十一章胚胎移植.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十一章 胚胎移植,胚胎移植技术概述,胚胎移植的意义,国内外发展概况,胚胎移植的基本原则,牛胚胎移植操作步骤,一、概述,（一）概念,胚胎移植是指将一头,良种母畜配种后的早期胚胎取出（或通过体外受精及及其他方式得到体外生产的胚胎），,移植到另一头,同种且生理状态相同,的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程。,也称作借腹怀胎。提供胚胎的个体为供体(Donor)，接受胚胎的个体为受体(Recipient)。,（二）发展概况,1890年 英国第一次兔获得胚胎移植成功,1934年 绵羊,1949年 山羊,1951年 猪、牛,1970年 马,1975年1月 美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会,1980年代 欧洲使用MOET 奶牛育种,(三)胚胎移植的意义,1.充分发挥优良母畜的繁殖潜力,2.缩短世代间隔，加快育种进程,3.简化良种引种方法,4.保存品种资源,5.诱发单胎动物产双胎,6.研究手段,动物繁殖生理学、生物化学、遗传学、细胞学、胚胎学、免疫学、动物育种和进化等学科,1.充分发挥优良母畜的繁殖潜力,以奶牛为例，按照目前的技术水平，供体母牛每隔60d可进行超排处理一次，每次能获得可用胚胎4-5枚，一头良种母牛每年能生产可用胚胎25-30枚，移植到受体内能获得,12-15头,犊牛，而,在自然状态下，一头母牛平均每年只能获得一头犊牛。,(三)胚胎移植的意义,2.加速育种进程,MOET技术能大幅度提高母畜繁殖力，扩大优秀母畜在群体中的影响，增加后代选择强度。,如在奶牛育种中，MOET技术能,获得更多具有高产性能的半同胞和全同胞，在较短的时间内达到后裔测定所要求后代的数量，,提早完成后裔测定工作，增加选择强度和准确性，缩短育种进程。,八戒飞抵岛城跨国娶妻,加拿大846头猪运抵青岛，价值190万美元,（2007-10-17）,成本高，时间长，可用ET代替活体引种。,4.保存品种资源,结合,胚胎冷冻技术,为可保存国家或地区间特有的家畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，还可,降低种质资源保存费用,。活畜保种不仅成本很高、规模有限，而且还容易发生基因漂变。胚胎冷冻保种也优于精液冷冻保种，因为一个胚胎是一个完整的个体，这样，冷冻或冷藏一个胚胎不仅保存了一个个体的基因，也保存了基因组织。,而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，仅在一个世代内即可实现。,胚胎冷冻保种不仅,成本低廉、方法简单,，而且能,避免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质消亡,的风险。,5.诱发单胎动物产双胎,性别控制,避免异性孪生不育症,6.研究手段,目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后代，胚胎移植是,胚胎工程的最后一道,“,工序,”,。,因此，可以说它是,胚胎工程技术的基础。,胚胎移植技术与其他繁育技术的关系,胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一项基础性的、关键的技术,人工授精,核移植技术,发情控制与超数排卵技术,胚胎移植,干细胞技术,胚胎采集、鉴定与冷冻保存技术,胚胎分割技术,卵子体外成熟，体外受精,嵌合体技术,（四）生理学基础、基本原则和条件,1、生理学基础,（1）母畜发情后生殖器官的孕向发育,（2）早期胚胎呈游离状态,（3）不存在免疫问题,（4）胚胎的遗传特性不受受体影响,2、胚胎移植的基本原则,（1）同一性原则（供、受体在,分类上,的相同属性；在,生理上,的一致性；在,解剖位置,上的一致性）。,（2）胚胎的期限,（3）胚胎的质量,（4）供、受体的状况,3、,条件,供体超排反应良好；,胚胎回收顺利；,胚胎质量好、保存可靠；,受体黄体良好；,受体饲养管理条件良好；,技术人员操作熟练；,胚胎操作及移植器械恰当。,(五)胚胎移植的技术程序,包括供体的超数排卵、供体和受体的同期发情处理、供体的发情鉴定与配种、胚胎采集、胚胎的检查与鉴定、胚胎的保存、胚胎的移植,胚胎移植程序示意图,二、胚胎移植的基本步骤,(一)供体和受体的选择,1.供体的选择,遗传学价值高；身体健康（传染病、寄生虫病、生殖系统疾病）；年龄适中；体况适中；发情周期正常；避免应激,2.受体的选择,(二)供体和受体的同期发情,最好12h之内，如果超过24h(牛)或48h(绵羊和山羊)，妊娠率即急剧下降,1、仅对受体进行同期发情处理,2、供、受体同时进行同期发情处理,(三)供体的超数排卵,1.超排方法,（1）已知发情周期供体超排,（2）未知发情周期供体超排,（未知+安排工作+初期周期不稳定）,孕激素+FSH,PG一次注射法,PG二次注射法 同（1）,3.影响超排效果的因素,(1)个体差异 与动物的种类、品种、年龄、胎次、体重及营养情况都有关系,(2)激素 所用激素的种类、用量和注射程序，都会对超排效果有一定的影响,(3)用药时间 发情周期、产后阶段及季节不同，超排结果均有差别（山羊一般可以在注射PGF2后的4896h内发情。可使超排处理安排在周期的第917d的任何一天。但15d以后处理排卵数较多）。,4.超排效果的评判标准,实践中,一半,以上的处理母畜得到满意结果，就认为是成功的。,牛较理想的要求是达到,1012,个，可用胚率65%，可获67个；妊娠率60%，可获34头犊牛，在经济上比较合算。当前一般水平是每头供体牛平均提供,45,个好胚胎。,(四)供体的发情鉴定和配种,供体大多在超排处理后1248h发情，一般在发情后812h输精一次，以后间隔812h再输精一次或自然交配。,(五)胚胎回收与鉴定,1.回收时间,2.回收方法,（离体生殖道、,手术回收,、非手术回收）,实验动物,猪、羊,牛、马,手术回收,场所、器械和人员的准备,供体准备,输卵管回收,子宫角回收,输卵管+子宫角回收,胚胎采集,子宫回收胚胎,输卵管回收,胚胎,超排后的黄体,非正常的卵巢：大卵泡,羊手术回收子宫角胚胎,移植胚胎,受体与产的羔羊,PBS,集卵杯,子宫颈,子宫角,卵巢,3.检胚,剔除异物,检胚吸管,1.吸管2.乳胶管3.玻璃珠,胚胎净化,4.胚胎鉴定-检查和评定质量,(1)形态学法,卵子是否受精。,透明带形状、厚度，有无破损等。,卵裂球的大小、致密程度是否有差异，卵黄间隙是否有游离的细胞或细胞碎片。,胚胎发育阶段与回收时应达到的胚龄是否一致，胚胎的透明度，胚胎的可见结构(内细胞团、滋养层细胞、囊胚腔)是否清晰可见。,A,级;,形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中；,B,级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好；,C,级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多；,D,级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。,胚胎的分级标准,不同发育阶段的正常胚胎和不正常胚胎,1细胞期,2细胞期,4细胞期,8细胞期,密集桑椹胚,桑椹胚,囊胚,扩张囊胚,未受精卵,透明带破损,透明带椭圆,退化变性胚,正常胚胎,异常胚胎,2-cell,4-cell,8-cell,16-cell,Morula,Blastocyst,正常胚胎的形态,(2)体外培养法,(3)荧光(活体染色)法,(4)代谢活性测定法将待鉴定胚胎放入含有葡萄糖的培养液中，培养1h后，测定培养液中葡萄糖的消耗量，每培养1h消耗葡萄糖2g以上者为活胚胎,。,(六)胚胎保存,1.常温保存(1525)通常采用含20%犊牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h,2.低温保存。010,3.冷冻保存 (1)逐步降温法 (2)一步细管法 (3)玻璃化法,(七)胚胎移植,1.移胚方法,2.移胚部位,非手术法,手术法,移植前胚胎装管,手术法将胚胎移植到输卵管,牛胚胎的移植方法,直肠把握法,山羊受体移植,3.影响胚胎移植妊娠率的因素,(1)胚胎因素,包括胚胎质量，日龄，移植胚胎的数量，提供胚胎的供体，胚胎在体外培养的时间，鲜胚和冻胚等。,(2)母体因素,包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫、卵巢的生理状况等。,(3)其他,因素 包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等。,本章小结,重点,胚胎移植步骤,胚胎移植意义,难点,手术法移植和非手术法移植,