中药制剂分析8..ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第四节 薄层扫描法,（,Thin Layer Chromatography Scan TLCS,）,一、定义,薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。,二、特点,具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有,多,通道,效应,，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。中国药典中有32个中成药品种采用该法进行含量测定。,三、仪器及其工作原理,1.薄层扫描仪,中国药典采用,双波长,薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-型等。,2.扫描仪工作原理,3.测定方式,（1）吸收法,适用于有,紫外（可见）吸收,的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中,常用反射法,，因为紫外光不能通过玻板。,（2）荧光法,适用于有,荧光性质,的成分，例如小檗碱等。该法,仅采用反射法,测定，其灵敏度比吸收法高。,4.测定波长,（1）单波长,一般用于,荧光测定法,，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。,（2）双波长,主要用于,吸收测定法,。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较,常用,。测定时，样品波长,（,s）,和参比波长,（,R）,依次扫描斑点，所测吸收度为,A=As AR,。,样品波长（,s）：,即被测成分的,max,参比波长（,R）：,即被测成分的,min,或此波长处无吸收。,外标一点法的直线方程：,C=F A,F,为斜率,外标两点法的直线方程：,、,F,1,为斜率,F,2,为截距,【说明】,在根据药品标准测定样品时，并不需要做标准曲线，按照药品标准规定执行即可。当然，测试者应能从中,明确,该测定是,外标一点法,还是,外标两点法,。,3.操作步骤,（,1）,对照品溶液的制备,（2）,供试品溶液的制备,（3）,点样,一般要求使用,市售,薄层板。,外标一点法,：至少,6,个原点,对照品,（R）,2个（,同一质量,）：,2R,供试品,（S）,4个（,同一质量,）分,2,组：,2S,1,2S,2,外标两点法,：至少,8,个原点,对照品（R）,4,个 分,2,组,大质量,的2个：2R,1,小质量,的2个：2R,2,供试品（S）,4,个（,同一质量,）分,2,组：2S,1,2S,2,对照品与供试品应,交叉,点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当,调整,供试品溶 液的点样量。,外标两点法,外标一点法,（4）,展开,（5）,显色定位,供试品色谱中待测斑点的比移值（,Rf,值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。,（6）,扫描,应,沿展开方向,扫描，不得横向扫描。,（7）,含量计算,外标一点法,求出供试品被测成分（斑点）的质量,Ms=M,R,X,As,A,R,Ms,被测成分的质量,（M n=2）,M,R,被测对照品的质量,As,被测成分吸收度（荧光强度）积分值,（A n=2）,A,R,被测对照品吸收度（荧光强度）积分值（,A n=2）,_,_,_,求出供试品中被测成分的含量,含量,（W/W）,=,Ms X,稀释倍数,取样量,含量,（W/,片）,=,Ms X,稀释倍数,X,平均片重,取样量,外标两点法,求出供试品斑点中被测成分的质量,Ms=,C,+,V,1,C,(V,2,-V,1,)(A-A,1,),(A,2,-A,1,),Ms,被测成分的质量,（mg n=2）,A,1,对照品小点样量吸收度,（,荧光强度,）,V,1,对照品小点样量,（,l）,积分值,（A n=2）,V,2,对照品大点样量,（,l）,A,2,对照品大点样,量吸收度,（,荧光强度,）,A,被测成分吸收度（荧光强度）积分值,（A n=2）,积分值,（A n=2）,C,对照液的浓度,（mg/ml）,_,_,_,_,求出供试品中被测成分的含量（同外标一点法）,五、应用实例,1.,九分散中士的宁的含量测定,九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为,4.55.5mg。,供试品溶液的制备,取本品,10,包，混合研匀。精密称取,2g,置具塞锥形瓶中，精密加氯仿,20ml,与浓氨试液,1ml,，轻轻摇匀，称重，于室温下放置,24,小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液,10ml，,用硫酸溶液,（3300）,分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿,5ml,使溶解，作为供试品溶液。,对照品溶液的制备,取士的宁对照品，加氯仿制成每,1ml,含,0.4mg,的溶液，作为对照品溶液。,测定法,吸取上述两种溶液各,5,l,，,分别,点于同一硅胶,GF254,薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液,。（161214）,的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：,s=254nm,，,R,=325nm,，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。已知：,A,R,19663.07，As20617.25,，,取样量,2.098g,。,解答问题：,采用外标一点法还是外标两点法？,采用什么方法显色定位？,计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）,求出供试品斑点中士的宁的质量,求出供试品中士的宁的含量,Ms=M,R,X =5,l,x,0.4,g/,l,x,=2.1,g,As,A,R,19663.07,20617.25,含量（,mg/,包）,=,Ms X,稀释倍数,X,标示重量,取样量,=,0.0021mg X 5ml X 20ml X 2.5g/,包,0.005ml X 10ml X 2.098g,=,5.0（mg/,包,）,2.,枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定,本品系由,枳实,、大黄和黄连等八味药材制成的水丸。中国药典规定按干燥品计算，每1g含枳实以橙皮苷（C,28,H,34,O,15,）计，不得少于20.0mg。,供试品溶液的制备,取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定（0.5124g），置索氏提取器中，加甲醇90ml，加热回流4 小时，趁热滤过至100ml 量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置250ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。,对照品溶液的制备,精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml 含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。,测定法,精密吸取供试品溶液5,l、对照品溶液,2,l与5l,，分别点于同一,聚酰胺薄膜,上，以甲醇为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，喷以 1三氯化铝的甲醇溶液，放置3 小时，在,紫外光灯(365nm)下定位,。上机进行,荧光,扫描，激发波长：330nm,线性,扫描，（接下页）,测量供试品与对照品荧光强度的积分值,A,R,(2,l,),=885.7,A,R,(5,l,),=979.4 A,S,=835.6，计算，即得。,聚酰胺TLC分离黄酮类成分效果较好故选之。,橙皮苷与AlCl,3,反应显色，在,330nm,紫外光下发射较强的,绿色 荧光,（波长：500nm）。,回答问题：本法采用的是吸收测定法还是荧光测定法？外标一点法还是外标两点法？透射法还是反射法？直线扫描还是锯齿扫描？光源是什么？求算枳实（橙皮苷）的含量（保留三位有效数字），并判断是否符合药典规定。,(V,2,-V,1,)(A-A,1,),(A,2,-A,1,),含量计算,求算出斑点中橙皮苷的质量,Ms=,C,+,V,1,C,=,0.05mg/ml,+,2ul,0.05mg/ml,(979.4,885.7),(5ul,2ul)(835.6,885.7),=0.0198ug(1.98,X10,mg),求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量,含量,（mg/g）,=,Ms X,稀释倍数,取样量,=,-5,1.98,X10,mg,X 2.5 X 10 ul X 1.0 X 10 ul,-5,5,5,5ul,X 5 X 10 ul X 0.5124g,3,=,38.6,