浙液相色谱讲义四：梯度方法的开发及梯度分离时的注意事项.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,液相色谱的方法开发,（二）梯度方法,梯度洗脱的特点,优点,单位时间的分离能力增加,检测灵敏度提高,缺点,仪器设备要求高,不适合某些检测方式,柱需再生,定量分析的重复性较低,梯度的洗脱方式,高压梯度及低压梯度,梯度洗脱的可变参数,A,及,B,液的成分和化学特性,梯度的陡度,梯度的变化形状,如不用梯度：分离不理想,梯度条件的优化,梯度曲线的变化凹线,梯度曲线的变化凸线,梯度平衡时间的影响（一）,10分钟的梯度，6分钟的平衡时间色谱图不重复,梯度平衡时间的影响（二）,平衡时间6分钟,平衡时间7分钟,平衡时间8分钟,平衡时间9分钟,平衡时间从6到7分钟，第一个峰的保留时间有明显的变化，说明6到7分钟的平衡时间不足，而8到9分钟变化不大因而大于这个时间时，平衡充足。,有机污染物的影响（一）,50,ml,超纯水的有机物污染状态,有机污染物的影响（二）,“,三蒸水,”,有大量的有机污染物不适合梯度分析,有机污染物的影响（三）,典型的,“,实验室水,”,有大量的有机污染物不适合高灵敏度梯度分析,梯度方法开发实例-第一步,开发一个有9个烷基苯酮化合物的梯度方法，用,C18,柱，在最初的条件下(0-100%水-乙腈)，分离不理想。整个色谱峰组保留时间太长，分离度也不好。,梯度方法开发实例-第二步,为使色谱峰前移，提高起始时乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分离得到改善。但是9个化合物出了10个色谱峰，说明有杂质存在，很可能是流动相水中的。,梯度方法开发实例-第三步,从空白梯度图显示，在同样的色谱条件，同样的检测灵敏度下，共有两个杂质峰。说明流动相水中的杂质在此条件下可能会对检测有影响。,梯度方法开发实例-第四步,空白梯度图同样品的色谱图进行对照后，我们看到杂质（共两个峰）中的第一个小峰对第8个色谱峰有干扰，会使其定量分析结果不准确。,梯度方法开发实例-第五步,根据,“,梯度曲线下的面积越大，洗脱能力越强,”,的规律，试用#5曲线使3-9号峰提前(曲线5，50-100%,B)，,但是小峰仍没有分出来。,梯度方法开发实例-第六步,根据,“,梯度曲线下的面积越大，洗脱能力越强,”,的规律，试用#5曲线使3-9号峰提前，改用50-95%,B,见到好的现象。,梯度方法开发实例-第七步,最后用50-90%,B，,曲线4，得到好的结果。,