狂犬朊粒.ppt

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,狂犬病病毒,(Rabies Virus),犬,狗具有忠诚、勇敢两大天性，为人类作出了许多有益的事，如看门、猎守、劳役、侦察、破案。,沙皮犬世界上最珍贵的犬种之一,威尔斯柯基犬,英国王室的宠物,法兰德斯牧牛犬,牧牛犬、导盲犬、警卫犬、搜索犬,患狂犬病的病狗图,英国伦敦皇家医学院,巴斯德,死亡之谜,李寻欢，,55,岁，农民，因肌肉高度紧张和唾液分泌过多而入院。他妻子说他最近出现发热和寒颤，身体虚弱，拒绝进食，因不明原因脾气暴躁，难以自控。他是一个,狂热的户外运动者和洞穴探险者,。病人入院后不久，便有吞气症、,恐水症,和癫痫发作，神志清醒和幻觉交替。,4,天后，病人死亡，常规血和脑脊液细菌培养均为阴性。大脑尸检表明有,内基小体,的存在。,属弹状病毒科,(Rhabdoviridae),狂犬病病毒属,(Lyssavirus),的一种,嗜神经性,病毒。,引起狂犬病,一种古老的传染病,古希腊的雅典和我国古代医师晋代葛洪和唐代孙思邈对此都有详尽的叙述。,18,世纪狂犬病在欧洲流行猖獗,病死率极高。,19,世纪,(1895,年,),法国著名学者巴斯德首创用减毒病毒疫苗预防接种,以防止本病发生。,1904,年,Negri,在狂犬脑中发现内基小体,作为诊断指标之一。,20,世纪,60,年代病毒的结构和形态被揭示,。,概 况,巴斯德取出疯狗的脊髓做试验，证明疯狗脊髓也能引起狂犬病，且其毒性与存放的时间成反比，,存放的时间越长、毒性越低,，到第十四天，毒性基本消失。于是他把这些,脊髓磨成浆汁,，注射到狗和兔子的身上，这些狗和兔子果然对狂犬病有了免疫力。,生物学性状,基因组,:,不分节段的单负链,RNA,长约,12kb,其排列顺序为,:,3-,先导序列,N,M,1,(N,S,),M,2,(M),G,L,-5,(,:4,个长度不等非转录的基因连接区,),编码蛋白,:5,种结构蛋白,狂犬病病毒结构模式图,M1,、,M2,蛋白：,衣壳和包膜的基质,L,蛋白：,聚合酶,G,蛋白：,病毒刺突,与致病性有关,N,蛋白：,核蛋白,保护,RNA,病毒复制,血清型,:,现用单抗分,6,型,血清,1,型为经典狂犬病毒,其它,5,型为狂犬病相关病毒。,易感动物范围广,在胞质内形成嗜酸性包涵体,称,内基小体,(Negri body),。,Negri body(,大脑海马回锥体细胞,),野毒株,(wild strain),或街毒株（,street strain,）,:,从自然感染的动物体内分离到的病毒。,固定毒株,(fixed strain):,将野毒株在家兔脑内连续传代后，病毒对家兔致病的,潜伏期,可以随传代次数的增加而逐渐缩短；传代至,50,代左右时，潜伏期可由原来的,4,周左右缩短为,4,天,6,天；但继续进行传代，潜伏期不再缩短。这种变异的狂犬病病毒被称为固定毒株（,fixed strain,）,.,重要特点,:,是对家兔的致病性增强，对人或犬的致病性明显减弱；并且从脑外途径对犬进行接种时，不能侵入脑神经组织引起狂犬病。,用于制备疫苗,。,变 异,抵抗力,对热、紫外线、日光、干燥的抵抗力弱,加温,501,小时、,605,分钟即死。,易被强酸、强碱、甲醛、碘、乙醇、,肥皂水,及离子型和非离子型去污剂灭活。,4,可保存,1,周，如置,50%,甘油中于室温下可保持活性,1,周。,可于鸡胚中培养,人二倍体细胞、地鼠肾细胞、鸭胚细胞中培养增殖,培 养,疫苗,致病性和免疫性,以侵犯中枢神经系统为主，病死率近乎,100%,。,地理分布广泛,，全球除南极洲和大洋州外均有流行，世界上死于狂犬病的人,99%,在热带地区。东南亚、东欧、中东、北非、中非、中南美洲均有流行；西欧和北美的国家和地区，人狂犬病很少见。我国是狂犬病流行较为严重的国家，主要在农村。,全年均可发生,以春夏和夏秋季稍多。男多于女,农村青少年较多，多与接触动物有关。,病犬,(80%-90%),，少数来自野生动物。,储存宿主和传播媒介的动物多达,30,余种。,狂犬病是人畜共患的急性传染病,，病毒主要在野生动物,(,狼、狐狸、臭鼬、蝙蝠和浣熊等,),及家畜,(,犬和猫,),中传播。,多数动物发病后死亡，少数病后成为病毒携带者,蝙蝠、鼠类、犬等感染后为无症状携带者，为重要传染源。,外观健康家犬平均带毒率,14.9%(8-25%),传染源,提醒大家引起重视,狂犬病并非必须有野狗咬伤史,;,狂犬病中,88%,是由豢养宠物引起,最多的是宠物狗,2%,是由猫引起,;,生食狗肉,增加了患病机会,;,沾有狗体液的手去触摸眼睛和嘴唇可感染病毒。,传播途径,:,病毒主要通过咬伤传播，,其次为经抓伤、舔伤的粘膜和皮肤侵入。,少数通过对病犬宰杀等感染。,人被蝙蝠咬伤或吸入蝙蝠洞内的空气而患狂犬病。,易感性,:,自然界所有温血动物均敏感而易患。人被病犬咬伤后的发病率为,15-30%,，被病狼咬伤后为,50-60%,。若及时伤口处理和接种疫苗，发病率可降至,0.15%,。,被狂犬咬伤的部位和程度,被咬伤者的健康状态、抵抗力的强弱,救治措施是否及时合理,人被狂犬咬伤以后是否发病,该狂犬所带狂犬病病毒的毒力大小,进入人体内病毒的多少,与发病相关的因素,发病机制,狂犬病毒,咬伤处,1-3,月,入侵机体,肌纤维细胞,增殖,沿,神经轴索,上行至中枢神经系统,在,中枢神经细胞,大量增殖，引起损伤,沿,周围神经,离心性扩散,造成,非神经组织感染,:,唾液腺,泪腺,角膜,鼻粘膜,皮脂腺，,心肌,骨骼肌,肺,肝和肾等,不引起病毒血症,狂犬病,rabies,一词意为“胡说、乱骂”,患者常表现为：,发热、头痛、乏力；,异常兴奋、狂躁，,恐风恐水,；,不认亲人，,咬人,、学狗的姿态；,局部感觉异常；,步态蹒跚如醉汉；,咽喉肌、呼吸肌痉挛，继之流涎、会厌麻痹，呼吸衰竭、停止，在极度痛苦中死去,临床表现,潜伏期,:,一般为,1-3,月,(5,日,-19,年或更长,),临床分型,:,狂躁型,麻痹型,;,狂躁型临床分期,:,前驱期,:,低热,头痛,恶心,全身不适等,类似感冒。,兴奋期,:,极度恐惧,恐水怕风。,在饮水、见水、流水声或谈及饮水时可引起严重咽喉肌痉挛，称为,“恐水症”。,麻痹期,:,全身迟缓性瘫痪,由安静进入昏迷状态,因呼吸循环衰竭死亡。,全病程一般不超过,6,日。,免疫性,细胞免疫,：,杀伤性,T,细胞,特异性作用于病毒的蛋白抗原，引起病毒溶解；单核细胞产生的,IFN,和,IL-2,具有抑制病毒复制和抵抗病毒攻击的作用,中和抗体,：,中和游离状态的病毒、阻断病毒进入神经细胞内的作用。,人患狂犬病，根据被动物,咬伤史,并结合典型的,临床症状,可做出诊断。,但人被犬或其他动物咬伤后，检查,动物,是否患有狂犬病，对采取防治措施极为重要。,微生物学检查,微生物学检查,检查动物,:,隔离观察,7-10,天不发病,可排除,;,发病则处死,取海马回组织切片检查抗原和,内基小体,。患者可作唾液、尿沉渣抗原抗体检测。,捕杀野犬,管理家犬,注射犬用疫苗（饲养员）。,伤口处理,:,20%,肥皂水,0.1%,新洁尔灭或清水,反复冲洗,再用,70%,酒精及碘酒涂擦。,防治原则,疫苗接种,:,灭活疫苗,(,原代地鼠肾细胞或二倍体细胞,),于咬伤后第,0,、,3,、,7,、,14,、,28,天各肌注,1ml,效果好。全程免疫后,7,10,天出现中和抗体，并保持免疫力,1,年左右。,被动免疫,:,高效价特异抗血清侵润性注射及,肌注，剂量,40 IU/kg,配合疫苗使用效果更佳。,24h,内接种最好，最晚不要超过,72h,朊病毒,(,prion,),1996,年,春天英国蔓延的“,疯牛病,”，它不仅引起英国一场空前的经济和政治动荡，而且也波及了整个欧洲，加上法国,克雅氏综合症,（人类的一种朊病毒病）患者增多，人们很自然与食用来自英国的进口牛肉相联系，因而引起极大恐慌。,早在三百年前，人类在,绵羊,和,小山羊,中首次发现了感染朊病毒病的患病动物。因患病动物的,奇痒难熬,，常在粗糙的树干和石头表面不停摩擦，以致身上的毛都被磨脱，而被称为“,羊搔痒症,”。该病广泛传播于欧洲和澳洲，潜伏期为,18,26,个月，患病动物,兴奋、搔痒、瘫痪直至死亡,。,后来又相继发现了传染性水貂脑软化病、马鹿和鹿的慢性消瘦病、猫的海绵状脑病等。,人类朊病毒病研究最早的是,库鲁病,（,“Kuru”,在该部落意为“恐惧”或“寒颤”），患者总数约为,3,万，以女性和未成年儿童居多。,美国医学家,盖杜赛克,曾在该地区进行,20,年研究，探明该病的发生的原因，为此获得了,1976,年诺贝尔医学奖。,库鲁病,朊粒感染机体后，经过长达数十年的潜伏期后，引起的一种进行性小脑退行性疾病，一旦发病，一年内（69个月）内死亡。,巴布亚,新几内亚东部高地的土著,部落有食用已故亲人的脏器以示怀念！,英国每年确诊的,BSE,病例数,累计病例,:176,143,截止,2000,年,3,月,1989,1988,1993,1992,1991,1990,1996,1997,1998,1999,1995,1994,2000,来源于英国农业部,病例数,到,2003,年,22,国家在本土牛中发现,BSE,UK,1986,(182 581)1443 in 2000;1202 in 01;,755 in 02,Ireland,1989(1150),Switzerland,1990(420),France,1991(692),Portugal,1994(699),Belgium,1997(98),Netherlands,1997(52),Luxembourg,1997(2),Liechtenstein,1998(2),Denmark,2000(10),Germany,2000(235),Spain,2000(210),Italy,2000(56),Greece,2001(1),Czech,Repub,2001(2),Slovakia,2001(10),Japan,2001(5),Slovenia,2001(2),Finland,2001(1),Austria,2001(1),Poland,2002(4),Israel,2002(1),朊粒的基本成分,PrP,SC,构象异常的朊蛋白（,Prion,protein,PrP,）分子量为,27000,30000,，构成朊粒的基本单位。,与已知病毒特征明显不同；不具有病毒结构，,未检出核酸。,本身无感染性，由,3,个,PrP,分子构成的,朊粒单体,有极强的感染性。,从感染动物脑组织分离和纯化的,Prion,是由,蛋白酶抗性蛋白,组成的多聚体。,PrP,抵抗力,强,PrP,对甲醛、过氧化氢、高锰酸盐、,乙醇、蛋白酶,k,等具有抗性,高压灭菌,202Kpa,134,1h,灭活。,病原体所在,自然发生的感染，病原体主要存在于病牛的,脑组织、脊髓,和,眼睛的视网膜,里。通过实验还发现，在病牛的,小肠、骨髓,和,脊背神经节,内也存在疯牛病因子。,起因与传播,疯牛病的发生可能是因为给牛喂养了含有患,瘙痒病,的羊的各种组织制成的,肉骨粉,而引起。这种通过喂养肉骨粉提供牲畜蛋白质的方式已经被普遍采用,数十年,了。,大量可能带有疯牛病因子的,饲料,及危险性,牛制品,的出口是疯牛病流行的主要原因。,正常人,PrP,基因位于第,20,号染色体的短臂,全长为,759bp,，编码,253,个,aa,的正常,PrP,（,cellular,prion,protein,）。,广泛表达于脊椎动物，与神经系统功能的维持、淋巴细胞信号转导、核酸代谢等有关。,正常,PrPPrP,C,PrP,C,与,PrP,SC,的氨基酸序列相同,2,、对蛋白酶敏感性不同,PrP,C,敏感，,PrP,SC,具抗性,1,、分子构型不同,PrP,C,PrP,SC,个,螺旋 个,螺旋,没有,折叠 个,折叠,致病机理,以,折叠为主的,对蛋白酶,K,抵抗的,具有感染能力的,不溶性,PrP,SC,。,以,螺旋为主的,对蛋白酶,K,敏感的,不具有感染能力的,可溶性,PrP,C,转变成,PrP,sc,的传染过程,少量,PrP,SC,与细胞,PrP,C,结合,以,PrP,SC,为模板，,PrP,C,发生明显构象改变,PrP,C,全部转变成不溶性的,PrP,SC,大量,PrP,SC,从细胞释放,在脑组织中聚合组成特殊的淀粉样斑块,海绵状脑病,死亡,PrP,sc,的增殖,PrP,SC,的扩增和致病过程对分子生物学基本原则的挑战,Anfinsen,原理（蛋白质折叠）,中心法则,DNA,RNA,Protein,所致疾病,Human diseases:,震颤病或库鲁病,克,-,雅病,(CJD),格斯特曼综合症,致死性家族失眠症,Animal diseases:,羊瘙痒病,牛海绵脑病（疯牛病）,大耳鹿慢性消耗病,传染性貂脑病,prion,病共同特征,潜伏期长,（平均,28,年），一旦出现症状半年到一年,100%,死亡，引起中枢神经系统的慢性退化性疾患。,病理学特点,是大脑皮质和小脑的神经元退化,空泡变性，形成淀粉样斑块、死亡。,临床症状：,出现痴呆、共济失调、震颤等症状，随即昏迷死亡。,海绵状病变及周围的沉淀斑 淀粉样蛋白沉淀,病人大脑组织切片,分子病理学变化,牛脑组织提取液中含有大量的异常纤维,(SAF),，可用,电镜负染技术,观察到。,免疫性,患者不产生免疫应答,Prion,病传播,传染病,：同一种属间、跨种属屏障传播。,食物、输血等医源感染、母婴垂直传播,遗传病,：约,10%,具家族性，与,PrP,基因突变连锁,散发病例,：偶见单发个案,微生物检验,电镜,：羊瘙痒病相关纤维（,SAF,）是朊粒感染的标志之一。,神经病理检查,：,海绵状空泡、神经元消失、淀粉样斑块,免疫学方法,：免疫印迹法或免疫组化检测,PrP,基因检测,：,20,号染色体，找出突变位点。,Prion,分离,：用转（,PrP,）基因小鼠分离，属慢发病毒需,200,天以上,吃牛肉要选择,未受感,染的产地的牛肉，以及避免吃,内脏,。,无治疗方法,防治原则,中国对,BSE,采取的措施,1990.6.1,关于严防牛海绵状脑病传入我国的通知,1992.6.11,关于禁止用反刍动物源性饲料饲喂反刍动物的通知,1992.6.11,关于公布,中华人民共和国进境动物一、二类传染病、寄生虫病名录,和,中华人民共和国禁止携带、邮寄的动物、动物产品和其他检疫物名录,的通知,1996.3.29,关于重申严防牛海绵状脑病传入我国的通知,1996.7.12,关于严防搔痒病传入我国的通知,1996.8.13,关于严防搔痒病传入我国有关问题的通知,1997.3.19,关于搔痒病传入我国的补充通知,1999.8.18,关于加强对进口饲用油脂和动物性饲料经营和使用管理的通知,2000.12.30,关于加强肉骨粉等动物性饲料产品管理的通知,2001.3.14,关于进口牛源性医药品的管理措施,性状,病毒,Prion,感染性,+,+,核酸,+,-,形态学鉴定,（电镜）,+,-,福尔马林灭活,+,-,电离辐射、紫外线照射敏感性,敏感,不敏感,CPE,+,-,性状,病毒,Prion,蛋白酶,K,敏 感,（某些）,不敏感,蛋白特性,:,加热,80,变性,稳定,潜伏期,根据病毒而不同,长,诱发免疫应答,+,-,诱导产生干扰素,+,-,引起炎症反应,+,-,病毒与,prion,的比较,复习思考题,1.,试述狂犬病毒的特性。,2.,狂犬病毒的致病机理如何？为何狂犬病又名恐水症？,3.,邻居家的小孩被病狗咬伤后,应该如何处理？,Thank You!,