结核菌培养方法、.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,欢迎光临,结核菌培养方法、耐药性及存活时间的研究,抗结核药物的使用，在结核病防治上起了划时代的作用。,50,年代采用,INH+PAS,联合治疗，取得了较好疗效。但,PAS,服用量大，消化道反应多，病人不能耐受，,90%,不能完成治疗程。瑞士,Geistlich,药厂研制的,Dipasic,（简称,DPC,）（德国又名,GEWO399,），是以特殊方法，将,INH,与,PAS,合成的化合物。它能代替,INH+PAS,联合用药，增加疗效，副作用明显比,PAS,为少，德国,Freudenthal,等,50,余位专家均有,Dipasic,临床应用的报告，认为有效。但无,Dipasic,耐药性的报道。,当前，我国耐药性病人不断增加，寻求合理用药，是当务之急，为此我们对,Dipasic,作耐性研究，目的在于，,（,1,）了解,Dipasic,对耐药菌株是否有效？,（,2,）,Dipasic,的药物抑菌浓度如何？以便研究用量与用法，提高临床疗效。,1,、研究方法,：从安徽医科大学附属医院的门诊及病房肺结核病人的痰进行结核菌培养，无论病人是初治抑复治，亦不分男女老少，凡痰菌培养阳性者，即作为研究对象。结核菌的检验，按标准常规操作进行。药敏培养基的制备：液体鸡蛋培养基内，按比例加入抗结核药物，其浓度按我国药敏标准，如,INH,、,PAS,、,TB1,，每毫升分别为,1g,及,10g,，,SM,、,KM,、,CPM,分别为,10g,，,RFP,及,RFD,分别为,50g,及,250g,，,EMB,为,5g,及,50g,。,Dipasic,则暂定为每毫升含药,0.1g,、,0.5g,、,1.0g,及,10g,四种。加入药物后，充分摇匀混合后，分装在中试管内，每管,5,毫升，摆成斜面，进行,8590,一小时凝固灭菌，,24,小时后再灭菌一次，制成的含药培养基，保存在冰箱，一个月内有效。菌液制备：取培养基上生长一个月内的菌落，于磨菌器内灭菌生理盐水研磨呈均匀的菌液，再加灭菌盐水稀释，与标准管比较（制成每毫升含,1,毫升的菌液），最后,100,倍稀释成每毫升含,10-2,毫,克菌液备用。,菌液接种：将含不同浓度的含药培养基顺序排列，并有不含药物的培养基作为对照。取每毫升含,10-2,毫克的菌液，每管接种,0.1,毫升，接种菌量为,10-3,毫克的菌液。放在,37,温箱内培养，每周观察一次，四周报告结果。报告的标准是，如培养基上无菌生长者为（一），培养基上有菌落数在,50,个以下者为（,+,），培养基上菌落数,50,个以上，但无融合者为（,+,），培养基上菌落大部分融合者为（,+,）。,2,、研究结果,：我们研究的,10,种抗结核药物耐药性试验，这,10,种抗结核药物是：,INH,、,PAS,、,DPC,、,TB1,、,EMB,、,RFP,、,RFD,、,SM,、,KM,及,CPM,，围绕本文目的，我们仅取,30,例病人的其中,INH,、,PAS,及,DPC,三种药物的耐药性进行分析，其他另行报道。,INH,、,PAS,的浓度，按国家耐药性标准，分为,1g,及,10g,，以每毫升,1g,为耐药上界，,1g,药浓下不能生长者为阴性，为敏感菌。,1g,生长者为阳性，为耐药菌。,DPC,的浓度，由于我们尚需寻求合适的抑菌浓度，故分为每毫升含药,0.1g,、,0.5g,、,1.0g,及,10g,四种不同的浓度。为便于统计比较，暂以,1g,作为耐药标准，,1g,以下者为敏感，,1g,以上者为耐药。,表,1 30,例耐药情况分析,药物名,敏感,耐药,INH,（,%,）,3,（,10.0,）,27(90.0),PAS,（,%,）,22(73.3),8(26.7),DPC,（,%,）,20(66.6),10(33.4),从表,1,可见耐,INH,菌珠已达,90%,耐,DPC,菌株为,33.4%,经统计学处理,X2=27.44,P,0.001,有高度显著性。,PAS,与,DPC,比较，经统计学处理，校正卡方为,0.062,，,P,0.05,无显著性。,药物名,-,+,+,+,INH(%),3(10.0%),1(3.3%),4(13.3%),22(73.4%),PAS(%),22(73.4%),2(6.6%),3(10.0%),3(10.0%),DPC(%),20(66.6%),3(10.0%),6(20.0%),1(3.3%),表,2,敏感与耐药程度的分析,表,1,和表,2,可以说明,INH,、,PAS,、,DPC,为三种不同的抗结核药物，他们对不同的结核菌，有不同的敏感与耐药情况。从,8,例耐,PAS,菌株中，我们发现，此,8,例同时有三种以抗结核药物之耐药，耐,DPC,菌株,10,例中，也有此一现象，是多种耐药性菌株。,抑菌浓度,(,g,),培养阳性,培养阴性,0,1,30,（,100%,）,0,（,0%,）,0,5,18,（,60%,）,12,（,40%,）,1,9,（,30%,）,21,（,70,）,10,2,（,6.6%,）,28(93.4%),表,3,30,例,DPC,抑菌浓度的分析,从表,3,可见,DPC,抑菌浓度,1g,尚有,9,例培养仍可生长,10g,时有,6.6,培养阳性,。,讨论,：过去，有人认为,DPC,是一种,INH+PAS,的混合物，我们的研究证明从耐药性及耐药程度分析，,DPC,是独立的一种抗结核药物，是,INH,与,PAS,的一种化合物，当前，我国耐,INH,菌株已达,90%,，这样的耐药性，仍在广泛应用，是否降低疗效，值得重视。,INH,耐药后，是否致病力全均下降，从我们的结核菌培养后生长时间看，并未发现耐药菌的生长延缓。,比统计学看来，耐,INH,菌株，应用,DPC,仍有效，差异有高度显著性。因此，,DPC,可否作为另一种抗结核药物，与,RFP,、,RFD,等联合应用，关键在于,DPC,是否和,PAS,那样，对,RFP,、,RFD,吸收有障碍，会降低,RFP,的血浓度，降低疗效。如果,DPC,并没有,PAS,这一代谢现象，则,DPC,作为另一抗结核药物，其应用前景就较为广阔了。,Kowilsky,氏测定,DPC,服用后血浓度的记载，氏用,DPC,与,INH,同量时，血浓度,1,小时,5.8mg/L,3,小时,6mg/1,7,小时,4.56mg/L,12,小时,2.6mg/L,14,小时,2mg/L,，氏认为,DPC,明显优于,INH,，其优点是：（,1,）,DPC,排泄慢，,INH12,小时血浓度仅有,0.003mg/L,，而,KPC,仍有,2.6mg/L,，,14,小时时,INH,浓度已为”,0”,，,KPC,仍高达,2mg/L,。（,2,）血浓度,KPC,比,INH,高，在二者给同样的药量时，,INH,血浓度为,5.2mg/L,，,DPC,则为,5.8mg/L,。,从,Wilbrandt,氏,1LD50,的研究中，,DPC,对小白鼠及兔的,LD50,一倍于,INH,，每公斤体重达,0.4mg,，因此,DPC,的毒性是很小的，应用大于,INH,一倍的用量是完全可以耐受的。从我们的研究中，也可以看出，,DPC,和,INH,同样的,1g,耐药性分界线是不够的，,1g,有,30%,阳性，要提高疗效，加大用量，似属必要。也就是说，,INH,每日常规用量,6mg/kg,，,DPC,用量应为,12mg/kg,，或更高些。,结论,：,作者用结核菌培养及耐药性测定的方法研究结果，认为,DPC,是一种独立的抗结核药物，在各种抗结核药物耐药性增加的情况下，为了便于联合治疗，,DPC,有一定的实用价值。鉴于,DPC1g,仍有,30%,生长，认为用量应加倍，提高血浓度，以求提高疗效，建议推广应用。,目的,：了解,Dipasic,对耐药菌株是否有效及其药物抑菌浓度。,方法,：药敏培养基内加入,10,种不同浓度抗结核药物，加入结核菌菌液,10-3,毫克。,结果,：四周后观察三种抗结核药物耐药情况。,结论,：,DPC,是一种独立的抗结核药物对耐药结核菌都有效，但在,1g,浓度时仍有,30%,生长，认为用药量量应加倍。,【,关键词,】,：结核菌培养方法,结核菌耐药性结核菌存活时间结核菌试验,科研三要素,处理因素：抗结核药物的浓度,研究对象：肺结核病人,效益指标：,DPC,是一种独立的抗结核的药物，,DPC,有一定的实用价值,研究对象,诊断标准：痰菌培养呈阳性,纳入标准：痰菌培养呈阳性且未患有并发症，并对本次试验无影响,排除标准：不能有并发症；未接受相关治疗；不能有其它生理或病理状况（月经周期）,样本含量：,30,例,偏倚的控制,1,，严格遵守随机化原则抽样，尽可能提高抽样对象的受检率。,2,，用精良仪器并事先做好校正。,3,，训练调查员并对其进行监督和质量控制，严格按设计要求进行调查。,科研设计方法,随机抽样法,交叉设计,系统分组实验设计,重复测量实验设计,