实验九微生物的浓度测定-显微直接计数法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验九,微生物的浓度测定,血球技术板,主讲教师 雒晓芳,一、目的要求,1,明确血细胞计数板计数的原理,2,掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。,二、基本原理,微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。,显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。,血细胞计数板,血细胞计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有,4,条槽而构成,3,个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数室，计数室的刻度有两种：一种是一个大方格分成,16,个中方格（,中方格用三线隔开,），而每个中方格又分成,25,个小方格；另一种是一个大方格分成,25,个中方格（,中方格之间用双线分开,），而每个中方格又分成,16,个小方格。但无论是是哪一种规格的计数板，它们都有一个共同特点，即每一个大方格都由,400,个小方格组成。每一个大方格边长为,1mm,，则每一个大方格的面积为,l mm2,，每个小方格的面积为,1/400mm2,。盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为,0.1mm,，所以每个计数室的容积为,0.1mm3,（万分之一毫升），每个小方格的容积为,1/4000mm3,。,三、实验材料,酵母菌液,显微镜、血球计数器,3.,盖玻片、毛细管等,酵母菌,显微直接计数,四、实验内容,一,.,酵母菌数量的检测（显微镜直接计数法）,注意事项,:,取样时先要摇匀菌液,;,加样时计数室不可有气泡产生。,B.,调节显微镜光线的强弱适当。,1.,取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。,2.,取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。,3.,静止,5min,后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。,4.,在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上,16,（或,25,）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每,mL,菌液中的含菌数。,四、实验内容,5.,计算方法：,6.,注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。,7.,计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内,。,（,X1+X2+X3+X4+X5,）,5,X 25,（或,16,）,X 10 X 1000 x,稀释倍数,酵母菌细胞数,/mL=,四、实验内容,五、实验报告,1,、结果记录：,将计数结果记录下表。,A,表示五个中方格中的总菌数。,B,稀释倍数为,10,2,。,注,:1 mL,菌液总数,=A/52510,4,B=510,7,A,五、实验报告,1,、思考题：,（,1,）,在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？,（,2,）根据你的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？,（,3,）某单位要求知道一种干酵母粉的活菌存活率，请设计,1-2,种可行的检测方法。,