实验室生物安全防护.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,试验室安全与管理 卫检 第2版,第四节 试验室生物安全防护,1,1/52,第四节 试验室生物安全防护,试验室生物安全防护类型,一,惯用生物安全设备,二,个人安全防护用具,三,生物试验室技术规范,四,生物试验室消毒与灭菌,五,2,2/52,试验室生物安全防护类型,一,试验室生物安全防护内容包含,安全设备、个体防护装置和办法,（,一级屏障,）；,试验室,特殊设计和建设（分区、单向气流）要求,（,二级屏障,）；,严格,管理制度和标准化操作程序及规程,（,三级屏障,）,不一样生物安全防护等级试验室,其详细要求各不相同。,3,3/52,（一）BSL-1试验室,1、针对对象,级微生物类别，不引发人或动物疾病微生物,2、基本要求,建设,选址方面无特殊要求,不需要安装生物安全柜,等防护设备,应能预防昆虫和啮齿动物等进入,在能够开启窗户上安置纱窗,应配置消毒设备,在靠近试验室出口处设置洗手池,地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水,3、操作规范,不需要,制订特殊安全操作规程,如用于教学普通微生物试验室等。检测,大肠杆菌、枯草杆菌,4,4/52,1、针对对象,级微生物，公共卫生、临床、医院诊疗试验室,2、基本要求,除满足BSL-1试验室全部要求之外,配置,高压蒸汽灭菌器、化学消毒装置等,消毒灭菌设施,安装不低于II级生物安全柜,试验室门能自动关闭,试验室应,配置洗眼装置、喷淋装置等,需制订专门安全操作规程,（二）BSL-2试验室,如麻疹病毒、沙门氏菌、乙型肝炎病毒、HIV血清学检测等,5,5/52,1、针对对象,级微生物、新发传染病和大容量或高浓度、含有高度气溶胶扩散危险级微生物,2、基本要求,除满足BSL-1、2试验室要求之外,独立建筑物或者在建筑物中,自成隔离区,在主试验室内,设置级生物安全柜,设置不产生蒸汽高压灭菌锅或其它消毒装置,试验室应明确划分为,清洁区、半污染区和污染区,安装独立通风空调系统以,控制试验室气流方向和压强梯度,试验统计等资料经过传真机等发送至试验室外,不得将任何未经消毒灭菌材料带出试验室,制订愈加,严格,生物安全操作规范,（三）BSL-3试验室,多集中在北京，上海，,年建成我国首个移动式P3试验,结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、Q热病原体、HIV(血清学检测除外)、立克次氏体等,6,6/52,1、针对对象,级微生物。试验室隶属于国家或卫生主管机构,。,2、基本要求,除满足BSL-1、2和3级生物安全试验室要求之外,分,安全柜型试验室和穿着正压服型试验室,安全柜型试验室中全部操作均在,级生物安全柜,中进行,正压服型试验室中工作人员必须穿着特殊正压服式保护服装,设置在独立建筑物内，且该建筑,应远离市区,制订,最严格,操作规范,（四）BSL-4试验室,魔鬼式、全封闭式试验室，全球50个，我国仅中科院武汉病毒研究全部1个，中国农科院哈尔滨兽医研究所，在建中,黄病毒、埃博拉病毒、中欧蜱传脑炎病毒,7,7/52,病 源,一级屏障,二级屏障,三级屏障,P1,BSL1,不会引发健康成人疾病,不要求,开放试验台、洗手池,标准微生物操作，无特殊操作规范,P2,BSL2,人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险,1级、2级生物安全柜试验服、手套、若需要则采取面部保护方法,BSL-1外加：高压灭菌锅,BSL1操作外加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、“锐器”安全方法4、生物安全手册，其中要求废物消毒和医疗观察,P3,BSL3,内源性和外源性病源，可经过气溶胶传输，能造成严重后果或生命危险,1级、2级生物安全柜保护性试验服、手套、若需要则采取呼吸保护方法,BSL-2外加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出空气不循环4、试验室内负压,BSL-3 BSL-2操作外加：1、控制进入2、全部废物消毒3、洗涤前，试验服消毒4、有基础血清,P4,BSL4,对生命有高度危险危险性病源或外源性病源：致命、经过气溶胶而致试验室感染：或未知传输风险相关病源,3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身、供给空气正压防护服,BSL3外加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其它相关要,BSL3操作外加：1、进入前换衣服2、出试验室前淋浴3、带出设施全部材料消毒,8,8/52,BSL-1,BSL-2,BSL-3,正压服型试验室,安全柜型试验室,9,9/52,1、ABSL-1,适合用于喂养大多数,经过检疫贮备试验动物,(灵长类除外)，以及专门,接种了危险度,级微生物动物,。要求应用微生物学操作技术规范(GMT)。,2、ABSL-2,适合用于专门接种了危险度,级微生物动物,。,（五）试验动物设施生物安全防护试验室,10,10/52,3、ABSL-3,适合用于接种,危险度级微生物动物,，或根 据危险度评定结果来确定。全部系统、操作和规程,每年都需要重新检验及认证,。,4、ABSL-4,适合用于接种,危险度级微生物动物,，或根 据危险度评定结果来确定。全部系统、操作和规程,每年都需要重新检验及认证,。,11,11/52,动物设施防护水平试验操作和安全设备汇总,危害程度分类,防护水平,试验室操作和安全设施,第四类,ABSL-1,限制出入，穿戴防护服和手套。,第三类,ABSL-2,ABSL-1操作内容加上,危险警告标志。可产生气溶胶操作应使用级或级BSC。废弃物和喂养笼具在清洗前先去除污染。,第二类,ABSL-3,ABSL-2操作内容加上,进入限制,全部操作均在BSC内进行，并穿着专用特殊防护服。,第一类,ABSL-4,ABSL-3操作内容加上,严格限制出入,进入前更衣,配置级BSC或正压防护服,离开时淋浴,全部废弃物在去除出设施前需先去除污染。,12,12/52,惯用生物安全设备,二,试验室安全设备主要有,生物安全柜,高压灭菌器,离心机,负压柔性薄膜隔离装置,洗眼器,13,13/52,（一）原理,（二）分类及特点,（三）使用要求,（四）维护校验,一、生物安全柜biological safety cabinet,BSC,14/52,（一）,原理,利用高效空气过滤器对空气中微小粒子阻留特征，结合负压环境和专门设计气体流动模式，实现对危害性生物气溶胶屏蔽,15,15/52,（二）分类及特点,BSC有三个级别，即BSC-、BSC-（A1、A2、B1、B2）和BSC-,级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。,16,16/52,BSC-,BSC-级生物安全柜原理图,A 前开口,B 可视窗,C 排风HEPA过滤器,D 压力排风系统,特点：,为,人和环境提供保护,，但进入空气未过滤，,无法有效保护操作标本和材料,。,17,17/52,Al、A2、Bl 和 B2 型,无菌空气经工作台面，提供,个体防护,，和台面,物品,不受污染。,可用于操作危险度,级和级,感染性物质,在使用正压防护服条件下，可用于操作,级,感染性物质,四种类型区分：,排风、气体循环、气流方向等不一样,A 前开口；B 可视窗口；,C 排风HEPA过滤器；,D 后面压力排风系统；,E 送风HEPA过滤器；F 风机,BSC-II,18,18/52,BSC-,为,负压封闭式操作环境,，由一个外置专门排风系统控制气流,操作人员经过固定在安全柜窗口,橡胶手套,，进行工作台面操作,有可灭菌、装有HEPA过滤排风装置,传递箱,与一个双开门,高压灭菌器,相连接，并用它来去除进出安全柜全部物品污染,适合用于,三级和四级,生物安全水平,试验室,。,用于操作危险度,、级生物因子,19,19/52,20,20/52,1、生物安全柜安装要求,清洁环境，远离人员、物品流动大地方。,远离门和窗。,侧面留有30cm间距。,预留出30-35cm空间连接管道，外接排气口要比楼层高2米。,专用电源,（三）使用要求,21,21/52,2、,生物安全柜使用,1.,正确安装,，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，确保安全柜处于正常工作状态。,2.,定时维护和检测,，确保安全性。,3.注意保洁，天天做完试验后，,去除全部废弃物，再用75%酒精消毒,。,4.普通滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%时候，需,更换滤膜,。,22,22/52,3、操作规范,1)操作人员:,维持生物安全柜开口处气流完整性。双臂应垂直迟缓进出安全柜。进入后等候约1min，再操作。必需物品提前置于安全柜内，降低,双臂进出次数。,2)生物安全柜运行:,A1及A2型，不使用时能够关闭。B1和B2型一直保持空气流动以维持房间空气平衡。开始工作前和完成工作后，应运行数分钟排出污染空气。,3)物品放置:,生物安全柜前后气格栅不被阻挡;安全柜内物品应70%酒精表面消毒;物品应尽可能地放在工作台后部，可产生气溶胶设备靠后部放置;盛装生物危害性废弃物物品，放在安全柜内某一侧，不应放在柜外面;工作台面上试验操作应该按照从清洁区到污染区方向进行。,23/52,洁净物品,理想工作台摆放标准,清洁污染区,在工作台面上试验操作应该按照从清洁区到污染区方向进行,被污染区域,废弃物托盘,垃圾袋,24/52,4)紫外灯:,每,周对紫外灯进行清洁，防止灰尘和污垢影响杀菌效果。定时检验紫外线强度，操作时关闭紫外灯，试验前、后开启20-30min。,5)明火:,防止使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对接种环灭菌。,6)溢出物处理:,发生感染性物品溢出时，在安全柜工作状态下，用有效消毒剂马上进行清理，尽可能降低气溶胶生成。全部接触溢出物品材料都要进行消毒或高压灭菌。,7)保持洁净:,在试验结束时，全部物品去除表面污染后移出安全柜。擦拭生物安全柜内部表面污染。用70%酒精消毒。,25/52,8)个人防护:,在进行一级和二级生物安全水平操作时，可穿普通试验服。在进行三级和四级生物安全水平操作时，使用前面加固处理反背式试验隔离衣。手套应套在隔离衣外面，能够戴加有松紧带套袖来保护操作人员手腕。有些操作还需戴口罩和安全眼镜。,9)警报器:,生物安全柜采取两种警报方式，窗式警报器提醒滑动窗移到适宜位置；气流警报器表明正常气流模式受到了干扰，立刻停顿工作，并通知试验室主管。,26/52,在进行维护、更换过滤器、性能测试、以及气体消毒以前，应使用消毒剂,去除全部内部工作表面和暴露内表面污染,。,评定内容：,安全柜完整性、HEPA过滤器泄漏、向下气流速度、正面气流速度、负压/换气次数、气流烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可选择进行漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性测试。,（四）维护校验,27,27/52,将工作空间用透明聚氯乙烯(PVC)完全包裹起来悬挂在钢架上，隔离装置一直维持负压。入口处空气经一个HEPA过滤器过滤，出口处经两个HEPA过滤器过滤，可直接将空气排到建筑物外,无生物安全柜现场，采取柔性薄膜隔离装置来进行,高危险生物体(危险度级或,级)操作,二、负压柔性薄膜隔离装置,28,28/52,1.试验服、隔离衣、连体衣、围裙,2.护目镜、安全眼镜和面罩,3.口罩及防毒面具,4.手套,5.鞋,个人安全防护用具,三,P3,P4,29,29/52,（一）标本安全操作,1.标本搜集,容器坚固，预防意外破损。标本不得超出总体积50%，无泄漏，外部无残留。粘贴标签，要求或说明书与标本分开放置，并置于防水袋中。,2.标本运输,使用可高 压灭菌或耐受化学消毒剂二级容器，固定标本容器并保持直立运输。,3.标本处理,接收大量标本试验室应安排专门房间或空间。工作人员了解标本潜在危害和防护方法，掌握破碎或泄漏容器处理方法。内层容器需在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。,生物试验室技术规范,四,30,30/52,（二）试验室仪器和器具操作,1.移液管和移液器,31,31/52,2.离心机,离心桶装载、平衡、密封、打开在安全柜中进行。,每次使用后要及时去除离心桶、转子和离心机腔污染,32,32/52,3.搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪使用,确认仪器正常运转。,提议使用聚四氟乙烯（PTFE）器皿。,应有防护装置，有条件在生物安全柜里，覆盖塑料罩操作。,在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。,使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。,33,33/52,4.冰箱,冰箱、低温冰箱和固体干冰盒要定时除霜和清扫。破裂安瓿、冻存管等要及时去除，应配戴面部保护装置并戴手套，清扫后，进行表面消毒处理。,冰箱内容器有清楚标签（内容物科学命名、贮存日期和贮存人），无标签及过期材料应高压灭菌后丢弃。对于冰箱内储存物应有详细目录。,除非有防爆办法，禁止将易燃液体保留在冰箱里，冰箱门上应张贴这方面注意事项。,34,34/52,5.玻璃器皿和锐器,尽可能用塑料制品代替玻璃制品。用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管,降低使用注射器和针头，必须使用时采取锐器安全装置。,禁止给用过针头戴护套。,35,35/52,安瓿开启,：首先消毒安瓿外表面，再用砂轮在安瓿外表面棉塞或纤维塞中部挫一划痕，手里垫一块酒精浸透棉花再握住安瓿，轻轻地移去安瓿顶部并将其按污染物处理。假如棉塞或纤维塞留在安瓿上，则将其用灭菌镊子除去。向安瓿内迟缓地加入液体以重悬内容物，防止产生泡沫。,安瓿储存,：,不得将装有感染性物品安瓿侵入液氮，可将感染性物质真空冷冻干燥后超低温保留。从冷藏处取出安瓿时要进行眼睛和手防护,6.,装有冻干传染性物质安瓿开启与储存,36,36/52,(1)血样采集:,由受过培训人员采集，戴手套操作。检验申请单放在防水袋或信封内，不应打开袋子。,(2)血清分离:,操作人员经过严格培训，操作时戴手套、眼睛和粘膜保护装置。操作中防止或尽可能降低气溶胶产生，不得倾倒。废弃标本管需高压灭菌。操作前应准备对应消毒剂，用于及时处理喷溅和溢出标本。,(3)涂片、盖玻片、组织及组织切片:,用于显微镜观察血液、唾液等标本所使用载玻片、盖玻片、染色及洗液等废弃物均经消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标本应用甲醛或多聚甲醛固定，防止冷冻切片。假如必须进行冷冻切片，应该使用安全罩，戴安全防护面罩。去除污染时，仪器温度要求升至室温。,7.,感染性物品操作,37,37/52,(4)朊蛋白（prion）相关组织:,朊病毒抵抗力很强，一旦发生污染去除困难，故操作试验室应使用,专用设备，不能共享,。,全部操作都应在,生物安全柜里进行,。必须穿,一次性试验室保护服（罩衫和围裙）和戴手套,（病理学操作者要在两层橡胶手套之间戴钢网手套）。,使用,一次性塑料器,皿取代玻璃器皿。,不应使用组织处理机，可代之以塑料广口瓶和大口杯。,使用过钢网手套和Kevlar手套在内非一次性器械必须灭菌后方可再次使用。,朊蛋白对紫外线不敏感，,安全柜用甲醛蒸汽处理,高效空气过滤器（HEPA）在拆除后应用最低达,1000温度焚烧,。,38,38/52,（三）个人行为要求,个人物品、服装、食品和饮料只应存放于非试验室区域内指定专用处。,试验室内禁止吸烟、喝水、吃东西。,禁止在工作区内使用化装品和处理隐形眼镜。,长发应束在脑后。,在工作区内不应配戴戒指、耳环、腕表、手镯、项链和其它珠宝,39,39/52,（一）不一样设备与物品消毒方法,（二）消毒灭菌操作与效果监测,（三）试验室废弃物处理关键点,生物试验室消毒与灭菌,五,40,40/52,（一）,不一样设备与物品消毒方法,1、生物安全柜,试验完成，生物安全柜内全部物品(包含仪器设备)都应进行消毒，并从生物安全柜内取出。,用有效氯,mg/L,含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁和前后面玻璃，保持完全湿润3060分钟。,开启紫外线灯照射3060分钟。,然后用清水与洁净抹布擦净，以防消毒液腐蚀。,消毒完成，逐一关闭送风和通风设备。,更换过滤器（网）前用,甲醛进行熏蒸消毒,，然后轻轻取下过滤器（网）装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位焚烧处理。,41,41/52,2、仪器设备,局部轻度污染。,用,有效氯1000-mg/L,擦拭，保持湿润30-60分钟；珍贵或精密仪器用,2%戊二醛擦拭30-60分钟,（按制造商说明），消毒完成用清水与洁净布擦净；紧急时对非芽孢污染仪器设备用75%乙醇溶液擦拭三遍。,离心管未密闭、试管破裂等液体外溢时。,用,2%戊二醛,擦拭离心机内部，保持湿润最少,60分钟,（按制造商说明）。,有,内腔或严重污染仪器设备,（如受细胞、培养液、体液或血液等污染），整机装入专用密闭包装与容器内，容器外表面消毒后由专车运至指定单位用,环氧乙烷消毒,。,需操作不一样病原微生物前、设备维修前、出现重大污染或意外暴露事故后,，应用,甲醛或过氧乙酸熏蒸,消毒。,42,42/52,3、感染性材料与器材,使用后丢入专用密闭搜集袋与容器内，连同包装与容器一起经压力蒸汽,121作用20-30分钟,。,大容器表面用有效氯,mg/L,含氯消毒液消毒，保持完全湿润60分钟；如遇细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至,5000mg/L,作用60分钟。,4、物体表面,用,有效氯1000-mg/L,含氯消毒液擦拭消毒，保持完全湿润3060分钟后用清水去除消毒液残留；如有细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至,5000mg/L,作用60分钟。,43,43/52,5、防护用具,除防护眼镜与呼吸器外均使用一次性防护用具。,每次试验结束后离开试验室前，脱下防护用具进行消毒，有显著污染时随时消毒。,一次性防护用具使用后丢入专用密闭搜集袋内，经压力蒸汽121作用,20-30,分钟。,防护眼镜在,mg/L,有效氯溶液中浸泡60分钟。,呼吸器用,环氧乙烷消毒,或按制造商提供方法消毒，消毒后更换呼吸过滤部分。,44,44/52,6、检验统计,应经过传真机、计算机等伎俩发送至试验室外。,污染检验原始统计等送出试验室前用压力,蒸汽,121作用20分钟，快排干燥；大量检验原始统计等可采取密封包装后外送专业单位进行,辐照或环氧乙烷,消毒。,7、污水消毒,全部试验污水必须经过消毒处理并到达标准后方可排放；,污水排放标准参考国家标准,医疗机构水污染排放标准（GB18466-）,执行。,45,45/52,8、手消毒,消毒方法,。用肥皂流水洗手 12分钟，擦干后用,75%乙醇、3000-5000mg/L有效碘,溶液或经卫生部同意手消毒剂消毒手部,13,分钟，然后用清水冲洗，用自动干手机将手吹干或用消毒纸巾、纱布或毛巾擦干。,注意事项,。水龙头、皂液与手消毒液均应采取非手触方式。,46,46/52,（二）消毒灭菌操作与效果监测,1、压力蒸汽灭菌器,物理监测：,每次消毒用留点温度计作温度监测并统计作用时间，代表物理参数。,化学监测：,-每,包外,用化学指示胶带监测，,是否经过灭菌处理；,-大包或难消毒物品包，中央用,包内,化学指示剂监测，依据颜色改变判断,是否到达灭菌条件。,生物监测：,每个月用生物指示剂监测，嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC 7953)生物指示剂，监测后应置56培养2448h后观察。,47,47/52,2、紫外线杀菌灯,-,操作方法：,*无人条件下用悬吊式或移动式照射，30W，1m处辐照强度70W/cm,2,，每m,3,不少于1.5W，照射时间30分钟。,-,注意事项：,*保持紫外线灯表面清洁，每两周用酒精棉球擦拭一次,*室内保持清洁干燥，降低尘埃和水雾，温度低于20或高于40、相对湿度大于60%时应适当延长照射时间；,*紫外线辐照强度低于70%,应及时更换。,-,消毒效果监测：,*每3-6个月测定一次紫外线灯辐照强度。,48,48/52,3、化学消毒剂,-,操作方法：,*,严格按卫生部消毒技术规范中化学消毒剂选取标准、适用范围与注意事项以及试剂说明书、使用期内进行使用,*做好个人防护。,*含氯消毒剂使用液应天天配制与更换；,*戊二醛活化后使用液最长使用时间按厂商提供说明书。,-,消毒效果监测：,*用,消毒剂浓度试纸测试,监测消毒效果。,49,49/52,4、甲醛熏蒸法,-,操作方法：,*先封闭全部通风口。,*按,40ml/m,3,百分比准备福尔马林用量与等量水，并,按,30g/m,3,量准备高锰酸钾。,*先将高锰酸钾倒入容器内加水成糊状，然后将福,尔马林倒入，在温度20以上、,相对湿度70%,条,件下密闭熏蒸1224小时。,*消毒完成，戴好,防毒面具,进入试验室，通风，然,后用10%氢氧化铵溶液擦去表面残留。,-,消毒效果监测：,*每次消毒用温度计与湿度仪以及化学指示剂监测。,*用枯草杆菌黑色变种芽孢生物指示剂（ATCC 9372）监测。,50,50/52,（三）试验室废弃物处理关键点,生物废弃物容器,充满量,不能超出设计容量，,外表面,被感染性废物污染时，对被污染处进行消毒处理或加一层包装。,全部弃置试验室生物样本、培养物和被污染废弃物在从试验室中取走之前，应使其到达,生物学安全,，常采取,高压蒸汽处理,。,锐器（针头、小刀、金属和玻璃等）直接弃置于防刺破防流失,锐器安全处置容器,内，禁止用手盖帽、拆卸、有意弯曲、消毒、毁形等。,运输人员从医疗废物产生地点将分类包装医疗废物,按要求时间和路线,运输至指定,暂时贮存地点,。,运输医疗废物时，应,预防,造成包装物或容器破损和医疗,废物流失、泄漏和扩散,，并预防医疗废物直接接触身体。,感染性物质、动物尸体、组织等塑料袋密封运输二级焚烧室（温度最少1000度，彻底焚烧,）,51,51/52,52,52/52,