兽医寄生虫疫苗研究现状与展望modified.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,兽医寄生虫疫苗研究现状与展望,南京农业大学动物医学院院长,李祥瑞 教授,.,疫苗研究必要性,抗药虫株,药物研制费用升高,公共卫生和食品安全,生物学技术高度发展,.,已商品化的兽医寄生虫疫苗,.,Eimeria,强毒苗,Coccivac,Sehering Plough Animal Health,含,8,种球虫,Immucox,Vetech,含,4,种 柔嫩、毒害、巨型、堆型,.,Eimeria,弱毒苗,鸡胚传代致弱：,始于英国、美国。现在很少用,理化致弱：,加热、冷冻、辐射处理、化学诱导等,早熟株选育,:,Paracox,Sehering Plough Animal Health,含,7,种主要球虫,Livecox,Biopharm(Czech Repulic),含鸡胚致弱柔嫩株和堆型、巨型早熟株,.,Eimeria,商品名,致弱,耐药,虫种,使用方法,免疫对象,生产商,Coccivac D,不,不,A,、,T,、,M,、,N,、,B,、,P,、,H,、,Miv,饮水,蛋,/,种鸡,Schering plough,美国,Coccivac B,不,不,A,、,T,、,M,、,Miv,饮水,/,喷雾,肉仔鸡,Schering plough,美国,Immucox C1,不,不,A,、,T,、,M,、,N,饮水,/,硬胶,肉仔鸡,Vetech Labs,加拿大,Immucox C2,不,不,A,、,T,、,M,、,N,、,B,、,Mi,、,P,饮水,蛋,/,种鸡,Vetech Labs,加拿大,Paracox,是,不,A,、,T,、,M2,、,N,、,B,、,Mi,、,P,饮水,蛋,/,种鸡,Schering plough,美国,Paracox 5,是,不,A,、,T,、,M2,、,Mi,喷饲,肉仔鸡,Schering plough,美国,Livacox Q,是,不,A,、,T,、,M,、,N,饮水,蛋,/,种鸡,Biopharm,捷克,Livacox T,是,不,A,、,T,、,M,饮水,肉仔鸡,Biopharm,捷克,NobilisCox ATM,不,是,A,、,T,、,M2,饮水,/,喷雾,肉仔鸡,Intervet,荷兰,Eimeriavax,是,不,A,、,T,、,M,、,N,滴眼,肉仔,/,种,BioProperties,澳大利亚,.,Eimeria,配子抗原亚单位苗,(Wallach,1995),Eimeria maxima,母源免疫,.,Toxoplasma gondii,Toxovax,Intervet,用于羊,致弱苗,生活史不完整,不形成组织包囊,减少流产,.,Neospora caninum,灭活速殖子,牛,减少流产,.,Babesia,Babesia canis,体外培养上清中抗原,犬,减低发病,.,Babesia,Babesia bovis/bigemina,传代致弱苗,牛,本地工厂化生产应用,.,Theileria,Theileria annulata,体外培养致弱,牛,本地工厂化生产应用,.,Theileria,Theileria parva,非致弱苗,牛,本地工厂化生产应用,.,Giardia,Giardia duodenalis,(Giardia felis),GiardiaVax,Fort Dodge,速殖子,犬、猫,减少包囊排出、预防临床症状,美国商品化,.,Taenia,Taenia ovis,基因工程疫苗,45W-GST(45W),（,Johnson,，,1989,）,绵羊带绦虫的六钩蚴抗原,E.coli,中的表达产物。,可以保护绵羊不受绵羊囊尾蚴的感染,实验感染保护率达,94%,The University of Melbourne,Pitman Moore New Zealand Ltd.,New Zealand Ministry of Agriculture and Fisheries,第一个成功有效的抗寄生虫基因工程疫苗,.,Echinococcus,Echinococcus granulosus,抗细粒棘球蚴基因工程疫苗,EG95 (Lightowlers 1996),六钩蚴抗原，天然抗原分子量为,24.5kDa,cDNA,表达产物为,153,个氨基酸,分子量,16.5kDa,表达系统,E.coli,产物为谷胱甘肽转硫酶,(GST),融合蛋白,.,Echinococcus,细粒棘球绦虫来源,活棘球蚴包囊数,/,平均（范围）,对照组,免疫组,保护率,新西兰,156.6(70-270),5.8(0-16),96,新西兰,256.0(32-445),7.5(0-44),97,新西兰,36.8 (0-85),0.0(0),100,澳大利亚,4.7(0-16),0.2(0-1),96,阿根廷,23.1(2-64),0.1(0-1),99,中国,15.4(6-40),0.4(0-2),92,EG95,预防棘球蚴感染免疫试验结果,.,Dictyocaulus,Dictyocaulus vivparus,(,牛胎生网尾线虫,）,Huskvac,Intervet,Dictol,Schering Plough Animal Health,辐射致弱三期幼虫,牛,仅在欧洲使用,.,辐照幼虫疫苗一次免疫所需剂量,虫体,剂量,胎生网尾线虫,Dictyocaulus viviparus,1000,丝状网尾线虫,Dictyocaulus filaria,1000,犬钩口线虫,Ancylostoma caninum,1000,捻转血矛线虫,Haemonchus contortus,10000,蛇形毛圆线虫,Trichostrongylus colubriformis,40000-160000,Dictyocaulus,.,Boophilus,Boophilus microplus,基因工程苗,Bm86,TickGardTM;TickGard Plus,TM,Biotech Australia,E.coli,表达产物,Gavac,T,Heber Biotec S.A.,Havana,Cuba,酵母表达产物,重组蜱肠上皮抗原,仅在澳大利亚古巴中南美国家用,牛,.,Boophilus,疫苗诱导的抗体破坏蜱肠上皮细胞，使之裂解，进而影响蜱的采食。但不对蜱产生立刻影响,蜱的出没可以减少,20-0%,蜱的不同代之间数目可以减少,70-90%,主要益处是产生生态效益，减少抗蜱化学药物的使用。但随着蜱的适应和变异，疫苗的效果可能会下降。需要不断改进,.,Hypoderma,Hypoderma lineatum,纹皮蝇,一种抗纹皮蝇幼虫蛋白酶的基因工程疫苗,已经在加拿大获得了证书,.,兽医寄生虫疫苗的获得手段,通过特殊动物传代或在体外培养,使毒力降低，如牛巴贝斯致弱苗就是通过在切除脾脏牛体内反复传代获得,筛选缺少某一生活阶段的虫株,如刚地弓形虫,S48,株就不能形成包囊,筛选生活周期缩短的的虫株,如早熟艾美尔球虫苗,辐射致弱,.,兽医寄生虫疫苗存在的问题,安全性问题,目前的寄生虫疫苗主要为活苗，虽然可以产生一定的免疫保护，但毕竟是活的虫体，在特定的情况下，仍有致病的可能,免疫保护效果,有些寄生虫可以感染多重动物，其疫苗往往对某种动物保护效果较好，对另种动物效果较差，或者对不同年龄的动物保护效果不一致,经济效益,尽管有些疫苗免疫保护性好，但生产成本高、免疫方法复杂、与抗寄生虫药的广谱性相比具有较窄的保护范围均限制了疫苗在生产中的应用,.,兽医寄生虫疫苗展望,DNA,疫苗,一,DNA,疫苗的概念,DNA,疫苗（,DNA vaccine,）,核酸疫苗（,nucleic acid vaccine,）,裸,DNA,疫苗（,naked DNA vaccine,）,DNA,免疫（,DNA immunization,）,核酸免疫（,Nucleic acid immunization,）,基因免疫（,gene immunization,）,遗传免疫（,genetic immunization,.,兽医寄生虫疫苗展望,DNA,疫苗,将含有编码外源蛋白基因的质粒,DNA,，直接导入动物组织，外源基因在体细胞中表达后，表达产物被递呈，与,MHC,分子结合，刺激机体产生相应的抗体和细胞毒性,T,淋巴细胞，分别介导体液免疫和细胞免疫应答。这种外源基因是抗原的来源，具有疫苗的功能,.,兽医寄生虫疫苗展望,DNA,疫苗,二,DNA,疫苗的优点,1,诱导平衡的体液免疫和细胞免疫,2,可以构建多价疫苗,3,免疫时间长,4,成本低、稳定、便于储存和运输,5,安全,6,对免疫功能低下者效果较好,7,可以激发特定的,Th1,或,Th2,免疫应答,.,兽医寄生虫疫苗展望,DNA,疫苗,.,兽医寄生虫疫苗展望,DNA,疫苗,寄生虫方面的探索,日本分体吸虫 绦虫 疟原虫 利什曼原虫 隐孢子虫 弓形虫 锥虫 球虫 贾第虫,疟疾,DNA,疫苗已获准生产,.,.,兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂,细胞因子,细胞因子是机体免疫细胞或非免疫细胞产生的一组具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子，在体内能激活和调节免疫活性细胞，对免疫应答的产生和调节具有重要作用,.,兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂,细胞因子佐剂,IL-2,IL-12,IL-18,GM-CSF,IFN-,.,兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂,细胞因子使用方式,重组蛋白,单独构建,DNA,疫苗,与抗原基因串联构建,DNA,疫苗,.,.,兽医寄生虫疫苗展望 特异性抗体亚型刺激性抗原,特异性抗体亚型刺激性抗原,在一些寄生虫病中，起主要保护性作用的往往是某一亚型的抗体，因此，通过筛选能够刺激这一亚型抗体的抗原，可以研究高效的疫苗,疟疾,抗感染作用以,IgG1,和,IgG3,型抗体及其介导的细胞免疫为主，通过体外培养从疟疾病人分离的,B,淋巴细胞，筛选能够刺激产生特异性亚型抗体（,IgG1,、,IgG3,）的蛋白分子作为疫苗侯选抗原，对研究抗疟原虫疫苗具有重要意义,.,兽医寄生虫疫苗展望 ,T,细胞刺激性抗原,T,细胞刺激性抗原,能够刺激,T,细胞增值或活化,T,细胞的抗原,Breed,等以抗原对,T,细胞的激发能力为标准来筛选鸡球虫抗原，取得了良好的效果,.,兽医寄生虫疫苗展望 ,T,细胞刺激性抗原,.,兽医寄生虫疫苗展望 ,T,细胞刺激性抗原,.,兽医寄生虫疫苗展望 ,T,细胞刺激性抗原,抗原粗提液、,3.0,蛋白、,3.2,蛋白免疫保护试验,。,A.,盲肠病变计分指标；,B.,增重指标。,.,兽医寄生虫疫苗展望 ,多克隆活化因子,寄生虫感染后，往往能够活化或抑制某一类型的免疫细胞。这些由寄生虫分泌的物质称作多克隆活化因子,对能够活化机体免疫系统的寄生虫分子进行分离和鉴定，对筛选有效的寄生虫疫苗抗原，具有重要意义,.,兽医寄生虫疫苗展望 表达,文库免疫,.,兽医寄生虫疫苗展望 表达,文库免疫,表达文库免疫的应用,筛选保护性抗原,筛选体液免疫抗原,筛选细胞免疫抗原,筛选免疫抑制分子,.,Thanks!,.,