高中生物-2.6《实验六-α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》课件14-浙科版选修1.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,知识结构,二、,a-,淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测,一、固定化技术基础知识,一、,固定化技术基础知识,固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括吸附法、包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）。,包埋法,化学结合法,物理吸附法,细胞多采用包埋法固定,酶更适合采用化学结合和物理吸附法,固定化,反应方式,不管是固相柱还是固相悬浮体，回收后，在一定条件下贮存，还可以利用。,1.,使底物溶液通过装有固相酶的柱，柱留出液即为酶催化的产物。,2.,有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中，一定时间后溶液即成酶催化的产物。,实验原理,-,淀粉酶,-,淀粉酶,糖化淀粉酶,淀,粉,糊,精,麦,芽,糖,葡,萄,糖,二、,-,淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,运用吸附法将,-,淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的,-,淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入,KI-I,2,指示液后呈红色，表明水解产物糊精生产。,固定化装置层析柱,实验材料制备,5mmol/L KI-I,2,溶液,称取,0.127g,碘,和,0.83g,碘化钾,。加蒸馏水,100ml,。,a-,淀粉酶的固定化,在烧杯中将,5mg,a-,淀粉酶溶,于,4ml,蒸馏水中。再加入,5g,石英砂,，不时搅拌，,30,分钟后装入层析柱中。,用,10,倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为,1ml/min,。,可溶性淀粉溶液,取,50mg,可溶性淀粉,溶于,100ml,热水中，搅拌均匀。,实验步骤,2.,试验后，用,10,倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在,4,冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。,1.,将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已,0.3mL/min,的流速过柱。在流出,5mL,后接收,2mL,流出液，加入,1-2,滴,KI-I,2,溶液，观察颜色。用水稀释,1,倍后再观察颜色。,HST,层析住,实验结果,1 2 3 4,1,、,2mL,水,+,12,滴,KI-I,2,溶液,、,2mL,淀粉液,+,12,滴,KI-I,2,溶液,、,2mL,淀粉滤液,+,12,滴,KI-I,2,溶液,、,2mL,淀粉滤液,+,12,滴,KI-I,2,溶液,+,稀释,1,倍,实验注意事项,a.,控制滴灌流速。,0.3mL/min,的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟,6,滴（,6=0.3mL/50uL,）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。,b.,显色。在流出,5mL,后接取,2mL,过滤液，然后向试管中加入,1-2,滴,KI-I,2,溶液。切记，,KI-I,2,溶液不要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。,谢谢！,