课题2-多聚酶链式反应扩增DNA片段-(3).pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,分子生物学研究中最强大的实验技术之一,其本质是在体外模拟胞内,DNA,分子复制的过程,美国科学家穆利斯,(K.B.Mullis),发明了,PCR,技术,1993,年诺贝尔奖,课题,2,多聚酶链式反应扩增,DNA,片段,PCR(,多聚酶链式反应）,2.DNA,聚合酶特性,不能从头合成,DNA,，只能从,DNA,的,3,端开始延伸,DNA,链，因此，,DNA,复制需要,引物,。,3.DNA,聚合酶作用过程,当引物与,DNA,母链通过碱基互补配对结合后，,DNA,聚合酶就能从引物的,3,端开始延伸,DNA,链，,DNA,的合成方向总是,从子链的,5,端向,3,端延伸。,1.,定义：,是一种,体外迅速扩增,DNA,片段的技术。能以极少量的,DNA,为模板,，在几小时内复制出上百万份的,DNA,拷贝。,母链,子链,变性,复性（退火）,温度下降到,50,0,C,左右,引物与模板,DNA,单链,的互补序列配对结合。,延伸,温度上升到,72,左右,溶液中,4,种,脱氧核苷酸,，以,母链,为模板，在,DNA,聚合酶,的作用下，根据,碱基互补配对,的原则合成新的,DNA,链。,条件：,结果：,温度上升到,90,以上时,双链,DNA,解聚为单链,条件：,结果：,条件：,结果：,PCR,过程,PCR,过程,5,3,(a),第一轮,引物,2,5,3,引物,1,3,5,3,5,引物,2,互补链,5,3,引物,1,互补链,(,b),第二轮,变性,新引物,新延伸,3,5,3,5,3,5,5,3,(,c),第三轮,以第二轮产物为模板，重复第二轮过程。,DNA,聚合酶只能,特异地,复制处于两个引物之间的,DNA,序列，使这段固定长度的序列,呈指数扩增,。,耐高温,的,Taq,DNA,聚合酶解决了高温导致,DNA,聚合酶失活的问题，促成了,PCR,技术的自动化。,Taq,酶,的应用,需要为,PCR,反应提供的物质,缓冲液,四种脱氧核苷酸,DNA,模板,耐热的,DNA,聚合酶,两种引物,（,控制温度,）,快速、高效、灵活和易于操作,等突出优点。,PCR,技术的特点：,