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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,第,15,讲基因工程及克隆技术,第1页,考试要求,1.,工具酶发觉和基因工程诞生,(/a),。,2.,基因工程原理和技术,(/b),。,3.,基因工程应用,(/a),。,4.,提出生活中疑难问题，设计用基因工程技术处理方案,(/c),。,5.,植物克隆,(/b),。,6.,动物克隆,(/a),。,第2页,1.,(,浙江,4,月选考,),回答与基因工程和植物克隆相关问题：,(1),将含某抗虫基因载体和含卡那霉素抗性基因载体,pBI121,均用限制性核酸内切酶,Eco,R,酶切，在切口处形成,_,。选取含抗虫基因,DNA,片段与切割后,pBI121,用,DNA,连接酶连接，在两个片段相邻处形成,_,，取得重组质粒。,(2),已知用,CaCl,2,处理细菌，会改变其一些生理状态。取,CaCl,2,处理过农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成,_,试验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目标是,_,，,从而表示卡那霉素抗性基因，并大量增殖。,第3页,(3),取田间不一样品种水稻幼胚，先进行,_,，然后接种到培养基中培养，幼胚发生,_,形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，方便取得抗虫转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株原因有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及,_,_,(,答出,2,点即可,),。,第4页,解析,(1),构建重组质粒时限制性核酸内切酶,Eco,R,剪切得到是粘性末端，,DNA,连接酶连接两个,DNA,片段之间形成是磷酸二酯键。,(2),目标基因导入植物细胞惯用农杆菌转化法。用,Ca,2,处理细菌以增加细菌细胞壁通透性，让其处于感受态细胞，以利于重组质粒导入。,(3),不一样种类植物或同种植物不一样基因型个体之间存在遗传差异，细胞全能性表示程度大小不一样，小麦水稻等作物在屡次继代培养后，会丧失细胞全能性表示能力。,答案,(1),粘性末端磷酸二酯键,(2),转化使,CaCl,2,处理过农杆菌恢复细胞正常状态,(3),消毒脱分化水稻基因型、愈伤组织继代次数,第5页,2.,(,浙江,11,月选考,),回答与植物克隆和动物克隆相关问题：,(1),利用植物愈伤组织取得再生植株主要有两条路径：一是由愈伤组织细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株,_,路径，二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株胚胎发生路径。另外也可不经过愈伤组织阶段而直接采取带腋芽茎段培养成丛状苗，再诱导生根取得再生植株，其原因是腋芽中存在,_,。,第6页,(2),利用植物克隆培育新品种，首先可利用带有目标基因,_,侵染植株，或将目标基因经过,_,方法导入植物细胞、组织或器官取得转基因植株，另首先利用异源植株,_,进行融合产生杂种植株，或利用异源植物在试管内进行,_,，对其产生胚进行培养产生杂种植株。,(3),以下属于植物克隆和动物克隆共有培养方法是,_,。,A.,悬浮培养、器官培养,B.,贴壁培养、传代培养,C.,器官培养、愈伤组织培养,D.,原生质体培养、传代培养,第7页,解析,(1),外植体经脱分化后形成愈伤组织，由愈伤组织形成再生植株主要有两条路径：一是由愈伤组织细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株是植物组织培养器官发生路径，二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发成完整植株是植物组织培养胚胎发生路径。不经过愈伤组织阶段而直接采取带腋芽茎段培养成丛状苗，这说明腋芽中含有分生组织，而分生组织中含较高细胞分裂素，细胞分裂素与生长素之比较高可促进芽生长。,(2),将目标基因导入植物细胞，能够用含有目标基因农杆菌直接侵染，或者用显微注射法导入；用异源植物能够利用植物体细胞杂交技术或者受精之后胚胎进行培养，也能够取得杂种植株。,第8页,(3),贴壁生长是动物细胞培养时特征；愈伤组织是指植物细胞在组织培养过程中形成一个排列疏松而无规则无定形状态、高度液泡化薄壁细胞，动物细胞无愈伤组织培养；传代培养应用于动物细胞培养过程中。,答案,(1),器官发生分生组织,(2),农杆菌显微注射原生质体受精,(3)A,第9页,3.,(,浙江,10,月选考节选,),某小组欲进行烟草原生质体分离与培养研究。请回答：,(1),原生质体分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗叶片，放入含有,0.5mol/L,甘露醇,(,维持较高渗透压,),_,混合液处理，经过离心纯化后取得原生质体。,(2),原生质体培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该,_,培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条路径形成再生植株。路径一：细胞团经球形胚、,_,和胚状体，最终发育成植株。路径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高激素是,_,，胚性细胞主要特点是,_(A.,液泡小、细胞核小,B.,液泡大，细胞核大,C.,液泡大，细胞核小,D.,液泡小、细胞核大,),。,第10页,(3),为了对烟草一些性状进行改良，分离两种烟草原生质体后，经过,_,方法将他们遗传物质组合在一起，经培养取得含有新性状再生植株。提取再生植株,DNA,，采取,_,扩增相关基因，来判定遗传物质是否成功重组。,第11页,解析,(1),去除植物细胞壁，取得植物细胞原生质体，惯用方法是利用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞。,(2),在获取原生质体时甘露醇是作为维持细胞膜内外渗透压平衡稳定剂使用。其详细作用是提升渗透压，预防水分渗透细胞内部，造成细胞破裂。在原生质体形成新细胞壁后，有细胞壁支持与保护作用，所以要稀释甘露醇浓度；从胚性细胞,细胞团,球形胚,心形胚,胚状体，然后再生出完整小植株；为快速诱导芽分化，培养基中往往添加细胞分裂素；胚性细胞特点是液泡小、细胞核大。,(4),植物细胞工程中，利用原生质体融合方法取得杂种细胞；体外扩增,DNA,技术惯用是多聚酶链式反应，即,PCR,技术。,答案,(1),纤维素酶和果胶酶,(2),稀释,(,降低,),心形胚细胞分裂素,D,(3),原生质体融合,PCR,第12页,4.,(,浙江,4,月选考节选,),兔肝细胞中基因,E,编码代谢甲醛酶，拟利用基因工程技术将基因,E,转入矮牵牛中，以提升矮牵牛对甲醛代谢能力。请回答：,(1),从兔肝细胞中提取,mRNA,，在,_,酶作用下形成互补,DNA,，然后以此,DNA,为模板扩增得到基因,E,。在相关酶作用下，将基因,E,与,Ti,质粒连接在一起，形成,_,，再导入用氯化钙处理,_,，浸染矮牵牛叶片。将被浸染叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确是,_(A.,叶片在含适当浓度生长素培养基上分化形成愈伤组织,B.,愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高培养基上形成芽,C.,再生芽在细胞分裂素含量高培养基上生根,D.,愈伤组织在含适当浓度植物生长调整剂培养基上脱分化形成再生植株,),。,第13页,(2),取转基因矮牵牛叶片，放入含,MS,液体培养基和适量浓度甲醛且密封试管中。将试管置于,_,上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛含量，以判断基因,E,是否在转基因矮牵牛中正常表示。培养过程中液体培养基作用：一是提供营养；二是,_,，从而使叶片保持正常形态。,第14页,解析,(1),以,mRNA,为模板合成,DNA,过程为逆转录过程，这一过程需要在逆转录酶催化下进行。取得目标基因后，需在限制性核酸内切酶和,DNA,连接酶作用下，将目标基因与运载体,(Ti,质粒,),连接形成重组质粒,(,重组,DNA,分子,),，再将其导入受体细胞。将目标基因导入植物细胞惯用农杆菌转化法，先将重组,DNA,导入经氯化钙处理农杆菌，再用导入目标基因农杆菌感染植物细胞，最终实现将目标基因导入植物细胞内。导入目标基因植物细胞经组织培养过程形成转基因植物。组织培养过程中，叶片在含适宜浓度生长素培养基上脱分化形成愈伤组织，然后在含细胞分裂素和生长素配比较高培养基上形成芽，继而在生长素含量高培养基上生根，最终形成完整植株，愈伤组织形成植株过程中发生细胞分化。,(2),植物组织培养过程中，将愈伤组织等细胞置于摇床上，进行液体悬浮培养，形成多个分散细胞。培养过程中培养液首先为植物细胞提供营养，另首先维持一定渗透压，从而使叶片保持正常形态。,答案,(1),逆转录重组,DNA,分子农杆菌,B,(2),摇床维持渗透压,第15页,1,.,正误判断,(1),基因工程载体有质粒、,噬菌体、动植物病毒，其中,噬菌体可将外源基因载入动物细胞内。,(),(2),构建重组,DNA,分子时必须使用同种限制性核酸内切酶切割目标基因和载体,DNA,，以在目标基因和载体,DNA,两端形成相同粘性末端。,(),(3),转入了人胰岛素原基因大肠杆菌，能够合成出含有生物活性胰岛素。,(),(4),转基因技术育种克服了传统育种育种时间长、远缘亲本难以杂交缺点。,(),第16页,(5),植物克隆技术基础是植物细胞和组织培养，其理论基础是植物细胞全能性。,(),(6),动物克隆技术基础是动物细胞和组织培养，其理论基础是动物细胞全能性。,(),(7),细胞克隆要求必须确保分离出来细胞是一个或多个分离细胞。,(),(8),细胞系是泛指可传代细胞，细胞株是含有特殊性质细胞系。,(),第17页,2,.,读图析图,(1),构建需要,_,酶参加。,(2),过程依据原理是,_,，关键步骤包含,_,。,(3),要确定抗虫基因导入植物细胞后，是否赋予了植物抗虫特征，在个体水平上还需要做,_,试验；若要检测含有抗虫基因棉花是否产生了对应毒蛋白，在分子水平上可利用,_,方法进行检测。,提醒,(1),限制性核酸内切酶和,DNA,连接,(2),植物细胞全能性脱分化、再分化,(3),抗虫接种抗原,抗体杂交,第18页,考点,1,基因工程工具,1.,已知一双链,DNA,分子，用限制性核酸内切酶,切割得到长度为,120 kb(kb,：千碱基对,),片段；用限制性核酸内切酶,切割得到,40 kb,和,80 kb,两个片段；同时用限制性核酸内切酶,和限制性核酸内切酶,切割时，得到,10 kb,、,80 kb,和,30 kb 3,个片段。据此分析该双链,DNA,分子结构及酶切位点情况为,(,),第19页,解析,依据题意，该,DNA,用限制性核酸内切酶,切割后得,1,条片段，故为环状,DNA,，依据两酶作用结果，可知酶切图谱为,D,。,答案,D,第20页,2.,某一质粒载体如图所表示，外源,DNA,插入,Amp,r,或,Tet,r,中会造成对应基因失活,(Amp,r,表示氨苄青霉素抗性基因，,Tet,r,表示四环素抗性基因,),。有些人将此质粒载体用,Bam,H,酶切后，与用,Bam,H,酶切取得目标基因混合，加入,DNA,连接酶进行连接反应，用得到混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有未被转化，有被转化。被转化大肠杆菌有三种，分别是含有环状目标基因、含有质粒载体、含有插入了目标基因重组质粒大肠杆菌。回答以下问题：,第21页,假如用含有氨苄青霉素培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化和仅含环状目标基因细胞是不能区分，其原因是,_,_,；,而且,_,和,_,细胞也是不能区分，其原因是,_,_,。,在上述筛选基础上，若要筛选含有插入了目标基因重组质粒大肠杆菌单菌落，还需使用含有,_,固体培养基。,第22页,解析,未转化和仅含环状目标基因细胞都不能在含有氨苄青霉素培养基上生长，故这两种不可区分。含有质粒载体和含有插入了目标基因重组质粒细胞在含有氨苄青霉素培养基上都能生长，这两种也不可区分。因目标基因插入位点在四环素抗性基因上，四环素抗性基因被破坏，在取得单个菌落中各挑取少许分别接种到含有四环素培养基上，不能生长为要筛选菌落，即含有插入了目标基因重组质粒大肠杆菌。,答案,二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长含有质粒载体含有重组质粒二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长四环素,第23页,质粒上抗生素抗性基因作用,用作基因工程载体质粒普通含有一些抗生素抗性基因,(,如青霉素抗性基因、四环素抗性基因等,),，供重组,DNA,分子判定和筛选。通常情况下，受体细胞本身没有抵抗相关抗生素能力，当含有抗生素抗性基因质粒与目标基因构建形成重组,DNA,分子导入受体细胞后，抗生素抗性基因在受体细胞中表示，使受体细胞能够抵抗对应抗生素，从而在受体细胞培养基中加入该种抗生素，就能够淘汰未导入重组,DNA,分子受体细胞，保留导入了重组,DNA,分子受体细胞。,第24页,考点,2,基因工程原理、技术和应用,3.,(,嘉兴,3,月选考测试,),丝素蛋白是家蚕一个分泌性复合蛋白，由丝素蛋白重链,(FibH),、丝素蛋白轻链,(Fibl),和,P25,糖蛋白组成。将,Fibl,基因导入大肠杆菌,(,不含质粒,A),并实现表示过程如图所表示。,第25页,(1),构建重组质粒时要用到工具酶是,_,。,(2),导入时，为了增加大肠杆菌通透性，惯用,_,处理大肠杆菌。,(3),接种在含氨苄青霉素培养基上大肠杆菌，有不能形成菌落，原因是,_,。,(4),影印接种就是用丝绒做成与平板大小相近印章，然后把长有菌落母平板倒置在丝绒印章上，轻轻印一下，再把此印章在新培养基平板上轻轻印一下。经培养后，比较新平板上长出菌落与母平板上菌落位置，推测可能导入了重组质粒菌落是,_(,用字母表示,),。,(5),目标基因成功表示标志是,_,。,第26页,解析,重组质粒构建过程：通常先用相同限制性核酸内切酶分别切割目标基因和质粒，然后用,DNA,连接酶将目标基因和质粒连接。将重组质粒导入大肠杆菌时，因成功率问题，大肠杆菌有四种可能：导入了重组质粒,(,可在含氨苄青霉素培养基上生长，但不能在含四环素培养基上生长,),、导入了质粒,(,既能在含氨苄青霉素培养基上生长，也能在含四环素培养基上生长,),、导入了环状目标基因或未转化,(,既不能在含氨苄青霉素培养基上生长，也不能在含四环素培养基上生长,),。,答案,(1),限制性核酸内切酶和,DNA,连接酶,(2),氯化钙,(3),没有导入质粒或重组质粒,(4)b,、,c,(5),大肠杆菌合成丝素蛋白轻链,(Fibl),第27页,4.,人血清蛋白,(HSA),含有主要医用价值。下列图是以基因工程技术获取重组,HSA(rHSA),两条路径。,(1),假如,HSA,基因序列未知，能够采取,_,方法获取该目标基因，为了使目标基因能够在宿主细胞中复制和稳定保留，通常要先构建,_,后才能导入宿主细胞。,(2),方框中,“,？,”,普通选取生物是,_,，为了提升,过程导入成功率，通惯用,_,处理大肠杆菌。,第28页,(3),人体合成初始,HSA,多肽，需要经过膜系统加工形成正确空间结构才能有活性，所以选择,_,路径,(,填,或,),获取,rHSA,更有优势。,(4),为了判定宿主细胞中是否产生,rHSA,，能够用,_,方法来进行检验。,A.,检验,HSA,基因是否导入,B.,检验细胞中是否产生对应,mRNA,C.,抗原,抗体杂交,D.,检测是否有标识基因,第29页,解析,(1),若目标基因序列已知，可用化学方法合成目标基因或用,PCR,技术扩增目标基因；若目标基因序列未知，可从基因文库中获取。目标基因不能够直接导入受体细胞，而是必须与载体构建重组,DNA,分子后再导入，以使目标基因能够在宿主细胞中复制和稳定保留。,(2),假如受体细胞是植物细胞，普通选取农杆菌转化法导入目标基因；为增加大肠杆菌细胞壁通透性，利于目标基因导入，需用氯化钙处理大肠杆菌。,(3),大肠杆菌属于原核生物，细胞内缺乏内质网、高尔基体，无法对合成初始,HSA,多肽进行加工。,(4)rHSA,是一个抗原蛋白，能够利用对应抗体进行检测。,答案,(1),从基因文库中提取重组,DNA,分子,(2),农杆菌氯化钙,(3),(4)C,第30页,基因工程操作,“,五步曲,”,(1),获取目标基因,若目标基因序列已知，可用化学方法合成或用,PCR,扩增；若目标基因序列未知，可从基因文库中分离。,第31页,(2),形成重组,DNA,分子,通常是用相同限制性核酸内切酶分别切割目标基因和载体,DNA,，形成相同粘性末端，然后用,DNA,连接酶将目标基因和载体,DNA,连接形成重组,DNA,分子,(,以下列图,),。但在实际操作中，可形成,3,种不一样连接物：目标基因,载体连接物、载体,载体连接物、目标基因,目标基因连接物。,第32页,因为同种限制性核酸内切酶切割目标基因和载体,DNA,所得粘性末端全部相同，在,DNA,连接酶作用下，目标基因和载体,DNA,则可任意连接。为了使目标基因与质粒能定向连接，可使用两种不一样限制性核酸内切酶切割目标基因和质粒,(,以下列图,),。,第33页,(3),将重组,DNA,分子导入受体细胞,受体细胞,植物细胞,动物细胞或原生质体,微生物,惯用方法,农杆菌转化法,显微注射技术,CaCl,2,处理法,转化过程,目标基因插入Ti质粒TDNA上导入农杆菌侵染植物细胞目标基因稳定维持和表示,将重组DNA分子提纯显微注射入受体细胞培养、发育取得含有新性状生物,CaCl2处理增大细胞壁通透性重组DNA分子与处理后受体细胞混合重组DNA分子进入受体细胞,第34页,(4),筛选含有目标基因受体细胞,筛选原因：并不是全部细胞都接纳了重组,DNA,分子，还有部分细胞接纳了载体,载体连接物、目标基因,目标基因连接物，甚至有细胞既没有接纳重组,DNA,分子，也没有接纳载体,载体连接物、目标基因,目标基因连接物。,筛选方法：主要是利用载体上抗生素抗性基因作用借助一定方法,(,如影印接种,),用选择培养基筛选。,(5),目标基因表示,若目标基因成功表示，则转基因生物细胞中会产生对应蛋白质,(,可用抗原,抗体法检测,),，转基因生物会表现对应性状,(,如可接种病原体观察转基因生物抗性,),。,第35页,考点,3,结合植物克隆考查科学实践能力,5.,下面是关于植物克隆问题。请回答：,(1),为培育能高效吸收和富集重金属镉转基因植物，将野外采得某植物幼叶消毒后，用酶混合液处理，取得了原生质体。酶混合液中含有适宜浓度甘露醇，其作用是,_,。,(2),将目标基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再经过,_,得到分散胚性细胞，发育成,_,，生长发育后取得转基因植株。,第36页,(3),愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性表示能力，以下原因错误是,_,。,A.,愈伤组织发生染色体畸变,B.,愈伤组织不能分散成单细胞,C.,愈伤组织中激素平衡发生改变,D.,愈伤组织对外源激素敏感性发生改变,第37页,解析,(1),甘露醇能够维持溶液渗透压，以预防失去细胞壁原生质体吸水胀破。,(2),将愈伤组织放在摇床上，经过液体悬浮培养能够得到分散单细胞，这些单细胞含有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等胚性细胞特征，胚性细胞发育成胚状体，深入形成植株。,(3),在长久培养过程中，愈伤组织可能发生染色体畸变、内部激素平衡改变、对外源激素敏感性改变等改变，而丧失细胞全能性表示能力。,答案,(1),维持渗透压,(2),液体悬浮培养胚状体,(3)B,第38页,6.,植物叶肉细胞原生质体分离和培养主要过程可用下列图所表示图解简单表示，请据图回答以下问题：,(1),培育胚状体利用了,_,这一项生物技术，胚状体再继续培养，则可培育出完整植株，这表达了植物细胞,_,。,(2),要取得植物叶肉细胞原生质体，需要在,_,溶液环境下，用,_,酶和,_,酶去除细胞壁。,第39页,(3),培养基中除了含有一定营养外，还必须含有,_,等植物激素，还需要对培养基进行严格,_,。,(4),假如愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生，为了取得三七次生代谢产物，则只需要培养到,_,。假如愈伤组织是棉花叶肉细胞培养产生，经过基因工程要获取抗虫棉，重组,DNA,分子导入棉花愈伤组织细胞惯用方法是,_,法。,(5),从叶片叶肉细胞到取得胚状体过程中，必须要经过,_(,不定项选择：,A.,有丝分裂,B.,减数分裂,C.,原生质体融合,D.,脱分化,E.,再分化,),。,第40页,解析,(1),离体植物细胞经过脱分化形成愈伤组织，经过再分化形成含有根和芽胚状体，再经过细胞分裂、分化发育成一个完整植株。该技术称为植物组织培养，其原理为植物细胞全能性。,(2),制备叶片原生质体酶混合液中，普通含较高浓度甘露醇，其目标是防止制备原生质体吸水胀破；依据酶专一性，去除植物细胞壁需用纤维素酶和果胶酶。,(3),培养基成份包含水、无机盐、维生素、氨基酸、蔗糖、植物激素,(,生长素和细胞分裂素等,),等；培养基要求进行严格灭菌。,(4),三七细胞产物为细胞代谢产物，将三七叶肉细胞培养到愈伤组织即可；目标基因导入植物细胞惯用农杆菌转化法。,(5),离体叶肉细胞培养到胚状体过程中必须经过脱分化和有丝分裂形成愈伤组织，再分化和有丝分裂形成胚状体。,答案,(1),植物组织培养全能性,(2)0.5,0.6 mol/L,甘露醇纤维素果胶,(3),细胞分裂素、生长素灭菌,(4),愈伤组织农杆菌转化,(5)ADE,第41页,植物细胞培养、器官培养和原生质体培养统称为植物组织培养，最终都能得到完整植株，但因为培养目标不一样，有时需对愈伤组织进行特殊处理。它们之间关系如图所表示：,第42页,考点,4,动物克隆,7.,(,浙江,“,超级全能生,”,联考,),如图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体相关过程，请回答相关问题：,第43页,(1),过程,常应用,_,方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身不一样组织或器官，说明这些细胞含有,_,性。,(2),该过程利用了甲细胞含有,_,能力，甲和乙细胞可经过生物诱导剂,_,作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去,_,小鼠成纤维细胞特定培养体系中培养，最终产生大量细胞群，这种方法为,_,法。,(3),以下关于经,和,过程得到单克隆抗体叙述，错误是,(,),A.,该过程应用了细胞膜含有流动性原理,B.,丙细胞要含有分泌各种抗体能力,C.,该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术,D.,丙细胞形成先经过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验,答案,(1),显微注射发育全能,(2),连续增殖,(,灭活,),仙台病毒增殖力克隆培养,(3)B,第44页,8.,(,金丽衢十二校联考,),生物技术已经渗透到了我们生活方方面面。请回答以下相关动物细胞培养相关问题：,(1),动物细胞培养原理是,_,，需要将培养瓶放入,_,培养。,(2),培养过程中需要用胰蛋白酶消化组织中,_,。,(3),传代培养得到细胞系往往含有,_,核型。关于细胞系和细胞株以下说法错误是,_(A.,原代培养得到细胞也能够是细胞系,B.,细胞株是特殊细胞系,C.,连续细胞系都取得了不死性,D.,连续细胞系不一定都发生了转化,),。,(4),细胞克隆又称为克隆培养法，它最主要用途之一就是从普通细胞系中分离出,_,突变细胞系。,答案,(1),细胞增殖,CO,2,培养箱,(2),胶原纤维,(3),异倍体,D,(4),缺乏特殊基因,第45页,(1),原代培养、传代培养,含义,二者界定,原代培养,从机体取出后马上进行细胞、组织培养,严格地说，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶就是传代培养。有时为了方便，也将最初若干次传代归入原代培养范围,传代培养,将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、繁殖,第46页,(2),细胞株、细胞系,种类,起源,特点,细胞系,有限细胞系,由二倍体细胞传代培养建成,有接触抑制；不能连续培养,连续细胞系,由传代细胞连续培养建成,发生了转化，多数含有异倍体核型；有些含有异体致瘤性；有些含有不死性，但不致癌,细胞株,有限细胞株,经过一定选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中取得含有特殊性质细胞,传代次数有限,普通含有恒定染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特征等,连续细胞株,可连续屡次传代,第47页,(3),单克隆抗体制备中两次筛选,项目,第一次筛选,第二次筛选,筛选原因,诱导融合后得到各种杂交细胞，另外还有未融合细胞,因为小鼠在生活中受到各种抗原刺激，所以经选择性培养取得杂交瘤细胞中有能产生其它抗体细胞,筛选方法,用特定选择培养基筛选。其中未融合细胞和同种细胞融合后形成细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)才能生长,用多孔培养皿培养，在每个孔中只有一个杂交瘤细胞情况下开始克隆化培养和抗体检测，经屡次筛选得到能产生特异性抗体细胞群,筛选结果,得到杂交瘤细胞,得到能分泌特异性抗体杂交瘤细胞,第48页,
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