光合作用色素含量测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,叶绿素含量测定,实验目的：掌握,未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素,a,，,b,含量的方法及其计算。,试验原理：,混合液中两种组分存在时，可通过测定吸光度，根据,Lambert,Beer,定律计算二者含量。叶绿素,a,的最大吸收峰在,663 nm,，叶绿素,b,最大吸收峰在,645 nm,。根据,Lambert,Beer,定律，两种组分的混合液，二组分的浓度,C,与光密度,OD,之间的关系如下：,OD663,CaKa,663,CbKb,663,OD645=CaKa,645,+CbKb,645,从文献中查得,Ka,663,为,82.04,，,Kb,663,为,9.27,；,Ka,645,为,16.75,，,Kb,645,为,45.60.,通过代数推算，得,Ca,12.7OD,663,2.69OD,645,Cb,22.9OD,645,4.68OD,663,CT,Ca,Cb,8.02OD,663,20.21OD,645,式中单位为,mg L,1,。,Cc,x,（,1000D470-3.27Ca-104Cb,）,/229,=4.37*D470+2.11*D663-9.1*D646,器材与试剂：,实验仪器：高级型分光光度计，离心机，台式天平，见到，研钵，漏斗，移液管。,实验试剂：丙酮，碳酸钙。,实验材料：植物叶片。,实验步骤：,1,、色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取,0.3,g,放入研钵中加,80%,丙酮,2,mL,，加适量石英砂及少许碳酸钙，研磨成匀浆，再加,80,丙酮,2,mL,，将匀浆转入离心管，并用适量,80,丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用,80,丙酮定容至,8,mL,。,2,、测定光密度：取上述色素提取液,1,mL,，加,80,丙酮,4,mL,稀释后转入比色杯中，以,80,丙酮为对照，分别测定,663 nm,、,645 nm,处的光密度值。,3,、按公式计算叶绿素,a,，,b,及总叶绿素含量。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素含量。,