酶联免疫快速检测试剂盒在动物源性食品中的检测原理与应用情况及注意事项.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,Tankertanker Design,Tankertanker Design,酶联免疫快速检测试剂盒在动物源性食品中的检测原理与应用情况及注意事项,主要内容,1,、概要,2,、,药物残留的危害及控制残留的意义,2,、酶联免疫检测原理,3,、实际检测中的常见问题,4,、公司简介,动物性食品安全已成为全世界关注的焦点，其中兽药残留问题是影响动物性食品安全的最主要因素之一。国际外贸畜产品进出口条例明确规定了,氯霉素、硝基呋喃类等,药物残留是肉品国际贸易中的必检项目。,我国是农业大国，畜禽产品的对外贸易在我国的国民经济中已显示了非常重要的地位，但由于药物残留量超标问题，致使畜禽肉产品的出口在国际市场上屡屡受挫，已成为阻碍我国畜牧养殖业的一大棘手问题。,一、概 要,（一）药物残留的危害,1.,对食品安全的影响,（,1,）急性中毒,“瘦肉精”、“抗球王”中毒事件等,（,2,）慢性中毒,氯霉素、四环素类、大环内酯类、氨基苷类等,（,3,）“三致”作用,苯丙咪唑类、雌激素、砷制剂、喹噁啉类、硝基呋喃类和硝基咪唑类,（,4,）变态反应,青霉素、磺胺类、氨基糖苷类和四环素类等,（,5,）诱导耐药菌株,四环素类、喹诺酮类等，如喹诺酮类由于是家禽体内空肠弯曲杆菌产生耐药性并传递到人的空肠弯曲杆菌而被许多国家禁用于食品动物,（,6,）激素样作用,二、药物残留的危害及控制残留的意义,2.,对社会的影响,（,1,）大众消费心理恐慌,（,2,）社会负担,（,3,）环境生态变化，如常山酮、有机砷制剂等,3.,对产业的影响,（,1,）对兽药产业、饲料工业的影响,（,2,）对养殖业的影响,（,3,）对食品加工业的影响,4.,对进出口贸易的影响,药物对人体的危害,:,硝基呋喃,-,致癌,孔雀石绿,-,致癌、致畸、致突变,氯霉素,-,再生障碍性贫血、速发型过敏、皮炎,喹诺酮类,-,儿童头痛、肝、肾功能 损害,磺胺类,-,免疫下降、破坏造血系统、溶血性贫血、,潜在致癌,排 泄 物,土 壤,鱼、虾等,转,移,降,解,消,除,毒,性,富,集,消,除,兽药及饲料添加剂对生态环境的影响,二、酶联免疫检测技术的基本原理,ELISA,是一种免疫测定（,immunoassay,，,IA,）,抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加 入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行,定性或定量分析,。,1.,抗原抗体反应,的特点,1.1,可逆性,抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为,：,Ag+AbAg,Ab,抗体的亲和力（,affinity,），可以用平衡常数,K,表示：,K=Ag,Ab,AgAb,Ag,Ab,的解离程度与,K,值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。,解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。,1.2,敏感性,化学比色法的敏感度为,mg/ml,水平。,酶反应测定法的敏感度约为,5-10g/ml,。,免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。,标记的,免疫敏感度可提高数千倍，达,ng/ml,水平。,例如，氯霉素、呋喃唑酮类药物，其敏感度可达,0.05ng/ml,以下,。,1.3,特异性,抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。即,“,钥匙与锁,”,的关系。,与类似物的,交叉反应率,是评价特异性的技术指标。,2,、,ELISA,的类型,一、,ELISA,可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：,（,1,）固相的抗原或抗体，即,免疫吸附剂,（,immunosorbent,）,；,（,2,）酶标记的抗原或抗体，称为,结合物,（,conjugate,）,；,（,3,）酶反应的底物。,可设计出各种不同类型的检测方法；,药残检测时常采用下例方法来进行检测。,ELISA,的原理和类型,二、必备试剂：,ELISA,中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物,1.,已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）,2.,酶标记的抗原或抗体（结合物）,3.,酶的底物,4.,阴性对照品和阳性对照品，参考标准品,5.,结合物及标本的稀释液,6.,洗涤液,7.,酶反应终止液,三、方法类型：,1.,双抗体夹心法测抗原,2.,双抗原夹心法测抗体,3.,间接法测抗体,4.,竞争法测抗体或抗原,ELISA,中常用名词,1.,半抗原,:,只有免疫反应性,而无免疫原性的小分子物质,.,如药物,多糖,类脂等,2.,抗原,:,凡是能刺激机体产生免疫应答并能与应答产物特异结合的物质,3.,载体,:,赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子,即为载体,.,4.,抗体,:,可与相应,抗原,发生特异性结合反应的,免疫球蛋白,5.,稳定性,:,通常用户指的稳定性既指试剂盒的保存期，又指试剂盒不同批次的均一性,6.,特异性,:,试剂盒特异性一般指试剂盒出现假阳性或假阴性的概率,7.,准确度,:,一般用回收率来表示,是评价试剂盒好外的重要指标,ELISA,中常用名词,8.,灵敏度,:,指测定值,(,平均值,),与真实值的接近程度,表示分析结果的正确性,.,由于无法知道榈的真实浓度,故通常采用添加回收率来表示,:,回收率,=(,测定值,-,空白值,)/,添加量,9.,精密度,:,指用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度,表示分析结果的重复性,.,10.,检测限,:,检测限指分析方法能够从榈的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度,.,11.,定量限,:,指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓度,.,ELISA,中常用名词,8.,灵敏度,:,指测定值,(,平均值,),与真实值的接近程度,表示分析结果的正确性,.,由于无法知道榈的真实浓度,故通常采用添加回收率来表示,:,回收率,=(,测定值,-,空白值,)/,添加量,9.,精密度,:,指用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度,表示分析结果的重复性,.,10.,检测限,:,检测限指分析方法能够从榈的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度,.,11.,定量限,:,指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓度,.,ELISA,中常用名词,12.,交叉反应,因为,共同抗原,的存在，由甲乙两种细胞刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应,抗原表位,结合，而且由甲菌刺激机体产生的抗体还能与乙菌表面的相同表位结合；同样，乙菌刺激机体产生的抗体亦可与甲菌表面的相同表位结合，但反应程度较弱，这种抗原、抗体反应即称为交叉反应（,cross reaction,）。,交叉反应现象的形成可能与下列因素有关：,（,1,）共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构；,（,2,）共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；,（,3,）相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。,固相载 体,抗体,酶,抗原,酶标记抗原,直接竞争法,(,包抗体,),：,1.,将抗体包被在固相载体上。,2.,加入样品和酶标记抗原,两者竞争板上的抗体,.,3.,酶催化底物并显色。,荷兰,ED,、英国,RANDOX,、比利时,部份试剂盒采用,样本,/,标品,(,抗原,),方法,:,反应步骤少,操作简单,;,特异性不如间接竞争法,.,方法,一,酶,抗抗体,酶标记,抗抗体,抗体,偶联抗原样本,/,标品,固相载体,间接竞争法,(,包被抗原,),：,1.,将抗原包被在固相载体上。,2.,加入样本和抗体后，若样本中,含有抗原，则将和板上抗原竞争结,合加入的抗体。,3.,再加入酶标记抗抗体，则结合,为,抗原,-,抗体,-,酶标记抗抗体复合物,。,4.,酶催化底物并显色,德国拜发（部份试剂盒）、勤邦生物采用,方法二,:,二步反应,操作比较简单,有放大灵敏度和增强准确度的作用,方法,二,德国拜发、荷兰,ED,采用,固相载体,酶,抗原,酶标记,抗体,样本,/,标品,(,抗原,),抗抗体,抗体,间接竞争法,(,包二抗,),：,1.,将抗抗体（二抗）包在固相载体上。,2.,加入抗体，则结合为抗抗体,-,抗体复合物。,3.,加入样本和标准品及酶标记抗原，两者竞争结合抗体。,4.,酶催化底物并显色。,方法三,:,二步反应,操作比较简单,在加样本时容易出现时间差而影响检测结果的准确度,.,方法,三,一步法反应：,1.,将抗原（或二抗）包被在固相载体上。,2.,加入样本和酶标记二抗或酶标抗原,后，最后加入抗体，,三种一起混合,反应。形成抗原（或二抗）,-,抗体,-,酶标记抗抗体（或抗原）复合物。,4.,酶催化底物并显色,“,一步法反应,”,德国拜发、勤邦生物、意大利,Euroclone,（部份试剂盒）采用,固相载体,方法四,:,操作简单,方便,快速,.,反应灵敏,.,酶,抗抗体,酶标记,抗抗体,抗体,样本,/,标品（抗原）,抗抗体,方法,四,标准品浓度关系,标准,1,标准,2,标准,3,标准,4,标准,5,标准,6,微,孔板,抗体示意图,酶,酶,标二抗,TMB,TMB,加入标准品,/,样本和抗体,后加,先加,孵育,洗板过程示意图,未结合的抗体、标准品、,游离态的抗体抗原结合物,加入酶标二抗,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,孵育,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,加入底物和显色剂,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,后,加,A,液,先,加,B,液,显色,有经验者可根,据颜色深浅调,整显色时间,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,终止,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,0.5M H,2,SO,4,反应终止后颜色示意图,标,准,曲,线,样,本,显,色,情,况,标准,1,标准,2,标准,3,标准,4,标准,5,标准,6,得出读数以后,再用专用软件,进行分析即可,无酶标仪不加终止液直接比对,标,准,品,显,色,情,况,样,本,显,色,标准,1,标准,2,标准,3,标准,4,标准,5,标准,6,样本,1,样本,2,样本,1,的显色情况可以看出大概在标准,2,与标准,1,的颜色之间，即可得出其样本中的待测物含量在标准,1,与标准,2,之间，再乘上样本的稀释倍数以后即可得出该样本的最终含量范围。,同理可以看出样本的检测含量在标准,5,与标准,6,的浓度之间，再乘上样本的稀释倍数以后即得到该样本的大概含量。,ELISA,整个流程示意图,后加,先加,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,后,加,A,液,先,加,B,液,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,酶,2M H,2,SO,4,洗板,洗板,显色,混匀,拍干,拍干,注意事项,1,、,实验前,检查酶标仪和打印机工作是否正常,。,2,、,试剂盒,反应温度为,25,度或,37,度,，,要提前开空调或恒温箱，并调整好温度。,3,、,使用之前将所有试剂温度回升至室温,25,。使用之后立即将所有试剂放回,2-8,冰箱。,4,、,洗板所用水为去离子水，若没有制备去离子水的仪器，也可使用纯净水。,5,、,在,ELISA,分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是,ELISA,测定程序中的要点。在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。,注意事项,6,、,反应终止液为,2M,硫酸，避免接触皮肤。,7,、,不要使用过了有效日期的试剂盒，,稀释或搀杂使用会引起灵敏度、,OD,值的变化,。,不要交换使用不同批号的盒中试剂。,8,、,储存条件,保存试剂盒于,2-8,，,不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。,9,、,试剂变质的迹象显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。,0,标准的吸光度值小于,0.5,个单位（,OD450nm0.5,）时，表示试剂可能变质,。,三、开展检测项目时常遇到的问题与解决方案,在以前，我们常使用两种或三种试剂盒来进行日常检样工作，但随着检测项目的增加和试剂盒产家的不同，在检测过程中往往出现一些由于,操作误差,而带来不必要的损失。,如：前处理方法混淆、试剂盒点板时的温度或反应时间出错等。,1,方案（前处理）,（,1),针对每种试剂盒的前处理，制定出,前处理,SOP,操作控制指南,，防止操作过程中出现前处理方法上的混淆，加强对检测一线的人员进行培训、考核。,（,2,）在进行添加回收实验时，先设计好添加浓度与对应的添加量，需注意详细记录,添加过程,，防止因计算失误而影响添加效果。,1.2,方案（点板）,（,1,）设置,专人专项目制度,，建立每种试剂盒点板操作,SOP,控制指南,，在检测过程中填写检测记录，包括开始点样品和抗体的时间，反应时间，洗板后加酶时间等等，做到,每一步有据可查，每一环节有标可依,。,（,2,）在更换试剂或耗材的时候，需要进行,防更换影响测定,，避免由于此类原因给检测中造成损失。,（,3,）在,一人同时点多种试剂盒板的时候,，要注意提前区分好每种试剂盒的试剂，,防止,在实验过程中,出现反应时间和所用试剂混淆,。,报告方式,定量分析 用已知量的标准品做,ELISA,测定，绘制标准曲线，,ELISA,的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。现有的,ELISA,定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。因此不能用定性试剂盒做定量分析。,灰区概念,把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将检测限值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内需要用确证方法进行确证实验。,2,仪器设备,酶联免疫实验室需要的设备应根据实验室实际条件来进行配备。主要的实验仪器有：,能进行,50ml,管离心的离心机（非冷冻也可）；,组织匀浆器；,移液器（,20-200,l,；,100-1000,l,；,50-300l,八道排枪,）；,电子天平（,0.01g,）；,涡流仪；,具有吹氮气或空气的多道吹干装置；,酶标仪,(,部份需要另配打印机,),；,电脑（用于数据分析与储存）,2.1,仪器质控,为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（,SOP,），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），温箱，洗板机和酶标仪。,移液器：,ELISA,加样量小（,20-200,l,），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在,5%,以内；,恒温箱,经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有,1,的误差；,洗板机,每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过,2ul,，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；,酶标仪,经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。,3,、试剂盒选择,应尽量选择正规厂家，产品经相应政府部门审核认可，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。,灵敏度：,有二层含义，,1,）为试剂检出被检物质的最低量的能力；,2,）为试剂对大量样品中阳性检出的能力。,特异性：,常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标。,精密度：,ELISA,试剂一般指其批内,CV,，其值应小于,15%,；定量试剂应同时考察线性范围,准确度：通过添加回收实验进行评价。,简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。,安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。,经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。,试剂评价：需要有权威的确证方法确证的样品进行检测。,样本前处理注意事项,一、均质,组织样本,肉、肝食品类：,切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。,水产样品：,去除样品的非食用部分，食用部分切细，用绞肉机反复绞三次，混合均匀,;,原料表面较脏时,需适当用清洗。,蛋：,鲜蛋去壳，蛋黄和蛋白充分混匀。,水果、蔬菜类：,先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。,二、振荡提取,将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中，振荡，使容器内的样品与提取溶剂充分接触，以深入到样本组织内部提取待测组分。,振荡方式：,振荡器上进行上下、往返式振荡。,手摇式上下振荡,注：,1,、在组织样本中加入有机溶剂之间提取时，应边加边振荡，防止组织凝结成团，不利于提取。,2,、在用有机溶剂提取过程中，如果出现乳化现象，解决的方法有：用细头轻轻的搅拌，破坏乳化后，再重复离心。再加入适量的提取剂，重新振荡。注意离心后的操作要保证样本的稀释倍数不变。,三、浓缩,由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去处全部有机溶剂进行溶剂转换。相当于试剂盒前处理步骤中把样本在,60,度氮气下吹干，再用复溶液溶解干燥残留物。,浓缩方式：,氮气吹干除杂,压缩空气吹干除杂,注意：,1,、在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，防止杂质干扰。,2,、在吹样本是，针头应在液面上空，避免与样本接触，防止产生交叉污染。,3,、样本吹干后应立即取下，避免吹的时间过长，影响最终检测结果。,4,、不同的药物，吹干后样本的保质期不同，提倡待样本回到室温后立即复溶。,四、净化,经过提取的待测组分，提取物中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质，将待测组分与杂质分离的过程，我们把它称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的最常见的净化是：液液分配法,比如：,用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷，在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象，可以,60,度水浴加热，至乳化现象消失或减弱后，加大离心转速进行离心。,硝基呋喃代谢物检测过程中常见问题,硝基呋喃代谢物有四种：,3-,氨基,-2-,唑烷基酮,(AOZ),、,5-,甲基吗啉,-3-,氨基,-2-,唑烷基酮,(AMOZ),、氨基脲,(SEM),和,1-,氨基,-2-,内酰脲,(AHD),在检测过程中也需要同其它项目一样进行添加回收测评，这其中需要注意以下几个问题。,代谢物在组织中是与蛋白呈结合状态，采用普通的有机溶剂或缓冲液，是无法提取该代谢物的。需要用盐酸水解后才能使呋喃类代谢物游离，所以在加入去离子、盐酸和,2-,硝基苯甲醛,(2-NBA),混合均匀后，其,pH,应在,1-3,之间，否则不利用水解代谢物。,在衍生化过程中，温度和时间决定其衍生化产率，衍生化后在加入氢氧化钠和磷酸氢二钾时，其,pH,应在中性左右。由于部份样本的缓冲能力不同，所以需对其,pH,进行测定，因为在酸性或碱性环境中，不利于呋喃类代谢物的提取回收，同时也容易出现假阳性。,硝基呋喃代谢物添加回收的几种误区：呋喃类代谢物提取过程通常分三个关键步骤：水解,-,衍生化,-,提取,(1),采用标准曲线的最大标准浓度进行添加回收。如德国拜发和我公司,AOZ,试剂盒中的第,6,个标准点,4.05ppb,，,AMOZ,试剂盒中的第,6,个标准点,8.1ppb,。因为这些标准品是已经经过衍生化后的标准品，不能代表样本前处理实验中的加酸水解和加衍生化试剂衍生这两个步骤，所以就算回收率很高，但失去了实际参考价值。,（,2,）完全依赖未衍生的代谢物标准品进行添加回收。因部份未衍生的代谢物在配制成标准品后有一定的有效期，会存在潜在的不稳定因素，而且添加回收仅能考证衍生化和提取两个关键点，不能验证从组织蛋白中水解呋喃类代谢物的过程，因此也有一定的局限性。,最好的评价方案：采用经,LC-MS-MS,确证的阴阳性样品，留作质控样品，对检测的样本和试剂盒进行质量评价。这也是实验室所出数据可信度最具说服力的关键点。,（一）肌肉、肝脏、水产（鱼虾等）组织前处理方法,用均质器均质样本；,称取,1.00.05g,均质后的组织样本，分别加入,4ml,的去离子水、,0.5ml 1M,盐酸溶液（见配液,3,）和,100,l,衍生化试剂,用振荡器充分振荡,2min,；,在,37,过夜孵育,（大约,16h,）；,分别加入,5ml 0.1M,磷酸氢二钾溶液（见配液,2,）、,0.4ml 1M,氢氧化钠溶液和,8ml,乙酸乙酯，用振荡器剧烈振荡,30s,；,3000g,以上，室温（,20-25,/68-77,）,离心,10min,；,取,5.6ml,乙酸乙酯相至,10ml,干燥的玻璃试管中，于,50,60,氮气流下吹干；,加入,1ml,正己烷（或正庚烷），用涡旋仪涡动,30s,，再加入,0.7ml,复溶工作液,，用涡旋仪涡动,1min,充分混匀；,3000g,以上，室温（,20-25,/68-77,）,离心,10min,；,除去上层有机相，取下层水相,50l,用于分析。,稀释倍数：,1,呋喃类药物代谢物统一前处理方法,氟喹诺酮类药物试剂盒现有的样本前处理方法中，用二氯甲烷作为提取剂,注意：,二氯甲烷的密度比水大，离心完后，二氯甲烷在下层，须先用加样器吸尽上层废液后，再按要去取适量的下层吹干。,在用加样器吸取下层的有机相时，正常操作往往取量不准确，此时最好用带有刻度，且刻度相对较准确的玻璃管来定量。,上诉情况对有经验的试验员还可以通过灵活控制加样器来控制取样的准确性。,在振荡过程中要注意安全。二氯甲烷在振荡的过程中，如果离心管盖密封性不时很好，往往容易爆开，在进行振荡时，不要让离心管口对准自己或者其他人，避免溅到自己或者他人身上。,试剂盒在使用前充分回温很必要，如回温不充分该项目曲线影响较明显。,酶标分析过程中的注意事项,样本的检测是基于抗原抗体的反应，根据标准曲线，判定样本最终的药物含量。它要求加样的准确性和洗板的一致性。在整个加样的过程中注意实验室温度的恒定，保证反应在试剂盒所示的温度下进行。,一、常见加样方式,A,、吸一打二,B,、吸二打一：在实际操作过程中，提倡用“吸二打一”，用这种方式，有如下几种好处：,a,、加样过程中在板空内不出现或者很少出现气泡,b,、提高加样速度，缩短前后样本反应的时间差。,在加样的过程中还应细心注意避免出现下列现象：,A,、加样的过程中漏加或者重加；,B,、加样的过程中忘记更换吸头；,C,、样本的重加或者漏加,D,、忘记记录样本的加样顺序,二、常见的洗板方式,A,、洗板机洗板；,B,、多道孔加样器洗板；,C,、多孔吸头洗板,在洗板的过程中，确保每孔所加洗涤液量的均一，按说明书操作，不可过多，避免溢出板孔，污染其它样本，过少，则达不到洗涤的效果。,三、甩板,快速甩尽板孔内的液体。防止板孔里的液体对流，产生交叉污染。,四、拍板,轻轻的在吸水纸上扣干板孔内的液体。,五、显色,值得注意的是，并非试剂盒中所规定的显色时间是绝对的，因为试剂盒的吸光度值会受环境中的,温度、湿度、酶标板反应时,所接触到的物品的导热度等有关，实验操作人员在加完显色液后，可根据颜色的深浅适当的,延长或者缩短显色时间,。防止出现吸光值接近或高于酶标仪的最高检测灵敏度（,OD,值在,2.5-3.0,之间），这样会间接影响到检测结果，如,出现曲线前半部份梯度不明显或颠倒数值等现象，也就造成了一些假阳性或部份检测结果偏低的现象,关于勤邦,-,公司简介,勤邦生物是专业从事食品安全检测的高新技术企业，始终致力于食品安全快速检测设备和免疫试剂的,自主研发,、生产、销售，产品涵盖了食品安全检测的,完整产业链,。,勤邦生物生产研发基地,(,约,8000,),10,万级净化车间，局部,1,万级。达到,GMP,要求的生产车间（约,1000,）,研发实验室（约,3000,）,SPF,级实验动物房（约,800,）,行政办公区域（约,2500,）,四、勤邦概况,62,应用开发,平台,仪器,开发平台,食品中残留化学污染物抗原抗体,200,余种,其他小分子药物储备抗原抗体,100,余种,兽药残留检测系列,真菌毒素检测系列,农药残留检测系列,微生物检测系列,转基因检测系列,成分检测系列,理化检测及食品安全检测箱,集机械设计、光路分析、软件开发于,一体,开发,:,免疫试剂配套仪器,本行业通用仪器等,关于勤邦,-,四大科研平台,原材料,抗原抗体合成平台,新技术研发平台,ELISA,技术,胶体金检测技术,化学发光检测技术,上转换发光技术,荧光微球,免疫磁珠,核酸检测技术（,lamp,）,PCR,技术,四、勤邦概况,产学研合作,与,国内高校、,科研院所、企业等开展技术开发、,标准制定、成果转化、人才,培养等,多方面,合作。,邀请国内外权威专家成立企业,顾问专家组，,为重大关键问题提供指导及,支持。,与高校、科研院所联合组建,实习培训基地，,实现资源共享及高端,人才培养。,中国农业科学院、中国疾病预防控制中心、中国检科院煤炭研究总院、北京市理化分析测试中心,首农集团,博奥生物,天津三箭生物,科兴生物,北京陆桥,清华大学,中国农业大学,北京农学院,南开大学,北京工商大学,浙江工商大学,贵州大学,勤邦产学研,高校,科研院所,企业,四、勤邦概况,酶联免疫试剂盒,产品及胶体金,试纸,条约,100,种，荧光免疫微球产品,3,种；,涵盖畜类、禽类、水产、乳业、饲料、蜂产品等食品行业；,每年新开发和改进的技术超过,15,项,以上。,10,余种,自主创新产品为国际首创产品,，,30,余种,产品为国内,首创。,便携式胶体金读数仪实现检测数据可存储、可追溯；,全自动化学发光仪实现高通量、高效率检测；,勤邦产品,四、勤邦概况,实验室配套系列仪器,酶标仪,农残检测仪,兽药残留快速检测仪,新型控,温,摇床,食品安全快速检测箱,紫外可见分光光光度计,DPS-20,超声,机械,双模,式匀浆器,上百种实验室必备,的小型,设备,为客户提供全方位的食品安全检测方案服务,四、勤邦概况,2014,年国家农业成果转化项目,2013,年国家重大科学仪器项目,2012,年国家科技支撑计划项目,2011,年国家十二五科技支撑项目,2010,年国家十二五农业科技项目,2009,年国家,863,计划农产品质量分子检测技术课题,2009,年北京市工业促进局发展专项,2008,年国家农业成果转化项目,2008,年国家火炬计划,2007,年国家十一五科技支撑计划项目,2006,年北京市食品安全重大专项等,2004,年国家十五科技攻关项目,科技项目,四、勤邦概况,1,个国家级奖项：,国家科技进步二等奖,8,个省部级奖项：,北京市科技进步一等奖,3,项、天津市科技进步一等奖,1,项、中国食品科学技术学会科技创新一等奖、全国先进生产力优秀企业奖、中国质量评价科技创新企业优秀奖、北京市科技进步三等奖,20,个优秀产品荣誉：,国家重点新产品,2,项、北京市高新技术成果转化产品、北京市新技术新产品,17,项等,57,个产品资质认定：,科技成果鉴定、农业部兽药残留检测试剂批文,四、勤邦概况,国家火炬计划重点高新技术企业,北京市企业技术中心,北京市工程技术研究中心,北京市科技研究开发机构,北京市专利示范企业,企业知识产权管理标准化单位,企业荣誉资质：,四、勤邦概况,关于勤邦,-,我们的市场,打破进口试剂在国内垄断的,第一先驱,在,4000,多,个食品龙头企业检测实验室应用,为,100,多,家食品加工企业规划建设实验室,在上海、广州、武汉、大连等城市建立,23,个办事处,市场遍及中国、欧盟、美国、东南亚等,34,个国家和地区,以持续的成长 占据广阔市场,四、勤邦概况,