细菌的分布及外界因素对细菌的影响--第四军医大学..ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌的分布及外界因素对细菌的影响,第一节,细菌的分布,微生物在自然界分布极为广泛，江河、湖泊、海洋、土壤、空气、矿层等数量不等、种类不一的微生物存在。在人类、动物、植物的体表，以及与外界相通的呼吸道、消化道等腔道中，亦有多种微生物的寄生。,一、细菌在人体的分布,（一）正常菌群的含义,（二）人体正常菌群的分布,（三）正常菌群的生理作用,（四）条件致病菌和菌群失调,二、细菌在自然界的分布,微生物和其他生物一样，与外界环境有着密切的联系。外界环境适宜，就生长繁殖；条件改变过于剧烈，使微生物的主要代谢发生障碍，或菌体蛋白质变性凝固，会导致生长停顿，甚至死亡。在医学上常用的人工方法，造成微生物极为不利的环境，来达到杀灭微生物的目的。,（一）土壤中的细菌,土壤中的微生物以细菌为主，放线菌次之，另外还有真菌、螺旋体等,（二）水中的细菌,水中的病菌如伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体等主要来自人和动物的粪便及污染物。因此，粪便管理在控制和消灭消化道传染病有重要意义。,（三）空气中的细菌,室外空气中常见产芽胞杆菌、产色素细菌及真菌孢子等；室内空气中的微生物比室外多，尤其是人口密集的公共场所、医院病房、门诊等处，容易受到带菌者和病人污染。,【目的】,通过实验掌握检测细菌分布的方法，熟悉正常菌群的含义。,【材料】,普通琼脂平板培养基，血琼脂平板培养基，生理盐水，碘酊，75%酒精，无菌棉签。,【目的】,通过实验掌握检测细菌分布的方法，熟悉正常菌群的含义。,【材料】,普通琼脂平板培养基，血琼脂平板培养基，生理盐水，碘酊，75%酒精，无菌棉签。,【方法】,（一）空气中细菌的检查,1分别在教室、厕所、食堂及无菌室中选择距地面约1米左右的一处桌面，将普通培养基揭开，暴露空气中10,min,后，再将平皿盖上。,2置37培养箱24,h，,观察培养基中菌落的数目及菌落形态的特点，并任选一个菌落作革兰氏染色，镜检观察。,（二）呼吸道细菌的检查,1将血平板培养基打开，在距口腔10,cm，,面对培养基用力咳嗽35次，再盖上平皿。,2用沾过生理盐水的棉签在咽喉处轻轻擦拭，即咽拭子，然后在血平板培养基上用平板分离化线法接种。,3将上述两个培养板均置37培养箱24,h，,观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点。,（三）皮肤表面细菌的检查,1将普通培养基分为三等份，将未洗的手指、用肥皂洗过的手指、经上碘酊+75%酒精处理的手指在培养基上轻涂。,2将培养板置37培养箱24,h，,观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点。,第二节,外界因素对细菌的影响,细菌在自然界必然不断经受周围环境中各种因素的影响。当环境适宜时，细菌能进行正常的新陈代谢而生长繁殖；若环境条件变化，可引起细菌的代谢和其他性状发生变异；若环境条件改变剧烈，可使细菌生长受到抑制或导致死亡。,消毒:杀灭病原微生物的方法。,灭菌：杀灭物体上所有的微生物的方法,。,无菌：物体上或容器内无活菌存在的意思。,防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。,一、物理因素,（一）热力灭菌,1湿热灭菌法,2干热灭菌法,（二）电磁波与射线,1日光与紫外线,2电离辐射,（三）滤过除菌法,除菌滤器简称滤菌器，将液体或空气通过含有微细小孔的滤器，只允许小于孔径的物体如液体和空气通过，大于孔径的的物体不能通过。它们可用陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃屑等制成。主要用于一些不耐热的血清、毒素、抗生素、药液、空气等除菌。一般不能除去病毒、支原体和细菌的,L,型。,（四）超声与超声波,每秒钟超过200，000次振动的声波不被人耳感受，称为超声波。微生物对强度高的超声波很敏感。,（五）干燥,多数细菌的繁殖体在空气中干燥时很快死亡。有些细菌抗干燥力较强，尤其有蛋白质等物质保护时。,（六）低温,多数细菌耐低温。在低温状态下，这些细菌的代谢减慢，当温度如回升到适宜范围又能恢复生长繁殖，故低温常用作保存菌种。,二、化学因素,化学药物能影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动，从而发挥防腐，消毒，甚至灭菌的作用。防腐剂的浓度高或作用时间长，也可达到消毒的目的。消毒及防腐药物对人体组织有害，只能外用或用于环境消毒。,（一）化学消毒剂,（二）防腐剂,用于防腐的药物称为防腐剂。生物制剂（如疫苗、类毒素、抗毒素等）中常加入防腐剂，以防止杂菌生长。常用防腐剂有0.5%石炭酸、0.01%硫柳汞和0.10.2%甲醛等。,（三）化学疗剂,三、生物因素,（一）噬菌体（,Bacteriophage,）,噬菌体是能感染细菌、放线菌、真菌、螺旋体的病毒。噬菌体分布广泛，凡是有细菌存在的场所，就可能有相应噬菌体的存在。噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居于易感宿主菌体内。,（二）抗生素,某些微生物在代谢过程中产生的，能抑制或杀灭其他微生物的一种化学物质。抗生素主要来源于放线菌、某些真菌和细菌。目前生产的抗生素，除从微生物培养液中提取外，有些已能人工合成或半合成。,四、实验,（一）物理因素对细菌的影响,1温度灭菌试验,【原理】,温度高低对细菌生长繁殖关系非常密切，温度过高过低都会影响细菌的生长，甚至死亡。细菌生长繁殖的最适温度一般为37，低与此温度是细菌的代谢缓慢，生长受到抑制，但仍可生长；而高温则可杀死细菌。,【材料】,（1）大肠杆菌、枯草杆菌斜面培养物,（2）肉汤培养基,（3）接种环，酒精灯,【,方法】,（1）取肉汤培养管6支，平均分成3组,（2）每组分别接种大肠杆菌和枯草杆菌,（3）第一组经高压蒸气灭菌15,min，,第二组置100水浴中10,min，,第三组不作处理。,（4）将三组培养管均置37孵育，24,h,后观察。,2紫外线杀菌试验,【原理】,紫外线被,DNA,吸收后，使,DNA,两个相邻的嘧啶形成二聚体，,DNA,的复制被抑制，从而导致细菌变异或死亡。,【材料】,（1）大肠杆菌斜面培养物,（2）琼脂平板培养基,（3）接种环，酒精灯，无菌滤纸片,【,方法】,1以密集划线法将大肠杆菌接种于琼脂培养基上。,2将镊子浸酒精燃烧灭菌后取灭菌滤纸片一张，置于涂有细菌的平板培养基表面。,3打开培养皿盖，置于紫外灯下一尺处直接照射30,60,min,4,取出纸片，盖好平板盖，置37孵育，24,h,后观察。,（二）化学因素对细菌的影响,【原理】,许多化学制剂具有抑制和杀灭细菌的作用，在实际应用中具有杀菌作用的化学制剂称消毒剂，只能外用，用于抑制细菌生长与代谢的制剂称防腐剂,【材料】,125%碘酒，75%酒精，1%龙胆紫，5%石炭酸，84消毒液,2滤纸片，固体平板，弯头镊子，,L,玻棒，吸管,3混合菌液,【方法】,1用吸管吸取1滴菌液滴于平板上用,L,玻棒涂抹均匀。,2将浸有25%碘酒，75%酒精，1%龙胆紫，5%石炭酸，84消毒液的滤纸贴于培养皿盖上。,3倒置培养皿，置于37孵育。,4分别于12,h、24h、3h6,后观察生长情况。,（三）细菌抗生素敏感性测定,1纸片扩散法,【原理】,将含有一定量的抗菌药物纸片，平贴在已经接种被测定细菌的琼脂培养基上，纸片中的抗菌药物溶解于培养基内，并向四周呈球面扩散，药物在琼脂中的浓度随离开纸片的距离增大而降低。同时含菌琼脂经孵育后细菌开始生长。在琼脂内的药物浓度恰高于该药对待检菌的最低抑菌浓度，该细菌的生长就受到抑制，在含药纸片的周围形成透明的抑菌环,【目的】,本实验要求掌握纸片扩散法试验,【材料】,（1）菌种：金黄色葡萄球菌，埃希大肠杆菌等,（2）培养基：水解酪蛋白平板,（3）,含抗生素（青霉素、链霉素、氯霉素）药敏纸片,【方法】,（1）用棉拭子取菌液涂布整个培养基表面，反复几次，保证涂布均匀。,（2）镊子分别取含有不同抗生素的滤纸片，贴在已接种的琼脂平板的表面。每个平板上贴4-6片，各纸片中心相距约24,mm，,纸片距平皿边缘约15,mm，,各纸片间距离相等。,【结果】,分别测量各种抗生素纸片抑菌圈的直径（以,mm,表示），判断其敏感度及耐药性。常用抗生素与磺胺药物敏感试验判定标准。,2试管稀释法,【原理】,以水解酪蛋白（,M-H）,液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌定量测定抗菌药抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度（,MIC）,或最低杀菌浓度（,MBC）。,【材料】,（1）金黄色葡萄球菌液,（2）,MH,肉汤,（3）80万单位的青霉素钾盐。,【方法】,（1）取无菌小试管10支排于试管架，于第一管加入,MH,肉汤1.9,ml,2,10,管各加1,ml。,（2）,于第一管加入稀释好的青霉素钾盐0.1,ml,混匀后取1,ml,加入第2管，依次倍比稀释，自第9管吸出1,ml,弃去，第10管系对照管将各管中加入已校正浓度的金黄色葡萄球菌液,0.05ml,混匀后放置35,培养18,h，,观察结果。,【结果】,以药物最高稀释管中无细菌生长者，该管的浓度即为该菌对此药物的敏感度，即,MIC。,