mm,，用丝线将蛙心夹与张力换能器相连。,8.,在动脉套管与静脉套管之间放置记滴电极，记录滴数。,受滴,-,刺激,-,两用电极,蛙心灌流装置安装,通道,1,受滴信号线,RM6240,记录系统,点击,“,实验,”,菜单，选择,“,蛙心灌流,”,，系统进入信号记录状态。,仪器参数：通道，时间常数：直流；滤波频率,10Hz,；灵敏度,3g,，采样频率,400Hz,，扫描速度,1s/div,。,实验项目,1.,正常蛙心收缩曲线和每搏心输出量记滴（最大收缩力、心率、心输出量）。,2.,向套管的任氏液中加,2%CaCl,2,1,滴，观察并记录心搏曲线的变化。,实验项目,3.,当心脏恢复,正常,时，向套管内加入,2,滴,2%KCl,溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。,4.,当心脏恢复,正常,时，向套管内加入,1,滴,0.01%,肾上腺素溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。,5.,当心脏恢复,正常,时，向套管内加入,1,滴,0.01%,乙酰胆碱溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。,实验要求,每一项实验记录出一段有代表性的曲线，包括连续三部分,:,(1),正常对照,(2),加药后的反应,(3),更换灌流液后恢复至,正常,状态。,实验项目,心收缩力,心输出量,最大,收缩力（,g,）,波谷值（,g,）,心率,记录滴数（滴）,心输出量（滴,/,分）,每搏输出量（滴,/,搏）,1,正常曲线,2,2%CaCl,2,3,更换任氏液,4,2%KCl,注意事项,每次换液时液面应保持,一定的高度,。,每次换液或滴加试剂时应,打标记,。,每个试剂瓶的,滴管不能混淆,。,心脏表面,随时滴加任氏液,。,待心跳恢复,正常,后进行下一项实验。,同学最容易犯的错误是第二次结扎,:,要让一个同学将蛙心提起来，然后另一个同学进行结扎，以免将蛙的静脉窦结扎进去。,做插管时，静脉插管不能太深以免插进静脉窦中；动脉插管不能太深以免插入动脉瓣中。,静脉插管弄完后，一定马上要灌任氏液，防止凝血，可见心脏膨大，心脏红色逐渐变浅，；插管做完后，要看到任氏可从动脉插管泵出。,注意事项,思考题,离体心脏的活动受那些因素影响，其作用机制如何，在体心脏的活动主要受那些因素调节？,