海洋保健食品-第七章海洋保健食品的功能评价.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,#,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,海 洋 保 健 食 品,第,七,章,海洋保健食品的功能评价：,动物实验,是指声称具有特定保健功能或者以补充维生素、矿物质为目的的食品，即适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的，并且对人体不产生任何急性、亚急性或者慢性危害的食品。,保健食品：,学 习 要 求,掌握保健食品毒理学评价和功能评价的要求,掌握实验动物的概念及分类,熟悉保健食品评价的法规与标准,熟悉,保健食品功能评价的实验项目,了解保健食品注册相关程序及要求,一、概述,二、保健食品毒理学评价,三、保健食品功能学评价：动物实验,内 容 提 纲,6,客户提出检验要求,提供相关材料,出具受理通知书,卫生学、稳定性试验,毒理学检验,功能学检验,特定功效成分,感官指标,理化指标,微生物指标,急性毒性、遗传毒性,亚慢性、慢性毒性,动物实验,人体试验,检验报告,客户接受报告,保健食品注册检验受理程序,1,、评价程序和检验方法依据,国务院:中华人民共和国食品卫生法(,2015,),卫生部：保健食品管理办法（,2013,）,卫生部：新食品原料申报与受理规定和新食品原料安全性审查规程(20,1,3）,卫生部：食品安全性毒理学评价程序和方法,(,GB15193.1-2014,）,保健食品功能学评价程序与检验方法规范,（,2003,）,SFDA：,保健食品注册与备案管理办法（20,16,）,国家安全风险评估中心等单位,保健食品注册检验机构及检验项目,检验机构名称,注册检验项目范围,国家食品安全风险评估中心,安全性毒理学试验、功能学动物试验（,1,、增强免疫力功能,2,、辅助降血脂功能,3,、辅助降血糖功能,4,、抗氧化功能,5,、辅助改善记忆功能,6,、促进排铅功能,7,、清咽功能,8,、辅助降血压功能,9,、改善睡眠功能,10,、促进泌乳功能,11,、缓解体力疲劳功能,12,、提高缺氧耐受力功能,13,、对辐射危害有辅助保护功能,14,、减肥功能,15,、改善生长发育功能,16,、增加骨密度功能,17,、改善营养性贫血功能,18,、对化学性肝损伤有辅助保护功能,19,、调节肠道菌群功能,20,、促进消化功能,21,、通便功能,22,、对胃粘膜损伤有辅助保护功能）、功效成分或标志性成分检测、卫生学试验、稳定性试验、复核检验,中国检验检疫科学研究院综合检测中心,安全性毒理学试验、功能学动物试验（,1,、增强免疫力功能,2,、辅助降血脂功能,3,、缓解体力疲劳功能,4,、调节肠道菌群功能能,5,、通便功能）、功效成分或标志性成分检测、卫生学试验、稳定性试验,8,2,、实验动物,实验动物（,laboratory animals,LA,）是指人工培育，来源清楚，遗传背景明确，对其携带的微生物和寄生虫实行监控，用于生命科学研究、药品与生物制品生产和检定以及其他学科研究的动物。,遗传学要求,微生物和寄生虫监控要求,应用要求,三大特点,实验用动物,实验用动物实际上是指一切可以用于实验的动物，包括：实验动物，野生动物，经济动物、观赏动物。,常用实验动物,小鼠，大鼠,，豚鼠，地鼠，家兔，猫，犬，鸡，小型猪，猕猴等。,3,、实验动物品系分类,一般按遗传背景分类：,分为四类：,近交系；,突变系；,封闭群；,系统杂交动物,1,）近交系（,Inbred Strain,）,概念：,同胞兄妹交配（繁殖）,20,代以上，近交系数达,98.6%,以上，群体基因达到高度,纯合,和稳定的动物群，称之为近交系。,近交系数：,群体中两个等位基因源于同祖先的同一基因的概率。,一般近交,8,12,代的近交群没有实用价值，只有连续,20,代以后，群体基因才能达到纯合和基本稳定。,近交系动物的特点：,a,基因位的纯合性：,纯合率达,98.6%,，因而能繁殖出完全一致的纯合子后代，品系内个体繁殖的后代不会出现性状分离。,使用近交系动物实验时，不会因为隐性基因暴露而影响试验结果。,b.,遗传的同源性,c.,遗传的长期稳定性,d.,均一性,e.,遗传组成的独特性,f.,国际分布性,目前常用的近交系实验动物：,目前有：,250,个小鼠品系，,111,个大鼠品系，,20,个家兔，,14,个豚鼠品系。,常用的小鼠、大鼠近交系：,小鼠：,C,57,BL,，,C,3,H,，,BALB/C,，,DBA/2,等。,大鼠：,F,344,，,LEW,，,BN,，,SHR,，,DA,等。,C,57,BL,BALB/C,2,）封闭群（,Closed Colony,）,概念：,又称远交原种，或非近交系。把,5,年以上不从外引种，只在群内随机配对繁殖，而生产的动物，群内有效大小应保持在,50,只以上。,特点：,a.,杂合性,，避免了近交衰退现象，生命力较强，易于生产，成本低。多用于预试验，教学及一般实验中。,b.,具有,异质遗传,，常用于人类遗传学研究，药物筛选，毒性试验等方面。,c.,遗传特性相对稳定，但试验结果的重复性，一致性低于近交系、系统杂交,动物。,常用的封闭群动物：,小鼠：,KM,，,NIH,，,ICR,，,LACA,，,大鼠：,Wistar,，,SD,，,兔：,青紫兰兔，新西兰兔。,KM,Wistar,SD,新西兰兔,3,）突变系（,Mutant Strain,）,概念：,正常染色体基因发生突变，具有了各种遗传缺陷，将需要的某种遗传缺陷动物，再进行定向培育成具有突变基因的近交系，称为突变系。或利用遗传工程方法将突变基因导入已育成的近交系，这种具有突变基因的近交系也称突变系。,突变系动物的特点和应用,突变系动物可以作为人类疾病的动物模型。,常用突变系动物：,小鼠：,100,多种。如，肥胖症小鼠（,od,），糖尿病小鼠（,db,）,裸鼠（,nu,）等。,大鼠，,20,多种。如，新西兰高血压大鼠（,GHR,），米兰高血压（,MHS,），粮尿病大鼠（,di,），肥胖症大鼠（,fa,），白内障大鼠（,rc,）等。,4,）系统杂交动物（,Hybrid Animal,）,概念：,两个不同的近交系杂交所产生的,F1,代动物。,F1,动物具有杂交优势，生命力较强。,特点及应用,系统杂交动物有许多优点，在某些方面比近交系更适用于实验研究。,a.,杂交优势：,抗病力、适应力强，对实验处理耐受性强，适合于长期慢性实验。,b.,遗传和表型上的一致性：,F1,有与近交系相似的个体均质性。加上上述优点，广泛适用于营养，药物，病原体和激素的生物评估。,c.,具有杂合的遗传组成：,可同时接受两个亲本品系的细胞、组织，器官和肿瘤移植。,4,实验动物的级别分类,级别分类，一般是按实验动物的微生物背景划分的，这是实验动物质量控制的一个重要方面。,国际上一般分为四级,：,无菌动物,（,germfree animal,GF,）,悉生动物,（,gnotobiotic animal,GN,）,无特定病原体动物,（,specific pathogen free animal,SPF,）,普通动物,（,conventional animal,CV,）,对微生物的控制要求,GF,：,以无菌技术获得，不带任何微生物和寄生虫，在隔离系统饲养。,GN,：,带有明确的微生物丛，无菌条件饲育，在隔离系统饲养。,SPF,：,不带指定的病原微生物和寄生虫，在屏障系统饲养。,CV,：,微生物、寄生虫携带性情况不明，但不能带有人畜共患和烈性传染病原体，在开放系统饲养。,实验动物标准化,生产条件、动物质量和动物实验条件的标准化。,动物实验条件,实验动物生产条件,相匹配,影响因素,遗传,微生物,/,寄生虫,环境,营养,一、概述,二、保健食品毒理学评价,三、保健食品功能学评价：动物实验,内 容 提 纲,保健食品评价,食品毒理学评价,食品功能学评价,食品卫生学、稳定性评价,动物实验,25,1,、食品毒理学评价常用实验动物,常用的实验动物,1.,大鼠（,Rattus norvegcus,）,(,常用，重要,),哺乳纲啮齿目鼠科。食性广泛，寿命,-3,年，性成熟期,2-3,月，孕期,30,天，一年产仔,4-7,胎，哺乳期,30,天。,饲养；安静、通风、,18-25,、湿度,30-50%,。长方铁丝笼、,5,只、雌雄分养。,饲养方法上午喂一次，,30-35g,。清洁水。,26,2.,小鼠（,Mas musculus,）,(,常用,),哺乳纲啮齿目鼠科，寿命,2,年，性成熟期雌：,35-55,天，雄：,45-60,天，孕期,20-25,天，一年产仔,4-9,胎，哺乳期,30,天。,饲养,:,安静、通风、光线较暗、,18-25,、湿度,50-60%,。长方铁皮鼠盒、,10,只、雌雄分养。生长速度快、耗粮少、易捉。,饲养方法：上午喂一次，,30-35g,。清洁水。,27,2,、保健食品的毒理学评价原理与方法,对保健食品的毒理学评价是确保人群食用安全的前提。,严格按照卫生部,食品安全性毒理学评价程序和方法,GB15193,进行，,主要评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中使用的,化学和生物物质,以及上述过程中产生的和污染的,有害物质、食物新资源及其成分和新资源食品,。,对于功能食品及功效成分必须进行,食品安全性毒理学评价程序和方法,中规定的,第一、二阶段,的毒理学试验，依据评判结果决定是否进行,三、四阶段,的毒理学试验。,若功能食品的原料选自,普通食品原料,或,已批准的药食两用原料,则不再进行试验。,28,3,、毒理学评价试验的四个阶段与试验原则,（,1,）试验的四个阶段,第一阶段：,急性毒性试验，包括经口急性毒性（,LD50,）和联合急性毒性。,第二阶段：,遗传毒性试验、传统致畸试验、短期喂养试验。,第三阶段：,亚慢性毒性试验（,90,天喂养试验）、繁殖试验和代谢试验。,亚慢性毒性：,材料或其浸提液每天一次或多次给予后，在寿命期的一段时间内,(,不超过动物寿命期的,10%,，如大鼠一般不超过,90,天,),引起的不良反应。,第四阶段：,慢性毒性实验（包括致癌试验）,29,（,2,）功能食品特别是功效成分的毒理学评价原则：,凡属,我国创新的物质,：,四个阶段,的试验。,凡属与已知物质（指经过安全性评价并允许使用者）的化学,结构基本相同的衍生物或类似物,：根据,第一、二、三,阶段毒性试验结果判断是否需进行第,四,阶段的毒性试验。,凡属,已知,的化学物质，世界卫生组织已公布每人每日容许摄入量（,ADI,），同时又有资料证明我国产品的质量规格与国外产品一致：可先进行第一、二阶段毒性试验，若试验结果与国外产品的结果一致，一般不要求进行进一步的毒性试验，否则应进行第三阶段毒性试验。,30,食品,新资源,及其食品：应进行,第一、二、三,个阶段毒性试验，以及必要的人群流行病学调查。必要时应进行第四阶段试验。若根据有关文献资料及成分分析，未发现有或虽有但量甚少，不至构成对健康有害的物质，以及较大数量人群有长期食用历史而未发现有害作用的天然动植物（包括作为调料的天然动植物的粗提制品）可以先进行第一、二阶段毒性试验，经初步评价后，决定是否需要进行进一步的毒性试验。,凡属毒理学,资料比较完整,，世界卫生组织已公布日允许量或不需规定日允许量者，要求进行,急性毒性试验和一项致突变试验,，首选,Ames,试验或小鼠骨髓微核试验。,31,凡属有一个国际组织或国家,批准使用,，但世界卫生组织未公布日许量，或资料不完整者，在进行,第一、二,阶段毒性试验后作初步评价，以决定是否需进行进一步的毒性试验。,天然植物提取的,单一组分，,高纯度,的添加剂，凡属,新产品,需先进行,第一、二、三阶段,毒性试验，凡,属国外已批准使用,的，则进行,第一、二阶段,毒性试验。,凡属尚无资料可查、国际组织,未允许使用,的，先进行,第一、二,阶段毒性试验，经初步评价后，决定是否需进行进一步试验。,32,复习思考题：,（,1,）,保健,食品评价为什么要进行毒理学评价？评价项目包括哪些？,（,2,）,实验,动物的概念、级别及分类有哪些？,（,3,）,近交系,、突变系、封闭群、系统杂交动物的特点及各自的主要品系？,一、概述,二、保健食品毒理学评价,三、保健食品功能学评价：动物实验,内 容 提 纲,海洋保健食品的功能评价,动物实验,人体试食实验,细胞水平功能检验,应用于保健食品审评的保健食品功能学共有27个项目。,其中需要做人体试食试验的项目有,20个,；,有7个项目不需做人体试食试验；,有15个项目既要做动物实验，又要做人体试食试验；,有5个项目只需做人体试食试验，而不需做动物实验（详见下表）,。,保健食品功能一览表,序号,项目,需动物实验,需人体试食试验,1,辅助降血脂功能,2,辅助降血糖功能,3,抗氧化功能,4,辅助改善记忆功能,5,促进排铅功能,6,清咽功能,7,辅助降血压功能,8,促进泌乳功能,9,减肥功能,10,改善生长发育功能,11,改善营养性贫血功能,12,调节肠道菌群功能,13,促进消化功能,14,通便功能,15,对胃粘膜损伤有辅助保护功能,保健食品功能一览表,序号,项目,需动物实验,需人体试食试验,16,缓解视疲劳功能,17,祛痤疮功能,18,祛黄褐斑功能,19,改善皮肤水份功能,20,改善皮肤油份功能,21,增强免疫力功能,22,改善睡眠功能,23,缓解体力疲劳功能,24,提高缺氧耐受力功能,25,对辐射危害有辅助保护功能,26,对化学性肝损伤有辅助保护功能,27,增加骨密度功能,：,“,”,表示需要；,“,”,表示不需要。,（一）检验时限,39,此七种功能只需进行动物试验，不需要进行人体试验,增强免疫力,改善睡眠,对化学性肝损伤有辅助保护,对辐射危害有辅助保护功能,缓解体力疲劳,提高缺氧耐受力,增加骨密度,1,、增强免疫力功能检验,细胞免疫功能的检测,体液免疫功能的检测,单核巨噬细胞功能的检测,NK,细胞功能的检测,ConA,诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,小鼠迟发型变态反应,抗体生成细胞检测,血清溶血素的测定,小鼠碳廓清实验,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,乳酸脱氢酶（,LDH,）测定法,1,、增强免疫力功能检验,实验动物,推荐用近交系小鼠，,18-22g,，单一性别，每组,10-15,只,剂量分组,至少设置三个剂量组和一个阴性对照组，必要时设置阳性对照组或空白对照组。剂量选择应合理，以人体推荐量的,10,倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，尽可能找出最低有效剂量。,受试样品给予时间,30,天，必要时可延长至,45,天,增强免疫力功能的结果判定,增强免疫力功能判定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核,巨噬细胞功能、,NK,细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品增强免疫力。,NK,细胞活性结果判定：,测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。,测定实验的两个剂量组结果阳性，可判定,NK,细胞活性结果阳性。,细胞免疫功能结果判定：,体液免疫功能结果判定：,单核,巨噬细胞功能结果判定：,1,）,ConA,诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应（,MTT,法）,ConA,：刀豆蛋白,A,；,MTT,：四甲基偶氮唑盐,原理：,当,T,淋巴细胞受,ConA,刺激后发生母细胞增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将,MTT,分解为蓝紫色结晶显色，其光密度值能反映细胞的增殖情况,。,脾细胞悬液配置,无菌条件下取小鼠脾脏，置于盛有适量无菌,PBS,液的平皿中；,切碎小鼠脾脏，纱网过滤，制成单细胞悬液；,PBS,液洗,2,次，每次,1000rpm/min,，离心,5min,；,细胞悬浮于,1ml,完全培养基中；,台盼兰染色，计数活细胞数（应在,95%,以上）；调整细胞浓度为,3x10,6,个,/ml,。,淋巴细胞增殖反应,脾细胞悬液加入,96,孔培养板中，,100,l/,孔；,实验组加最适剂量的,ConA,液，,5%CO2,，,37,培养箱培养,68h,；,细胞饥饿培养,24h,，加入,CCK8,液，继续培养,4h,；,酶标仪检测,450nm,处光密度值。,结果判定,淋巴细胞的增殖能力,=,加,ConA,孔的光密度值,-,不加,ConA,孔的光密度值,方差分析，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法统计，若,P,0.05,，各组均数间显著性差异，若,P,0.05,，组均数间无显著性差异。,受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该实验结果阳性,2,）小鼠迟发型变态反应实验（耳肿胀法）,原理：,二硝基氟苯（,DNFB,）是一种半抗原，将其稀释液涂抹小鼠腹壁皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激,T,淋巴细胞增殖程致敏淋巴细胞。,4-7d,后将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部产生迟发型变态反应（肿胀）。一般在抗原攻击后,24-48h,达高峰，故于此时测定其肿胀程度。肿胀程度反应迟发型变态反应程度。,DNFB,溶液配制：,新鲜配制，称取,DNFB50mg,，置于清洁干燥小瓶中，将预先配制好的,5ml,丙酮麻油溶液（,V/V=1:1,），倒入小瓶，盖好瓶塞并用胶布密封，混匀后，用注射器通过瓶盖取用。,致敏,激发,小鼠腹部皮肤脱毛，范围约,3cm*3cm,，,DNFB,溶液,50,l,均匀涂抹致敏。,5,天后，用,DNFB,溶液,10,l,均匀涂抹于小鼠左耳（两面）进行激发；,触发,24h,后，游标卡尺测量左右耳廓厚度；,处死小鼠，剪下左右耳；,打孔器取下直径,8mm,的耳片，称重。,各组小鼠在致敏激发后均出现不同程度的耳廓红肿、渗出,，第,3,次激发后各组小鼠皮损处出现轻微结痂。,模型组左耳相比右耳明显变厚，且血管清晰可见。,结果判定,用左右耳重量之差表示迟发型变态反应的程度，受试样品组的重量差值显著高于对照组的重量差值（,P,0.05,），可判定该项实验结果阳性。,注意事项,操作时避免,DNFB,与皮肤接触。,3,）抗体生成细胞检测（,Jerne,改良玻片法）,制备,SRBC,原理：,用绵羊红细胞（,SRBC,）免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的,SRBC,混合，在补体参与下，使分泌抗体的脾细胞周围的,SRBC,溶解，形成肉眼可见的空斑。溶血空斑数可反映抗体分泌细胞数。,SRBC,与脾细胞共孵育,免疫动物,制备脾细胞悬液,制备补体,补体参与,形成溶血空斑,制备,SRBC,免疫动物,制备脾细胞悬液,制备补体,玻片小室的制作,细胞混合液的配制,混合细胞的灌注,取洁净（无油）的载玻片，按图粘三条透明胶带，在胶带上薄涂一层凡士林（勿涂到小室内），然后用镊子取两个盖片，分别放在其上，制成两个小室。用镊子尾端将盖片压平贴牢（保持小室一定体积）。用凡士林将盖片底端（其中的任一端）封住，顶端作为注入细胞混合液。,封小室开口,37,温箱中孵,60,分钟,溶血空斑计数,3.,玻片小室的制作,取洁净（无油）的载玻片，按图粘三条透明胶带，在胶带上薄涂一层凡士林（勿涂到小室内），然后用镊子取两个盖片，分别放在其上，制成两个小室。用镊子尾端将盖片压平贴牢（保持小室一定体积）。用凡士林将盖片底端（其中的任一端）封住，顶端作为注入细胞混合液。,4.,细胞混合液的配制：取小试管一只，将指示细胞悬液与脾细胞悬液，混匀。,5.,混合细胞的灌注：于小室开口一端轻轻将细胞混合液注满小室，记录实际注入的细胞悬液微升数（约,70 ul,）。每个样品注,2,个小室，取其平均值。,6.,用牙签粘取少许凡士林封小室开口。,7.,将作好的标本水平置湿盒中，放,37,温箱中孵,60,分钟,8.,溶血空斑计数：肉眼观察空斑并计数两个小室出现的溶血空斑数。对模糊不清的空斑可在低倍镜下检查，真正的溶血空斑必须中心有一个淋巴细胞，周围为透明区。,全脾脏中抗体产生细胞总数可依下述公式计算：,结果判定,空斑数,/10,6,脾细胞数（或空斑数,/,全脾细胞数）表示抗体生成细胞,受试样品组的空斑数或空斑数,/,全脾细胞数显著高于对照组的空斑数（,P,0.05,），可判定该项实验结果阳性。,4.,小鼠腹腔鸡红细胞实验（滴片法）,原理：,巨噬细胞属机体的非特异性免疫细胞，在有异物侵入的时候，血液中释放出巨噬细胞吞噬异物。,鸡红细胞相对小鼠是异体抗原性物质，当被注入小鼠腹腔后，可引起腹腔巨噬细胞聚集并吞噬，这是衡量机体非特异性免疫功能的主要指标。,利用巨噬细胞对光滑表面如玻璃表面具有黏附的特性，将含有巨噬细胞的腹腔液滴于载玻片上，加入鸡红细胞，孵育一段时间后，冲洗掉未黏附的细胞，固定染色，在显微镜下计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，据此判定巨噬细胞的吞噬能力。,结果判定,用,40,显微镜观察每,100,个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的个数，计算吞噬率和吞噬指数。,受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数与对照组相比，差异均有显著性，方可判定该项结果阳性。,小鼠腹腔中的巨噬细胞,腹水中的巨噬细胞,此七种功能只需进行动物试验，不需要进行人体试验,增强免疫力,改善睡眠,对化学性肝损伤有辅助保护,对辐射危害有辅助保护功能,缓解体力疲劳,提高缺氧耐受力,增加骨密度,二、改善睡眠功能检验,直接睡眠实验,比较对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间的差异，若入睡动物数及睡眠时间增加有显著性，则实验结果阳性。,延长戊巴比妥钠睡眠时间实验,在戊巴比妥钠催化的基础上，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间，睡眠时间延长有显著性，则实验结果阳性。,戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验,注射戊巴比妥钠最大阈下剂量，记录,30,分钟内睡眠动物数，入睡动物发生率显著增加，则结果阳性。,此七种功能只需进行动物试验，不需要进行人体试验,增强免疫力,改善睡眠,对化学性肝损伤有辅助保护,对辐射危害有辅助保护功能,缓解体力疲劳,提高缺氧耐受力,增加骨密度,三、对化学性肝损伤有辅助保护,化学性肝损伤：是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。,根据毒性强弱，亲肝毒物可分为三类,1.剧毒类：包括磷、三硝基甲苯、四氯化碳、氯奈、丙烯醛等。,2.高毒类：砷、汞、锑、苯胺、氯仿、呻化氢、二甲基甲酰胺等。,3.低毒类：二硝基酚、乙醛、有机磷、丙烯晴、铅等。,动物实验方案,1.,四氯化碳肝损伤模型,2.,酒精肝损伤模型,1.,四氯化碳肝损伤模型,测试指标,体重，谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），肝组织病理学检查,结果判定,病理结果阳性，谷丙转氨酶和谷草转氨酶二指标中任一项指标阳性，可判定该受试样品具有对化学性肝损伤有辅助保护功能作用。,2.,酒精肝损伤模型,测试指标,体重，丙二醛（MDA），还原型谷胱甘肽（GSH），甘油三酯（TG），肝组织病理学检查,结果判定,肝脏MDA、GSH、TG三项指标结果阳性，可判定该受试样品对乙醇引起的肝损伤有辅助保护功能，,肝脏MDA、GSH、TG三指标中任二项指标阳性，且肝脏病理结果阳性，可判定该受试样品具有对乙醇引起的肝损伤有辅助保护功能作用。,此七种功能只需进行动物试验，不需要进行人体试验,增强免疫力,改善睡眠,对化学性肝损伤有辅助保护,对辐射危害有辅助保护功能,缓解体力疲劳,提高缺氧耐受力,增加骨密度,四、对辐射危害有辅助保护功能,1.,外周血白细胞计数实验,2.,骨髓细胞,DNA,含量或骨髓有核细胞数实验,3.,小鼠骨髓细胞微核实验,4.,血,/,组织中超氧化物歧化酶活性实验,5.,血清溶血素实验,其中任何两项实验结果阳性，可判定该受试样品具有对辐射危害有辅助保护功能的作用。,THE END,