大黄素的介绍.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大黄素,大黄素的理化性质,为橙色针状结晶,(,乙醇或,12,毫米下减压升华,),熔点,256,257,。具有蒽醌的特殊反应。几乎不溶于水，溶于,乙,醇,及碱溶液，溶解度,25(g/100ml,饱和液,),：乙醚,0.140,、,氯仿,0.071,、苯,0.041,、四氯化碳,0.01,。溶于苛性碱水,溶液、碳酸钠水溶液，氨溶液中显樱红色,。,一、微乳液相色谱法,方 法：采用微乳液相色谱法。以 微 乳为 流动 相，通 过 对影 响分 离度 和保 留 时间的因素进 行考 察，优化最佳微乳体系 组 成为,2.5,（,W/V,）十二 烷基 硫酸钠,-0.1,（,V/V,）正 辛烷,-8.0,（,V/V,）正丁醇,-0.5,（,V/V,）三 乙胺（磷 酸调,pH,值至,3.0,）；色 谱柱为,Hypersil,ODS2,（,250 mm4.6 mm,，,5m,），柱温 为,28,，流速为,1,mLmin,，检测波长为,254 nm,。,实验步骤,1,混合对照品溶液制备,取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品各适量，精密称定，置于,50mL,容量瓶中，加适量甲醇超声溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。临用前用,0.45m,滤膜过滤，取续滤液进样。,2,供试品溶液制备,取干燥后的各大黄药材粉末（过四号筛），精密称定，置具塞烧瓶中，精密加入甲醇,25mL,，称定重量，加热回流,1h,，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过。精密量取续滤液,5mL,，置烧瓶中，挥去溶剂，加,8,盐酸溶液,10mL,，超声使溶解，再加氯仿,10mL,，加热回流,1h,，放冷，转移至分液漏斗中，用少量氯仿分次洗涤烧瓶，洗液并入分液，分取氯仿层，酸液再用氯仿提取,3,次，每次,10mL,，合并氯仿液，挥去溶剂，残渣加少量甲醇使溶解，定量转移至,10mL,容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。临用前用,0.45m,滤膜过滤，取续滤液进样。,3,微乳流动相的制备,将,SDS,、正丁醇、正辛烷及含,0.5,三乙胺的水溶液按顺序，超声,15min,，即得透明稳定的微乳，用磷酸调,pH,值至,3.0,，经,0.45m,滤膜过滤，备用。,4,色谱条件,色谱 柱：,Hypersil,ODS2,（,250 mm4.6 mm,，,5,m,）；流速：,1mLmin,；柱温：,28,；检测波长：,254 nm,；流动相：,2.5,W,/,V,）,SDS-0.1,（,V,/,V,）正辛 烷,-8.0,（,V,/,V,）正丁 醇,-0.5,（,V,/,V,）三乙 胺（磷酸调,pH,值至,3.0,）；进样量：,15,L,。色谱见图,1,。,0 5 10 15 20 25 30 35 min -,微乳液相色谱法同时测定大黄中,5,种蒽醌类衍生物的含量,实验步骤,微乳液相色谱法的特点,微乳液相色谱（,MELC,）法是一项液相色谱新 技术 ，它 不仅存 在常规 色谱的分 离机制，还存在 微乳液滴内 外相 之 间的 分配。,其与 常规 高 效液 相色 谱（,HPLC,）法相比，具有分 离效率高和分离速度快的优越性，可用于复杂样品的分离；血 清、尿液经 过简单的稀释 后便可以直 进样分析，无需预处理；在梯度洗脱和低紫外波 长（,190 nm,）检测 方面也有一 定的优势对于,MELC,法的应 用，主 要涉及化学药品中 多种成 分、药物制 剂以及 生物样 品的分析，而用于中药成 分的分析 较少。笔 者采用,MELC,法同 时测定了 大黄中,5,种蒽 醌类 衍生 物的 含量，方法 简便、准确、可靠，取得 了满 意结果。,方法：采用,MDS-8,型多通量密闭微波化学工作站，以甲醇为溶剂，,160,微波萃取制备供试品溶液；,UPLC,分析条件为,WatersAcquityHClassUPLC,系统，,BEHC,色谱柱（,2.1mm,100mm,，,1.7,m,）乙腈水为流动相梯度洗脱 流速,0.5mL,min,1,柱温,30,检测波长,226nm,。,二、微波萃取,-UPLC,法,1,混合对照品储备溶液的制备,分别取虎杖苷、白藜芦醇、蒽苷,B,、大黄素和大黄素甲醚对照品适量，精密称定置于同一,10mL,量瓶中，加甲醇溶解并定容，混匀，制成质量浓度分别为,0.444,，,0.240,，,0.180,，,0.403,，,0.044gL,1,的溶液 作为混合对照品储备液。,2,供试品溶液的制备,取本品粉末（过,3,号筛）,0.1g,，精密称定置,50mL,微波萃取罐中，精密加入,25mL,甲醇，,160,微波萃取,10min,，放冷，用甲醇补足失重，滤过，取续滤液用微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。,3,标准曲线,：,将混合对照品储备液分别用甲醇稀释至,2,，,4,，,8,，,16,，,32,，,64,倍，精密吸取上述稀释,6,份，每份约,0.1g,，精密称定，分别照供试品溶液制液及储备液各,1L,进样，测定。分别以峰面积,A,为纵坐标，以进样浓度,X,（,gL,）为横坐标绘制工作曲线，计算回归方程。,_,微波萃取,-UPLC,同时测定虎杖中,5,种主要活性成分的含量,实验步骤,本研究的,UPLC,测定数据与文献中对此,5,种活性成分的,HPLC,含量测定结果 比较基本一致，但 分析时间从,62min,以上缩短到,12min,以内大大提高了工作效率；研究中对不同提取方式进行了比较,按上述色谱条件及样品制备方法，发现微波萃取,10min,对各成分的提取率明显高于超声,30min,，进一步提高了分析效率。因此,建立的虎杖多成分同时测定的微波萃取特别适用于中药复杂体系的成分分析。,微波萃取,-UPLC,的特点,三、高效毛细管电泳法,建立高 效毛细管电泳（,HPCE,）法对三黄油擦剂中 的有效成分大黄素和大黄酚进行 含量测定。,方 法：采 用石英毛细管柱（,65 cm 55,m,，有效长度,50 cm,），缓冲体系为,10,mmolL,硼砂,30,mmolL,SDS,10%,乙醇，,pH,值为,9,8,，分离电压,30 kV,，检 测波 长,254 nm,。,结 果：大黄 素和 大黄 酚在,20 min,内得 到很 好的 分离，分 别在,0,124,2,470 g L,、,0,104,2,080,gL,线性关 系良好，平均回收 率分别为,99,2%,、,98,6%,。,高 效 毛 细 管 电 泳 法 特 点,高效液相色谱法用于测定 蒽醌类成分，但,HPLC,法的主 要缺点是 需要对样品进行预处理，操作较为烦琐。,本研 究采用高 效毛细管电泳（,HPCE,）法对大黄中的,2,种蒽醌类成分大黄素和 大黄酚同时进行定 量分析 该 法具有 对样 品处理 要求 低、分离 效能高等特点,谢谢！,