2025年大学（生物技术）基因工程实验试题.doc

2025年大学（生物技术）基因工程实验试题

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题，共30分）
（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内）
1. 基因工程中常用的工具酶不包括以下哪种？（ ）
A. 限制性核酸内切酶 B. DNA连接酶 C. 逆转录酶 D. 淀粉酶
2. 以下关于质粒的说法，错误的是（ ）
A. 是一种环状双链DNA分子 B. 能独立于染色体外进行复制 C. 不能在宿主细胞中稳定存在 D. 可作为基因工程的载体
3. 限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端通常是（ ）
A. 平末端 B. 黏性末端 C. 两者都有 D. 以上都不对
4. 基因工程中构建重组DNA分子常用的载体是（ ）
A. 噬菌体 B. 质粒 C. 病毒 D. 以上都是
5. 以下哪种方法可用于检测重组DNA分子是否导入受体细胞？（ ）
A. 核酸杂交 B. 蛋白质电泳 C. 细胞培养 D. 显微镜观察
6. 基因工程中目的基因的获取方法不包括（ ）
A. 从基因组文库中筛选 B. 从cDNA文库中筛选 C. 化学合成 D. 细胞融合
7. 用于将mRNA逆转录成cDNA的酶是（ ）
A. DNA聚合酶 B. 逆转录酶 C. RNA聚合酶 D. 限制性核酸内切酶
8. 基因工程中转化的概念是指（ ）
A. 将重组DNA分子导入受体细胞 B. 将目的基因导入受体细胞 C. 将载体导入受体细胞 D. 将蛋白质导入受体细胞
9. 以下关于PCR技术的说法，正确的是（ ）
A. 是一种体外扩增DNA的技术 B. 需要引物 C. 需要DNA聚合酶 D. 以上都是
10. 基因工程中筛选阳性克隆的方法不包括（ ）
A. 抗生素抗性筛选 B. 蓝白斑筛选 C. 核酸杂交筛选 D. 细胞凋亡筛选

第II卷（非选择题，共70分）
二、填空题（每题3分共15分）
1. 基因工程的核心步骤是____________________。
2. 限制性核酸内切酶识别的DNA序列具有____________________特点。
3. 常用的DNA连接酶有____________________和____________________。
4. 基因工程中常用的受体细胞有____________________、____________________等。
5. PCR技术的三个基本反应步骤是____________________、____________________、____________________。

三、简答题（每题10分共30分）
1. 简述基因工程的基本操作流程。
2.w 说明限制性核酸内切酶在基因工程中的作用及特点。
3. 阐述基因工程中载体应具备的条件。

四、实验设计题（15分）
现有一未知基因，设计实验方案获取该基因并构建其表达载体。要求：写出实验思路、主要实验步骤及用到的主要工具酶和试剂。
实验思路：首先通过一定方法获取未知基因，然后选择合适载体，利用工具酶将基因与载体连接构建表达载体。
主要实验步骤：
1. 从相关生物材料中提取总RNA，通过逆转录得到cDNA。
2. 根据已知信息设计引物扩增目的基因。
3. 选择合适载体，用限制性核酸内切酶切割载体和目的基因。
4. 用DNA连接酶将目的基因与载体连接。
用到的主要工具酶和试剂：逆转录酶、DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、总RNA提取试剂、逆转录试剂盒、PCR试剂、载体等。

五、分析题（10分）
在基因工程实验中，对构建的重组质粒进行酶切鉴定，结果发现酶切产物电泳条带与预期不符。请分析可能出现这种情况的原因。
可能原因：一是酶切反应体系中酶的活性受到抑制，比如反应体系中存在抑制剂，或者酶保存不当失活。二是质粒提取过程中出现问题，导致质粒不纯或结构异常。三是引物设计错误，导致扩增得到的目的基因片段不准确，进而影响重组质粒的结构。四是连接反应不成功，目的基因未正确连接到载体上，使得重组质粒的结构不符合预期。

答案：
一、1.D 2.C 3.C 4.D 5.A 6.D 7.B 8.A 9.D 10.D
二、1. 构建重组DNA分子 2. 特异性 3. E.coli DNA连接酶、T4 DNA连接酶 4. 大肠杆菌、酵母菌 5. 变性、退火、延伸
三、1. 基因工程基本操作流程：获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。
2. 作用：识别特定DNA序列并切割，产生末端用于后续连接等操作。特点：具有特异性识别序列，切割位点具有特定性。
3. 条件：有多个限制酶切割位点；有标记基因便于筛选；能在受体细胞中稳定存在并复制；分子量小，便于操作。
四、实验思路：首先通过一定方法获取未知基因，然后选择合适载体，利用工具酶将基因与载体连接构建表达载体。
主要实验步骤：
1. 从相关生物材料中提取总RNA，通过逆转录得到cDNA。
2. 根据已知信息设计引物扩增目的基因。
3. 选择合适载体，用限制性核酸内切酶切割载体和目的基因。
4. 用DNA连接酶将目的基因与载体连接。
用到的主要工具酶和试剂：逆转录酶、DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、总RNA提取试剂、逆转录试剂盒、PCR试剂、载体等。
五、可能原因：一是酶切反应体系中酶的活性受到抑制，比如反应体系中存在抑制剂，或者酶保存不当失活。二是质粒提取过程中出现问题，导致质粒不纯或结构异常。三是引物设计错误，导致扩增得到的目的基因片段不准确，进而影响重组质粒的结构。四是连接反应不成功，目的基因未正确连接到载体上，使得重组质粒的结构不符合预期。