2025年大学分子生物学（DNA提取技术）试题及答案.doc

2025年大学分子生物学（DNA提取技术）试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题，共30分）
（总共6题，每题5分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内）
w1. 以下哪种试剂在DNA提取过程中用于去除蛋白质？（ ）
A. 乙醇 B. 异丙醇 C. 氯仿 D. 氯化钠
w2. 在DNA提取中，蛋白酶K的作用是（ ）
A. 水解DNA B. 水解RNA C. 水解蛋白质 D. 沉淀DNA
w3. 提取基因组DNA时，常用的裂解细胞的方法不包括（ ）
A. 机械破碎 B. 酶解 C. 高温煮沸 D. 化学裂解
w4. 以下关于DNA提取中离心步骤的说法，错误的是（ ）
A. 低速离心可去除细胞碎片 B. 高速离心用于沉淀DNA
C. 不同转速的离心目的相同 D. 离心转速和时间需根据实际调整
w5. DNA提取过程中，加入异丙醇的目的是（ ）
A. 溶解DNA B. 沉淀DNA C. 去除杂质 D. 中和反应
w6. 用于鉴定提取的DNA纯度的指标是（ ）
A. A260/A280 B. A260/A230 C. DNA浓度 D. DNA长度

第II卷（非选择题，共70分）
w7. （10分）简述DNA提取的基本流程。
w8. （15分）在DNA提取过程中，如何保证提取的DNA质量？
w9. （15分）材料：现有一份植物组织样本，需要从中提取高质量的DNA用于后续实验。请设计一个DNA提取方案，包括所需试剂、主要步骤及注意事项。
w10. （20分）材料：某研究小组在DNA提取实验中遇到了DNA产量低的问题。分析可能导致该问题的原因，并提出相应的解决措施。
w11. （20分）材料：在DNA提取后进行纯度检测时，发现A260/A280比值偏低。请分析可能的原因，并说明如何解决。

答案：w1.C；w2.C；w3.C；w4.C；w5.B；w6.A；w7. 首先进行细胞裂解，可采用机械破碎、酶解或化学裂解等方法使细胞破碎释放出DNA。然后加入蛋白酶K水解蛋白质去除杂质。接着通过离心等方法分离出含DNA的上清液。加入乙醇或异丙醇沉淀DNA，再经过洗涤、干燥等步骤得到纯化的DNA。；w8. 选择合适的样本，保证样本新鲜且无降解。采用正确的裂解方法确保细胞充分裂解。严格控制蛋白酶K的用量和作用时间。合理选择沉淀剂及沉淀条件。注意离心转速和时间，避免DNA损失。操作过程中防止污染，保持试剂和器材的清洁。；w9. 所需试剂：研磨缓冲液、蛋白酶K、氯仿异戊醇、异丙醇、70%乙醇等。主要步骤：将植物组织研磨成匀浆，加入研磨缓冲液和蛋白酶K，55℃水浴消化一段时间。加入氯仿异戊醇抽提，离心取上清。向上清中加入异丙醇沉淀DNA，离心弃上清。用70%乙醇洗涤DNA，干燥后溶于适量TE缓冲液。注意事项：研磨要充分，消化时间要足够，抽提和沉淀过程要轻柔避免DNA断裂，操作全程防止污染。；w10. 可能原因：样本量不足；细胞裂解不完全；蛋白酶K失活或用量不当；沉淀条件不合适；操作过程中有DNA损失。解决措施：增加样本量；优化裂解方法或延长裂解时间；更换新鲜有效的蛋白酶K并调整用量；调整沉淀剂种类、浓度及沉淀时间；规范操作，减少移液等过程中的DNA损失。；w11. 可能原因：有蛋白质污染，如蛋白酶K消化不彻底；有酚污染，抽提时残留；RNA未去除干净。解决措施：重新加入蛋白酶K消化或延长消化时间；再次用氯仿异戊醇抽提去除酚；加入RNase消化RNA。