实验一、蛋白质的等电点测定.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验须知,实验记录,实验记录是在进行科学研究过程中积累资料、经验的一项重要工作，每一次实验过程中都应当养成良好的习惯，及时做好记录和总结。,要求：,真实性 原始性 完整性 条理性,实验报告的书写,实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。完整的实验报告应包括：实验题目、实验日期、实验目的、实验原理、实验仪器和试剂、操作步骤、实验结果与分析、实验结论等项目。,实验室规则,上实验课时不迟到，不早退，自觉遵守课堂纪律，上课时应保持实验室安静，不得大声说笑。进入实验室必须穿实验工作服。,实验课前认真预习有关课程，明确实验目的、要求和注意事项，熟悉实验内容和方法步骤。,实验时应遵守实验操作规程，按教师要求，认真操作。要细心观察实验现象，认真记录实验数据，作出结论，最后写出实验报告。,要爱护公物，小心使用仪器和实验设备，注意节约用水、电、药品和器材。,所有固体废弃物如：废纸、固体废弃物、沉淀物等必须弃于垃圾桶中。强酸、强碱必须倒入玻璃器皿中，用水稀释后倒入水槽。,实验室和实验台应保持整洁。公用试剂用毕，立即盖严并还原。实验完毕，仪器洗净放好。,在实验过程中必须遵守操作规程，不得随意乱动乱用。如不会使用，应请教指导教师。凡因乱动乱用违反操作规程而损坏仪器设备，造成事故者，按有关规定进行赔偿和处理。,严禁在实验室内吃饭、吸烟、扔废物和随地吐痰，实验结束离开实验室之前，关好窗户，切断电源，水源，确保安全。,5,实验室安全,使用玻璃、金属器材时注意防止割伤及机械创伤。如发生意外，找实验室工作人员(少量急用药物备用)。,浓酸、浓碱腐蚀性很强，必须极为小心地操作。用吸量管量取这些试剂(包括有毒物)时，必须使用橡皮球，绝对不能用口吸取。,微生物、动物的组织、细胞培养物、血液和分泌物 都可能存在细菌和病毒感染的潜在危害，处理生物材料必需小心谨慎，做完实验必须用肥皂、洗涤剂或消毒液洗手。,被污染的物品，必须进行高压消毒或烧成灰烬。,被污染的玻璃用具应在清洗和高压消毒前立即浸泡在适当的消毒液中。,试剂使用规则,使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。,取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。,取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干净烧杯中，再用干净吸管吸取标准液，以免污染瓶中的标准液体。,使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。,使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。,吸量管的使用,正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。,取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。,调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。,放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁,15,秒。,吸量管上端标有,“,吹,”,字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为,“,吹出式,”,，未标,“,吹,”,字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体。,(0.5ml,以下的都要吹）,吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。,吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净，晾干备用。,吸量管的使用注意事项,玻璃器皿的一般清洗方法,一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自来水反复冲洗，最后用蒸馏水淋洗,2,3,次。干燥备用。,容量分析仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，待晾干后，再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水淋洗,2,3,次，干燥备用。,比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布,(,纸,),擦拭。,上述所有玻璃器材洗净,(,以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准,),后，根据需要晾干或烘干。,实验一、蛋白质的两性性质和等电点测定,一、实验目的,1,、了解蛋白质的两性解离性质,2,、学习测定蛋白质等电点的一种方法,(,沉淀法,),二、实验原理,蛋白质是,两性电解质,。在蛋白质溶液中存在下列平衡：,蛋白质分子的解离状态和解离程度受,溶液的酸碱度,影响。,常用方法：利用,溴甲酚绿指示剂,的变色来观察蛋白质的两性性质。,3.8,5.6,当溶液的,pH,为一定值时，蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为,0,，此溶液的,pH,值为该,蛋白质的等电点,。,不同蛋白质具有各自特定的等电点，与该蛋白质的组成结构有关。,在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用性质的变化测定各种蛋白质的等电点。,常用方法,：观察蛋白溶液在不同,pH,值下的溶解度。,问题：蛋白质等电点的测定还有哪些方法,?,本实验通过,观察不同,pH,溶液中酪蛋白的溶解度来测定其等电点,。,用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同,pH,值的缓冲液。向各缓冲溶液中加入酪蛋白后，,沉淀出现最多的缓冲液的,pH,值即为酪蛋白的等电点,。,三、试剂仪器和试剂,1,、仪器设备,试管及试管架,滴管,吸量管,容量瓶,0.5%,酪蛋白溶液,0.01%溴甲基,酚绿指示剂,0.10,mol/L,盐酸,溶液,0.10,mol/L,氢氧化钠,溶液,1.00 mo,l/L,醋酸溶液,0.10 mol/L,醋酸溶液,0.01 mol/L,醋酸溶液,2,、试剂,四、实验步骤与结果,1,、观察蛋白质的两性反应,步骤,操作,现象,解释结论,1,取试管,1,，加,20,滴,0.5%,酪蛋白溶液和,5-7,滴,0.01%,溴甲酚绿指示剂，混匀,观察溶液颜色和沉淀,结合思考,1,，解释,2,缓慢滴加,0.1mol/L,盐酸溶液，随滴随摇，直至大量沉淀发生,观察,溶液颜色和沉淀,结合思考,2,，解释,3,继续滴加,0.1mol/L,盐酸溶液,观察,溶液颜色和沉淀,结合思考,1,，解释,4,滴加,0.1mol/L,氢氧化钠,溶液进行中和，直至沉淀出现,观察溶液颜色和沉淀,结合思考,2,，解释,5,继续滴加,0.1mol/L,氢氧化钠,溶液,观察溶液颜色和沉淀,结合思考,1,，解释,（,2,）观察其混浊度。静置,15,分钟后，再观察其混浊度。结果可用,“,+,、,+,、,+,”,表示浑浊度，,最混浊的一管,pH,即接近酪蛋白的等电点,。,（,1,）取,5,支试管，按书中表格分别加入各试剂，混匀。,2,、测定酪蛋白等电点,实验结果：,按照实验报告要求计算实验结果。,分析：,通过操作本次实验，探讨影响本实验结果的主要影响因素。,分析实验成功或失败的主要原因。,五、实验结果与分析,六、实验结论,酪蛋白的等电点接近多少？,1,、书上,p202,，三道思考题？,2,、蛋白质沉淀测定常用的方法有哪些？,七、思考题,