临床微生物标本采集课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床微生物检测的目的,协助临床医生明确疾病的诊断并治疗感染性疾病,规范临床抗生素的应用,帮助院感加强多重耐药菌和特殊病原菌的监测,从微生物标本接收后，实验室的工作就是：,生物安全柜,恒温培养箱,标本采集、运送及处理过程中的生物安全,一、采集标本过程中需戴手套、穿工作服、戴防护口罩，必要时戴防护眼镜、穿隔离服。,二、采集到的原始标本应采用防漏可密封的,无菌管或杯型容器,收集。外加防漏可密封的塑料袋，袋上应注明标本信息以及印有生物安全标志。,标本采集、运送及处理过程中的生物安全,三、用带针头的注射器采集的标本应移至无菌管内或用防护性装置套住针头，再置于密封、防漏的塑料袋内送检。,四、不要将泄漏的标本送到实验室或随意处理。若需重送，旧的标本需高压灭菌后弃去。,标本采集的基本原则,标本的正确选择、采集和运送,是实验室工作准确和有效的前提，是保证实验室质量的重要环节，。,(,早、无、药、适、时机,),标本采集的基本原则,二、遵守无菌操作,在采取血液、穿刺液或脑脊液等正常状态下的无菌部位标本，应严格注意无菌操作，不得被其他部位细菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位应采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。,盛放标本的容器应无菌。,临床常见的各种送检标本,无菌标本,血液,骨髓,脑脊液,胸腹水,关节液,胆汁,非无菌标本,痰,尿,大便,生殖道标本,耳泌物,微生物标本送检,天然棉花及木棒,bact,微生物标本送检,bact,微生物标本送检,标本采集的基本原则,三、在抗生素应用前采集,感染会发生生命危险，临床医生会在细菌学检验出结果之前使用抗生素治疗，而抗生素的使用将影响病原菌的检出。,标本采集的基本原则,四、选择不同采集时机和标本种类,根据临床症状和流行病学资料，可大致对感染性疾病的病原体作大致的估计，根据病程和感染部位的不同，选择合适时机采集不同标本。如伤寒患者，发病第一周应采集血液、第二周应采集粪便和尿液，否则影响细菌的检出率。,标本采集的基本原则,五、适量标本,标本量太少，可能导致假阴性结果；,标本尽量不用以,天然棉花及木棍,制成的拭子采集标本（不饱和脂肪酸、干燥）；,标本的运送,1.,把握好时间,标本采集后立即送检，送检时间不得超过,2h,，否则会影响病原菌的检出。,少量液体（,1ml,）或组织（,38,）,或,低温（,10*10,9,/L,）,皮肤黏膜出血,休克,多器官衰竭,血压降低,C,反应蛋白升高及呼吸加快,血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少,血培养中出现的问题,血培养阳性检出率偏低,血培养污染问题,血培养瓶的保存与运送不当,没有及时送检,送检率偏低,采血时机不合适,药物对细菌培养的影响,采血量不足影响细菌生长,套数的影响,血培养送检率,国内多数三甲综合医院,10,20,瓶,/,天,复旦大学中山医院,20,50,瓶,/,天,香港玛丽医院,200,瓶,/,天,台湾大学医院,300,瓶,/,天,血培养中出现的问题,血培养阳性检出率偏低,血培养污染问题,血培养瓶的保存与运送不当,没有及时送检,送检率偏低,采血时机不合适,药物对细菌培养的影响,采血量不足影响细菌生长,套数的影响,血液标本采集时机,使用抗菌药物之前或,停药,24,小时后,寒战和发热高峰,3060min,内,（,研究表明细菌通常在寒战或发热前,1,小时左右进入血流）,血液标本采集时机,怀疑感染性心内膜炎或其他静脉内感染（如导管相关性感染）时，可分开时段分部位采集：,导管相关血流感染,导管相关血流感染,（,Catheter Related Blood Stream Infection,简称,CRBSI,）,指,带有,血管内导管或者拔除血管内导管,48,小时内的患者,出现,菌血症或真菌血症，并,伴有,发热（,38,）、寒颤或低血压等感染表现，除血管导管外,没有,其他明确的感染源。,导管,送检指征,在,ICU,病房内携带中心静脉导管超过,48,小时，出现原因不明的发烧或低血压的患者，儿童患者出现低体温者。,送检方法,1,、,保留情况,：采取至少,2,套血培养，其中至少一套来自外周静脉，另外的一套则从导管中心无菌采获，两个来源的采血时间必须接近（,5,分钟），各自做好标记。,2,、,不保留情况,：从独立的外周静脉无菌采集,2,套血培养。无菌状态下取出导管并剪下,5cm,导管尖端或近心端送往实验室进行,Maki,半定量平板滚动培养。,血培养中出现的问题,血培养阳性检出率偏低,血培养污染问题,血培养瓶的保存与运送不当,没有及时送检,送检率偏低,采血时机不合适,药物对细菌培养的影响,采血量不足影响细菌生长,套数的影响,血培养瓶,需氧瓶,厌氧瓶,一套血培养,=1,瓶需氧,+1,瓶厌氧,血液标本采集方法,采集量：,成人每瓶采血量为,810ml,，儿童每瓶采血量为,13ml,采用,“,双侧双瓶,”,原则。即,2,套血培养（,1,套为,1,瓶需氧和,1,瓶厌氧）。成人每套不少于,10ml,，,婴幼儿,仅用需氧瓶，采用两只需氧瓶为,2,套血培养，不少于,4ml,。,儿童患者因血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人,采血的总量是影响检出病原菌的重要因素之一。,采血量,一套血培养（抽,20ml,血液）,二套血培养,三套血培养,阳性,检出率,65%,80%,96%,血液标本采集时机,+,采血量,急性感染患者，应在,5min,内,从不同部位分别采,23,套血培养,发热原因不明患者，在,24h,内,应从不同部位采,23,套，,间隔不少于,60min,。,可疑心内膜炎患者，起始采集,3,套血培养（每次间隔不少于,30min,），如果,24h,内,培养阴性，则应继续采集,2,套血培养,亚急性感染性心内膜炎，需在,30min,至,1h,内,连续抽取数套血培养（以证明细菌感染的连续性）然后才开始抗菌药的经验治疗。,血培养中出现的问题,血培养阳性检出率偏低,血培养污染问题,血培养瓶的保存与运送不当,没有及时送检,送检率偏低,采血时机不合适,药物对细菌培养的影响,采血量不足影响细菌生长,套数的影响,血液标本采集方法,静脉采血，应,严格消毒,血培养瓶盖和皮肤,，用无菌采血装置采血，,不换针头,，直接将血液标本注入血培养瓶中，注入血液后应,颠倒混匀,以防凝固。采用真空采血装置可降低污染。,采血部位：成人采用肘静脉，儿童和婴幼儿多为颈部和腹股沟。成人不建议采集动脉血，不宜从,静脉导管或静脉留置口,取血，因其常伴有高污染率。,严格消毒原因为：采血部位皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染,血培养瓶接种顺序有学问,用,注射器采血,时：,首先接种厌氧瓶避免空气进入，所以接种顺序为,先接种厌氧瓶，后需氧瓶,。,用,蝶形针采血,时：,血液首先装入需氧瓶，以免装置里的空气传送到厌氧瓶中。所以它的顺序为,先接种需氧瓶，后接种厌氧瓶,。,特殊情况：,如果抽取,血液量很少,时，血液应首先接种到需氧瓶中，因为多数菌血症是由需氧菌和兼性厌氧菌感染导致的，剩余的血再接种厌氧瓶。,血培养中出现的问题,血培养阳性检出率偏低,血培养污染问题,血培养瓶的保存与运送不当,没有及时送检,送检率偏低,采血时机不合适,药物对细菌培养的影响,采血量不足影响细菌生长,套数的影响,血液标本的运送,采集后的血培养应在,1h,内,送达，不能及时送达时，需置,室温下,保存，不可冷藏或冷冻。,(,因为若感染菌为肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌遇冷易死亡,),泌尿生殖道标本,一、尿液标本,适应症,：,尿路感染,肾结核,泌尿系结石,膀胱排空功能受损,前列腺增生的患者,送检指针：,出现尿频、尿急、尿痛等膀胱刺激症，,肉眼脓尿或血尿，,尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性，,不明原因的发热或留置尿管的患者出现发热、尿道口有脓性分泌物等症状，,泌尿系统疾病手术前等情况,采集时间：,抗菌药物使用前或停药,5,天后采集尿液标本，通常采集晨尿，确保尿液在膀胱内停留,4h,以上。,采集方法,1,、清洁中段尿采集法：嘱患者晨起用温和肥皂水清洁会阴后，弃去前段尿，留取中段尿,10ml15ml,于灭菌容器内，立即加盖送检。,2,、膀胱穿刺采集法：严格无菌操作消毒耻骨联合上皮肤，用无菌注射器穿刺入膀胱抽取,510ml,尿液于灭菌容器送检。该方法带给病人有一定的痛苦,3,、导尿法：直接导尿采集法、留置导尿采集法,采集方法,直接导尿,按常规方法消毒会阴后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，先弃去前段,15ml,，再留取,1015ml,膀胱尿液于无菌容器送检。,留置导尿,用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液,1015ml,，置于无菌容器中送检,采集方法,四、集尿法,怀疑结核分枝杆菌感染时，可用一清洁容器留,24h,尿，取其沉渣,1015ml,送检。,尿液标本的运送,标本采集后及时送检和接种，室温下存放时间不得超过,2h,（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），,48,保存时间不得超过,24h,，当应注意冷藏保存不用于疑为淋病奈瑟菌感染病人,常见临床标本的采集及处理,泌尿生殖道标本,二、生殖道和尿道标本,送检指针：,女性患者,外阴阴道炎,细菌性阴道炎,阴道溃疡,尿道炎,宫颈炎,子宫颈炎,子宫内膜炎,输卵管炎,卵巢脓肿,男性患者,尿道炎,附睾炎,前列腺炎,生殖器,标本采集,（根据不同感染种类和病变特征采集不同的标本）,尿道分泌物,患者排尿,1h,后采集，男性用生理盐水局部清洗，采取从尿道口溢出的脓性分泌物，或尿道内,24cm,旋转拭子停留,20s,后取出分泌物；女性清洗尿道口后，从尿道内压迫尿道，使分泌物溢出后采集标本，无肉眼可见的脓液，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内,24cm,旋转拭子停留,20s,取样送检,生殖器标本,用无菌盐水和手术刀清除溃疡面，暴露出,溃疡基底,，渗出物积聚较明显时，用拭子或吸管采集,送检指针：,腹泻病人出现以下任一情况时建议采集粪便标本进行培养,：,腹泻、大便每日,3,次，粪便的性状异常，可为稀便、水样便、粘液便、脓血便及血便，可伴有恶心、呕吐、食欲不振、发热、腹痛及全身不适等；,病情严重者，因大量丢失水分引起脱水、电解质紊乱甚至休克；,粪便涂片镜检白细胞,5,个,/hp,；,抗菌药物治疗后腹泻；,来自疫区的患者,常见临床标本的采集及处理,粪便标本,采集方法,自然排便采集法,自然排便后，挑取有,脓血或粘液部分,的粪便，液状粪便取絮状物盛于无菌容器内或置于保存液中送检，若不能及时送检，应按,1:10,比例与,ph7.0,磷酸盐甘油缓冲液混合保存，以防病原菌死亡而影响检出率,直肠拭子采集法,适于排便困难患者或婴幼儿。,采集量,一般用拭子采集大于,2g,的标本送检，若标本为水样，采集大于,2ml,的标本置于无菌容器中送检,采集时间及频率,采集时间,尽可能在发病早期（急性期）和应用抗菌药物治疗之前，采集新鲜粪便送检，以提高检出率。怀疑沙门菌感染时，应在发病,2,周以后采集标本送检,采集频率,重复采集标本的频率每日最多,1,次,痰标本,适应症：,咳嗽,咳出脓性痰或铁锈样痰,咯血,鲜血和痰中带血等,呼吸困难,呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛、,X,线检查提示肺 部有炎性浸润或胸腔积液,发热,伴有白细胞以及中性粒细胞升高或,CRP,明显升高,标本的采集,一般以晨痰为好；,支气管扩张症患者清晨起床后进行体位引流，可采集痰标本。,自然咳痰采集法：在留取痰之前，用温清水反复漱口，以减少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器中。,气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本。,不合格标本的处理,对下列不合格的标本应拒收,申请单姓名、科别、床号与标本的标签,不符,痰标本呈,水样或唾液样,痰涂片,白细胞,25/LP,标本容器,溢漏，无盖子,痰标本留取,放置时间太长,，超过,2h,未用指定的,无菌容器,留痰做细菌培养,标本的运送,标本采集后需尽快（,小于,2h,）送至实验室，不及时运送可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等病原菌由于不适应外界环境和自溶想象而死亡。,延迟送检或待处理标本应置于,4,冰箱保存（疑为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌感染标本不能冷藏），以免杂菌生长，但保存标本应在,24h,小时内处理。,对可疑烈性呼吸道传染病（,SARS,、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者检验标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全防护。,脓液及创伤感染分泌物标本采集,送检指针：,局部感染：,红、肿、热、痛和功能障碍,全身症状：,轻重不一、常有发热、头痛、全身不适、乏力食欲减退等。（白细胞计数增加、,crp,升高）,疑为,软组织的急性化脓性炎症、化脓性疾病、脓肿、创伤感染,采集方法：,开放性脓肿：,包括眼、耳、扁桃体、术后切口感染等脓性分泌物,首先用无菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，用,无菌棉拭子先蘸少许无菌生理盐水,，然后采取,靠近组织部分脓液及病灶深部,的分泌物立即送检。,闭锁性脓肿：,指完整脓壁与体腔，及与外界不相通的脓肿,采集前需对患者病灶局部皮肤或粘膜表面用,2.5%-3%,碘酊消毒、,75%,乙醇脱碘，用无菌注射器将脓肿内容物吸出。,明明送检的是脓液，可培养结果却是“无菌生长”？,标本采集前已经使用了抗生素,厌氧菌,脓液组成物是坏死的白细胞和溶解的细菌组织碎片，没有活细菌生长。,建议送检坏死和新鲜交界处的组织，取基底部或边缘部采样送检。,尽量针吸或组织培养比棉签拭子更可靠。,注意事项：,应尽可能在,使用抗菌药物前,采集标本，若患者已用药，需注明抗菌药物名称。并在下次用药前采集,对于开放伤口，应,先采样后清创,。采集标本前应除去表面污染菌,干燥、结痂伤口,的标本一般不做培养，除有渗出物,闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本，,尽量不用拭子,采集标本，以防标本干燥,对于开放病灶和脓肿，应尽量去除表面污染菌，用拭子在,病灶活动区域或基底部,采集标本。,脑脊液,采集时间：立即,在使用抗菌药物以前,采集量：,用腰穿方法无菌操作采集脑脊液,3,5ml,，分装到,3,个无菌试管中，每个试管,2ml,。,运送,15min,内，半小时送检是可接受的,切不可置冷藏。,如不能及时送检，可使用血培养瓶。,其余无菌体液,采集时间：尽早,使用抗菌药物之前,停止用药后,2-3,天采集,采集量,:,应,1ml,胸腔积液、腹水可抽取,10ml,心包液、关节液等可抽取,2,5ml,。,也可将抽取液直接注入血培养瓶进行培养。,采集标本时的注意事项,1,、采集标本最好能在,用药前采样,，以提高阳性率,2,、采集标本时必须注意,无菌操作,，使用密闭的无菌容器，避免污染杂菌,3,、采集标本后应,尽快送检,，否则病原菌会死亡而影响细菌检查的正确性,4,、采集的标本中,不得加防腐剂或消毒、不得放入不利于细菌生长的环境中。,Thank You!,